VALIDACION DE UNA METODOLOGIA ANALITICA PARA LA DETERMINACION DEL CONTENIDO DE HIERRO EN MUESTRAS DE SULFATO DE ALUMINIO GRANULADO TIPO B, POR

MEDIO DE LA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION ATOMICA

ALEJANDRO TORRES AGUIRRE

TRABAJO DE GRADO Requisito parcial para optar al titulo de tecnlogo qumico

DIRECTOR DEL PROYECTO OLGA INES VALLEJO

UNIVERSIDAD TECNOLOGICA DE PEREIRA FACULTAD DE TECNOLOGIAS ESCUELA DE TECNOLOGIA QUIMICA PEREIRA / RISARALDA 2009

TABLA DE COMTENIDO

Pg. DEFINICIONES JUETIFICACION ANTECEDENTES 1 1.1. 1.2. 2. 2.1. 2.1.1 2.1.2 2.1.3. 3. 3.1. 3.1.1 3.1.2 3.1.3 3.1.4 OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL OBJETIVOS ESPECIFICOS ASPECTOS GENERALES SULFATO DE ALUMINIO ESPECIFICACION EL MATERIAL REQUISITOS FISICOS REQUISITOS QUIMICOS MARCO TEORICO GENERALIDADES SOBRE VALIDACION QUE ES LA VALIDACION DE METODOS? POR QUE ES NECESARIA LA VALIDACON DE METODOS? CUANDO DEBEN VALIDARSE LOS METODOS? QUIEN REALIZA LA VALIDACION DE METODOS? 17 18 18 20 20 22 22 23 23 9 13 15 15 15 17 17

3.2 3.2.1. 3.2.2. 3.2.3. 3.2.4. 3.2.5 4. 4.1 5. 5.1. 5.1.1. 5.1.2. 5.1.3. 5.2 5.3 5.4 5.4.1 5.4.2 5.4.3

ESPCTROMETRIA DE ABSORCION ATOMICA PRINCIPIO FUNDAMENTO INSTRUMENTACION APLICASIONES INTERFERENCIAS METODOLOGIA CONDICIONES DE TRABAJO DATOS EXPERIMENTALES MATERIALES REACTIVOS EQUIPOS MATERIAL DE VIDRIO PREPRACION DE SOLUCIONES MADRE PREPARACION DE PATRONES MUESTRAS DE ANALISIS PREPARACION DE LAS MUESTRAS NATURALES M1 Y M2 PREPARACION DE LAS SOLUCIONES ESTANDAR 0,9C Y 0,09C PREPARACION DE LAS SOLUCIONES ENRIQUECIDAS M1+A1 y
M2+A2

25 25 25 27 29 32 37 37 40 40 40 41 41 42 42 44 45 47

48 52 52 69 70 70

6. 6.1 6.1.1 6.1.2 6.1.3

RESULTADOS Y ANALISIS CURVAS DE CALIBRACION DEL METODO MEDIA DE LOS BLANCOS DESVIACION ESTANDAR PARA LOS BLANCOS LIMITE DE DETECCION DEL METODO

6.1.4 6.1.5 6.1.6 7. 8.

LIMITE DE CUANTIFICACION DEL METODO CALCULO DE LA EXACTITUD SENSIBILIDAD CONCLUSIONES RECOMENDACIONES

71 72 74 76 78 79

BIBLIOGRAFIA

LISTA DE TABLAS

Tabla 1: Tabla 2: Tabla 3: Tabla 4: Tabla 5:

Requisitos qumicos del sulfato de aluminio. Datos para la curva de calibracin nmero 1 del mtodo Datos para la curva de calibracin nmero 2 del mtodo. Absorbancias obtenidas en el anlisis de los 6 lotes. Concentraciones en mg/L de hierro obtenidas en el anlisis de los 6 lotes.

Tabla 6:

Concentraciones en mg/L de hierro corregidas por el factor de dilucin.

Tabla 7:

Tabulacin de los datos de concentracin de hierro en mg/L, para el anlisis estadstico por parte del Software Validar 1.1.

Tabla 8: Tabla 9:

Prueba para verificar si las desviaciones estndar son aceptables. Clculo de la sumatoria de las columnas L y la sumatoria de las columnas x para la solucin estndar 0,9C.

Tabla 10:

Datos para la evaluacin de la recuperacin de la adicin estndar A1.

Tabla 11:

Datos para la evaluacin de la recuperacin de la adicin estndar A2.

Tabla 13:

Resumen de los atributos del mtodo.

DEFINICIONES

Recuperacin

La recuperacin es la capacidad que tiene un procedimiento analtico para determinar cuantitativamente una especie qumica que ha sido adicionada a una muestra.

Varianza

Medida de dispersin, igual a la suma de los cuadrados de las desviaciones de las observaciones con respecto a su promedio, dividido por el nmero de observaciones menos uno, la cual expresa que cuanto mayor sea esta medida, menos representativa de la realidad ser la media de dicha variable.

Media

La media es el promedio aritmtico de las observaciones, o sea, el cociente entre la suma de todos los datos y el nmero de ello. Se puede decir entonces, que la media es una forma de resumir la informacin de una distribucin suponiendo que cada observacin tendra la misma cantidad de la variable. Desviacin estndar

La desviacin estndar, tambin conocida como desviacin tpica, es una medida de dispersin usada en estadstica que nos dice cunto se desvan los datos de su media, o sea nos dice cuanto tienden a alejarse los valores puntuales del promedio en una distribucin.

Lmite de deteccin

El lmite de deteccin es la mnima concentracin de analito que se puede detectar en una muestra, pero no necesariamente cuantificar bajo las condiciones estipuladas para el ensayo.

Lmite de cuantificacin

El lmite de cuantificacin es la mnima concentracin de un analito que se puede determinar con aceptable repetibilidad y exactitud bajo las condiciones estipuladas para un ensayo".

Inexactitud

La inexactitud es el porcentaje de error entre el valor terico del analito

adicionado a cada una de las muestras y el valor real.

Exactitud

La

exactitud

es

el

grado

aproximacin

entre

un

valor

obtenido

experimentalmente y un valor real aceptado; normalmente se expresa en trminos de error; se calcula promediando las inexactitudes y haciendo la diferencia con el 100%, que es el valor mximo e exactitud.

Sensibilidad

La sensibilidad es una medida del factor de respuesta del instrumento como una funcin de la concentracin del analito. Normalmente se mide como la pendiente de la curva de calibracin del mtodo. [1]

JUSTIFICACION

El anlisis se considera un proceso mediante el cual se obtiene informacin o resultados a partir de los cuales se toman decisiones. Cada da se realizan millones de mediciones analticas en miles de laboratorios alrededor del mundo en los mbitos ms variados, como por ejemplo, el anlisis de productos manufacturados, anlisis medio-ambientales, anlisis clnicos, anlisis forenses, anlisis qumicos y fsicos, entre otros.

En todos ellos se requiere una confianza en los resultados obtenidos. La validacin de las metodologas analticas, junto con otras actividades encaminadas al aseguramiento de la calidad, permiten conseguir la calidad, otorgando la confianza necesaria, a la vez que confieren un grado elevado de reproducibilidad entre los resultados de los anlisis realizados.

Delante de un problema analtico determinado, idealmente el laboratorio debera acordar con el usuario de los resultados, los requisitos analticos que se precisan. El responsable de la expedicin debe garantizar que el resultado sea trazable y con un nivel de precisin suficientemente elevado para asegurar que el parmetro cumple con la normativa. El responsable del laboratorio sabe tambin que deber utilizar un mtodo analtico que tenga un lmite de cuantificacin por debajo del valor mnimo permitido. Por lo tanto, los requisitos analticos para un uso especfico determinan los parmetros o criterios de

calidad del mtodo a utilizar, entre los cuales figuran la exactitud, la sensibilidad, el lmite de deteccin, el lmite de cuantificacin, al igual que la representatividad en la toma de muestras.

La validacin de mtodos analticos permite determinar las caractersticas de operacin, ventajas, limitaciones, confianza, y seguridad del mtodo analtico y la calidad de los resultados, as tambin como disminuye el nmero de fallas y repeticiones. [2]

La empresa Qumica Integrada S.A. produce sulfato de aluminio a partir de bauxita, fundamentando su proceso de manufactura en la norma de calidad ISO 9001 versin 2000, lo cual garantiza un alto grado de calidad en sus productos (Bauxita y diferentes formas de sulfato de aluminio respectivamente), los cuales son analizados por el laboratorio de anlisis de aguas y alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira. Debido a que el laboratorio no cuenta

hasta el momento con una metodologa validada para la determinacin del contenido de hierro en muestras de sulfato de aluminio granulado tipo B por medio de la espectroscopia de absorcin atmica (EAA), es necesario establecer una validacin para este mtodo con el propsito de que el laboratorio pueda garantizar que ste tiene las capacidades de rendimiento consistentes con las requeridas por la aplicacin, lo cual le permite brindar un servicio de la ms alta calidad, acorde con los estndares manejados por su cliente (la empresa Qumica Integrada S.A).

Es por esto que el presente trabajo pretende establecer la validacin de la metodologa analtica utilizada en el Laboratorio e Anlisis de Aguas y Alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira para la determinacin del contenido de hierro en muestras de sulfato de aluminio granulado tipo B, provenientes de la empresa Qumica Integrada S.A.

El sulfato de aluminio ha sido utilizado histricamente para tratar todo tipo de aguas, ya sea para el consumo humano como para mejorar la calidad de los efluentes industriales o cloacales, en el encolado de papel, como mordiente en tintoreras y otros usos.

El sulfato de aluminio con hierro posee la gran ventaja de actuar con dos cationes y a su vez incorpora una cantidad de slidos en suspensin del orden de uno y medio porcentual que le confiere mayor eficiencia y ms amplios rangos de operacin. La relacin costo-rendimiento real del sulfato de aluminio enriquecido con hierro en todo tipo de condiciones es imbatible.

La importancia del anlisis del hierro presente en el sulfato de aluminio radica en que un ndice elevado de este metal en el sulfato de aluminio no es recomendable, esto se debe a que ste producto es ampliamente utilizado en la potabilizacin del agua para consumo humano, por lo que un exceso de hierro proveniente del sulfato de aluminio puede ser trasferido al agua que se ha de tratar con este producto, lo cual propiciara que los valores normales de este

metal en el agua se elevaran mas all de lo normal, traducindose en un mayor gasto (de dinero) por parte de la planta de tratamiento con el fin de controlarlo.

ANTECEDENTES

La validacin de un mtodo es un proceso riguroso que dependiendo de la tcnica analtica a la que pertenezca (el mtodo), la matriz, el analito, la cantidad de parmetros establecidos y de la logstica empleada para su desarrollo, puede requerir un tiempo ms o menos considerable. [2]

Dentro de los trabajos similares que se han desarrollado en el laboratorio de aguas y alimentos de la universidad tecnolgica se destacan:

VALIDACION PARA EL ANALISIS DE pH, HIERRO, ALCALINIDAD, SOLIDOS SUSPENDIDOS TOTALES Y ALUMINIO, PARA EL

LABORATORIO DE AGUAS Y ALIMENTOS DE LA UNIVERSIDAD TECNOLOGICA DE PEREIRA, (en el cual se incluyen los anlisis de hierro y aluminio por espectroscopia de absorcin atmica).

El

proyecto

dedicado

DOCUMENTAR

REVALIDAR

LOS

PROCEDIMIENTOS PARA EL ANALISIS DE ALCALINIDAD TOTAL Y DUREZA TOTAL EN AGUA, PARA EL LABORATORIO DE AGUAS Y ALIMENTOS DE LA SECRETARIA DE SALUD DEL RISARALDA, (empleando el Software Kalibo),

La

VALIDACION

DE

OCHO

METODOLOGIAS

ANALITICAS

MEDIANRTE EL EMPLEO DEL SOFTWARE KALIBO VERSION 1,2a EN EL LABORATORIO DE AGUAS Y ALIMENTOS DE LA UNIVERSIDAD

TECNOLOGICA DE PEREIRA, (entre ellas nquel por espectroscopia de absorcin atmica).

Se pretende entonces con este trabajo desarrollar metodologas de validacin para el ensayo de hierro en muestras de sulfato de aluminio, usando una metodologa que ya se ha aplicado a otros ensayos que se llevan a cabo en el laboratorio, con lo cual determina las caractersticas de operacin, ventajas, limitaciones, confianza, seguridad del mtodo analtico y calidad de sus resultados, as como disminuir el nmero de repeticiones.

1 OBJETIVOS

1.1 OBJETIVO GENERAL

Validar una metodologa analtica para la determinacin del contenido de hierro en muestras de sulfato de aluminio granulado tipo B, por medio de la espectroscopia de absorcin atmica.

1.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

Definir el rango de concentracin para el desarrollo de la curva de calibracin encaminada a la determinacin del contenido de hierro en muestras de Sulfato de Aluminio Granulado Tipo B por medio de la Espectroscopia de Absorcin Atmica.

Obtener de forma experimental y para las condiciones particulares del Laboratorio de Aguas y Alimentos de la Universidad Tecnolgica de

Pereira los valores de los parmetros estadsticos tales como: media de los blancos, desviacin estndar para el blanco, lmite de deteccin, lmite de cuantificacin, exactitud y sensibilidad por medio del Software Kalibo 1.2a de Validacin de Mtodos Qumicos, desarrollado por Sal Pearanda; qumico del Instituto Nacional de Salud.

Determinar experimentalmente si la metodologa analtica empleando la Espectroscopia de Absorcin Atmica, arroja resultados consistentes

para la determinacin del contenido de hierro en muestras de Sulfato de Aluminio Granulado Tipo B.

Reportar al responsable del Laboratorio de Aguas y Alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira los resultados obtenidos en cada uno de los anlisis realizados de una manera ordenada y coherente.

Desarrollar para el Laboratorio de Aguas y Alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira el anlisis de los resultados obtenidos en cada uno de los anlisis realizados.

2 ASPCTOS GENERALES

2.1 SULFATO DE ALUMINIO

Los trminos alumbre para filtro, alumbre para fabricantes de papel y alumbre comercial hacen referencia a la misma sustancia qumica. El sulfato de aluminio, producido en grandes cantidades tiene la formula Al2(SO4)3nH2O, en donde n tiene aproximadamente 14 aguas de cristalizacin en lugar de 18 que es la verdadera forma cristalina.

2.1.1 ESPECIFICACIN DEL MATERIAL

El sulfato de aluminio se prepara a partir de hidrxido de aluminio, trihidrato de almina o minerales aluminferos, tales como la arcilla y la bauxita por medio de la cual obtiene el producto la empresa Qumica Integrada S.A; para lo cual inicialmente el mineral de aluminio es molido muy finamente y posteriormente se le realiza una digestin con cido sulfrico a temperaturas elevadas. Los materiales insolubles se retiran mediante sedimentacin y la solucin resultante se decanta y se vende en forma lquida o se deja cristalizar en un producto slido, seco e hidratado.

2.1.2 REQUISITOS FSICOS

El cido sulfrico empleado en la reaccin no deber ser residual. El sulfato de aluminio en estado slido deber estar seco, limpio, en forma de terrn, grano o polvo. El sulfato de aluminio en agua corresponde a una solucin saturada del mismo.

2.1.3

REQUISITOS QUMICOS

Los requisitos qumicos de sulfato de aluminio en cuanto al contenido de Al2O3 soluble, hierro soluble, material insoluble y basicidad estn contenidos en la tabla 1.

Tabla 1: Requisitos qumicos del sulfato de aluminio.

SULFATO Requisitos % Al2O3 Mnimo

GRADO PAPEL Solucin de Slido sulfato de aluminio 17,0 8,2

TIPO A Solucin de Slido sulfato de aluminio 17,0 8,0

TIPO B Solucin de Slido sulfato de aluminio 15,2 7,3

Hierro como Fe2O3 % Matera Insoluble % Al2O3 (b) Mnimo

0,008 0,10 0,05

0,004 0,05 0,025

0,75 0,50 0,050

0,4 0,10 (1)

2,0 8,0 0,05

1,2 0,1 (1)

(1) Acordado entre el vendedor y el comprador. [3]

Como se observa dentro de los requisitos qumicos de mayor importancia para el sulfato de aluminio se encuentra el contenido de hierro, lo que muestra la importancia para la presente validacin (hierro como Fe2O3, en el sulfato de aluminio slido tipo B).

3 MARCO TEORICO

3.1 GENERALIDADES SOBRE VALIDACION

Se requieren mtodos analticos fiables para cumplir con las normativas nacionales e internacionales en todas las reas de anlisis. Por lo tanto, est admitido internacionalmente que un laboratorio deba tomar las medidas pertinentes para asegurarse de que es capaz de producir, y de que produce efectivamente, datos con el nivel necesario de calidad. Dichas medidas comprenden:

Utilizacin de mtodos de anlisis validados Utilizacin de procedimientos internos de control de calidad Participacin en ensayos de aptitud; y Obtencin de la certificacin segn una norma internacional,

habitualmente ISO 17025. Cabe resaltar que la certificacin ISO 17025 concierne especficamente el establecimiento de la trazabilidad de las mediciones.

As, la validacin de mtodos es un componente esencial de las medidas que un laboratorio debe implementar para producir datos analticos fiables. Otros aspectos de lo anteriormente dicho han sido tratados por el Grupo de Trabajo de la IUPAC sobre Armonizacin de Mtodos de Garanta de Calidad para Laboratorios Analticos, en particular mediante la elaboracin de protocolos

sobre los estudios (colectivos) de rendimiento de los mtodos y control interno de calidad.

Se han elaborado varios protocolos y directrices de validacin de mtodos e incertidumbres, principalmente por parte de AOAC INTERNATIONAL

(Asociacin de Qumicos Analticos Oficiales), la Conferencia Internacional de Armonizacin (ICH) y en documentos del Eurachem:

El manual de estadstica de la AOAC, que recomienda llevar a cabo estudios en un solo laboratorio antes de realizar ensayos colectivos. El texto1 y la metodologa1 de la ICH, que prescriben los requisitos mnimos del estudio de validacin para las pruebas utilizadas para presentacin de medicamentos para su aprobacin. Cuantificacin de la incertidumbre en las mediciones analticas (2000). La adecuacin al propsito de los mtodos analticos: gua de laboratorio para la validacin de mtodos y temas relacionados (1998). [4]

3.1.1 QUE ES LA VALIDACION DE METODOS?

Es el proceso que se sigue para definir un requisito analtico y confirmar que el mtodo considerado tiene capacidades de rendimiento consistentes con las

requeridas por la aplicacin. La validacin de mtodos ha tendido a concentrarse en el proceso de evaluar los parmetros de rendimiento. Est implcito que los estudios para determinar los parmetros de rendimiento se llevan a cabo mediante equipos que cumplen con las especificaciones, funcionan correctamente y estn adecuadamente calibrados. Igualmente, el operador que realiza los estudios debe ser competente en el campo de trabajo en estudio y debe contar con suficientes conocimientos respecto al trabajo como para poder tomar decisiones apropiadas a partir de las observaciones realizadas a medida que el estudio progrese.

3.1.2 POR QUE ES NECESARIA LA VALIDACON DE METODOS?

Si no se puede confiar en el resultado de un ensayo, entonces este tiene poco valor y dara lo mismo no realizarlo, por otra parte el costo e estas mediciones es alto y se generan costos adicionales a partir de decisiones tomadas con base a resultados errados. La validacin de mtodos permite a los qumicos demostrar que un mtodo es "apropiado", y que el resultado analtico es idneo para el propsito deseado y es confiable para que cualquier decisin basada en l, pueda tomarse con total confianza. 3.1.3 CUANDO DEBEN VALIDARSE LOS METODOS?

Un mtodo debe validarse cuando sea necesario verificar que sus parmetros de rendimiento son adecuados para usarlos en un problema analtico especfico. Por ejemplo en las siguientes circunstancias:

El desarrollo de un nuevo mtodo para un problema especfico. La revisin de un mtodo ya establecido con el fin de incorporar mejoras en l o con el objetivo de ampliarlo para un nuevo problema. Cuando el control de calidad indique que un mtodo ya establecido est cambiando con el tiempo. Cuando un mtodo ya establecido sea usado en un laboratorio diferente o con diferentes analistas o instrumentos. Para demostrar la equivalencia entre dos mtodos; por ejemplo, un mtodo nuevo y el normalizado.

3.1.4 QUIEN REALIZA LA VALIDACION DE METODOS?

El laboratorio que usa un mtodo es el responsable de garantizar que est adecuadamente validado y de realizar, en caso necesario, trabajos adicionales para complementar los datos existentes. Existe mucha literatura y protocolos sobre la validacin de mtodos mediante estudios en colaboracin; sin embargo, cuando a un laboratorio le resulte inconveniente o imposible realizar un estudio en colaboracin, surgen una serie de interrogantes:

Pueden los laboratorios validar mtodos por su cuenta? Y, de ser as, cmo? Los mtodos as validados sern reconocidos por otros laboratorios? Qu tipo de reconocimiento se puede esperar para mtodos internos usados en un medio regulador?

El laboratorio contestar estas preguntas decidiendo qu grado de validacin requiere y qu parmetros de rendimiento del mtodo debe caracterizar con miras a validarlo. Este es un proceso costoso e inevitablemente puede verse restringido por problemas de tiempo y costos. Dicho laboratorio deber demostrar finalmente que los criterios de rendimiento y de confirmacin del mtodo son adecuados en:

Las tolerancias requeridas de todas las mediciones realizadas como parte del mtodo (volumen, temperatura, masa, etctera). Las formas de los analitos medidos, incluyendo su especiacin. Que el efecto de las interferencias haya sido ampliamente identificado y cuantificado. Que se hayan identificado las fuentes significativas de error y los mecanismos adecuados para controlarlas. [5]

3.2 ESPECTROSCOPIA DE ABSORCION ATOMICA

3.2.1 PRINCIPIO

Los principios tericos de la absorcin atmica fueron establecidos en 1840 por Gustav Robert Kirchhoff y Robert Wilhelm Bunsen en sus estudios del fenmeno de autoabsorcin en el espectro de los metales alcalinos y alcalinotrreos.

La base de la espectroscopia de absorcin atmica (EAA), la entrego Kirchhoff al formular su ley general: cualquier materia que pueda emitir luz a una determinada longitud de onda tambin absorber luz a esa longitud de onda. El significado prctico de esto fue recin desarrollado en 1955 por el australiano Walsh, apareciendo los primeros instrumentos comerciales en 1960.

3.2.2 FUNDAMENTO

El tomo consiste en un ncleo de electrones que llenan ciertos niveles cunticos. La configuracin electrnica ms estable de un tomo corresponde a la de menor contenido energtico conocido como estado fundamental. Si un tomo que se encuentra en un estado fundamental absorbe una determinada energa, este experimenta una transicin hacia un estado particular de mayor energa. Como este estado es inestable, el tomo regresa a su estado fundamental inicial, emitiendo una radiacin de una determinada frecuencia. La frecuencia de la energa radiante emitida corresponde a la diferencia de energa

entre el estado excitado (E1) y el estado fundamental (E0) como se encuentra descrito en la ecuacin de Plank: hc

Donde: h c Constante de Planck Velocidad de la luz 6,626069 10 10 Julios/segundo. metros segundo

Frecuencia, dada en segundo

Longitud de onda, dada en metros .

2,997925

Segn la teora atmica, el tomo puede alcanzar diferentes estados (E1, E2, E3,) y de cada uno de ellos emitir una radiacin (1, 2, 3,) caracterstica, obtenindose as un espectro atmico, caracterizado por presentar un gran solamente

nmero de lneas discretas. En absorcin atmica es relevante aquella longitud de onda correspondiente a una trasmisin

entre el estado

fundamental de un tomo y el primer estado excitado y se conoce como longitud de onda de resonancia.

De la ecuacin de Plank, se tiene que un tomo podr absorber solamente radiacin de una longitud de onda (frecuencia) especifica. En absorcin atmica interesa medir la absorcin de esta radiacin de resonancia al hacerla pasar a travs de una poblacin de tomos libres en estado fundamental. Estos

absorben parte de la radiacin en forma proporcional a su concentracin atmica.

La relacin entre absorcin y concentracin se encuentra definida por la ley de Beer-Lambert. Como la trayectoria de la radiacin permanece constante y el coeficiente de absorcin es caracterstico para cada elemento, la absorbancia es directamente proporcional a la concentracin de las especies absorbentes.

3.2.3 INSTRUMENTACION

Los componentes bsicos de un equipo de absorcin atmica son:

Fuente radiante. Atomizador. Monocromador. Detector. Amplificador. Sistema de presentacin.

La fuente radiante ms comn para la medicin de absorcin atmica es la lmpara de ctodo hueco, que consiste en un cilindro relleno con un gas inerte dentro del cual se encuentra el ctodo (construido de metal a analizar) y el nodo. Al aplicar un cierto potencial a travs de los electrodos, esta fuente emite el espectro atmico del metal del cual est construido el ctodo.

En la EAA se utilizan atomizadores con y sin llama para producir tomos libres del metal en el haz de la radiacin. El atomizador con llama est compuesto de un nebulizador y un quemador. La solucin de la muestra es convertida primero a un fino aerosol, y luego llevada a la llama que entrega la energa suficiente para evaporar el solvente y descomponer los compuestos qumicos resultantes en tomos libres en su estado fundamental.

Las mezclas de gases ms usados para producir la llama adecuada son: aire/propano, aire/acetileno y oxido nitroso/acetileno. Generalmente, la eleccin depender de la temperatura requerida para la disociacin de los compuestos y de las caractersticas qumicas del elemento a determinar.

En los atomizadores de llama-atomizacin electrotrmica con horno de grafito el vapor atmico se genera en un tubo de grafito calentado electrnicamente, en cuyo interior se ubica la muestra. Estos atomizadores presentan diversas

ventajas, como una alta eficiencia en generar vapor atmico, permite el empleo de pequeos volmenes de muestra y anlisis directo de muestras slidas.

Los

espectrofotmetros

de

absorcin

atmica

poseen

generalmente

monocromadores de red que permiten aislar una lnea

de resonancia del

espectro emitido por la lmpara de ctodo hueco. Como detector se emplea un fotomultiplicador que produce una corriente elctrica la cual es proporcional a la intensidad de la lnea aislada por el monocromador. Un amplificador selectivo

amplifica la seal pasando luego a un dispositivo de lectura que puede ser un voltmetro digital, un registrador u otros.

3.2.4 APLICACIONES

La EAA constituye una de las tcnicas ms empleadas para la determinacin de ms de 60 elementos en una gran variedad de muestras. Entre algunas aplicaciones tenemos el anlisis de: aguas, muestras geolgicas, muestras

orgnicas, metales y aleaciones, petrleo y sus subproductos; y de una amplia gama de muestras de industrias qumicas y farmacuticas.

La espectroscopia de absorcin atmica con llama es el mtodo ms empleado para la determinacin de metales en una amplia variedad de matrices. Su popularidad se debe a su especificidad, sensibilidad y facilidad de operacin. En este mtodo la solucin muestra es directamente aspirada a una llama de flujo laminar. La llama tiene como funcin generar tomos en su estado fundamental, de los elementos presentes en la solucin muestra. Temperaturas cercanas a los 1500 - 3000 C son suficientes para producir ato mizacin de un gran nmero C de elementos, los que absorben parte de la radiacin proveniente de la fuente luminosa.

Desde el inicio, en 1955,

de la espectroscopia de absorcin atmica como

mtodo de anlisis, hubo un nuevo mpetu de desarrollar sistemas de atomizacin con llama, a dems de existir un inters continuo en conocer el

mecanismo mediante el cual la solucin muestra es convertida en vapor atmico en la llama. El resultado fue el desarrollo de un quemador con un cabezal de ranura, obtenindose de este modo un camino ptico alargado atreves de la llama, lo que proporciona una mayor sensibilidad del mtodo. Estos de premezclado de

quemadores emplean generalmente una cmara

combustible/oxidante en combinacin con un sistema para aspirar la solucin muestra a la llama.

El nmero de tomos generados en su estado fundamental en la etapa de atomizacin, determinara la cantidad de radiacin absorbida. Diferentes tipos de cabezales son utilizados dependiendo del tipo de llama a emplear. Estos se construyen de titanio para darle una resistencia al calor y a la corrosin, siendo los ms empleados los de 10 cm de ranura simple (llama acetileno/aire), 10 cm de ranura triple para soluciones con alto contenido de slidos y cabezal de 5 cm. (llama acetileno/oxido nitroso).

El tiempo necesario para la atomizacin de una muestra depender de la velocidad de entrada de los gases en la llama y se expresa con la altura de la llama, de modo que la medicin de la absorcin se debe realizar una zona en la que la atomizacin sea completa.

La llama debe ser en lo posible transparente, es decir, no debe absorber parte de la radiacin proveniente de la lmpara. En general la llama debe poseer una alta eficiencia en la produccin de tomos libres y sta debe evitar tambin que

ocurran reacciones del elemento a determinar con productos de la combustin de los gases empleados o con otros componentes de la muestra.

La llama aire/acetileno es la ms empleada, debido a que ofrece para muchos elementos un medio ambiente y temperatura suficientes para la atomizacin. La llama oxido nitroso/acetileno (2900-3000 C) permite la determinacin de aquellos elementos que no permite determinar la llama aire/acetileno como el Al, Si, Ti, entre otros. Como producto de su baja velocidad de combustin, esta llama energtica ofrece un medio ambiente qumico, trmico y ptimo favorable, pero posee desventajas: numerosos elementos son ionizados y muestran una emisin relativamente fuerte.

La llama hidrogeno/argn es usada para la determinacin de As, Se, Cd y Zn. Su gran ventaja es su alta transparencia en el ultravioleta, ideal para la determinacin de As y Se. Sin embargo, se debe contar con grandes

interferencias, debido a la menor temperatura de la llama.

En la espectroscopia de la absorcin atmica la concentracin de un elemento en una muestra se determina por comparacin de la absorbancia de la solucin muestra con la absorbancia de soluciones patrn de concentracin conocida. Si cualquier constituyente de la muestra altera uno o ms pasos en el proceso de formacin de tomos en su estado fundamental en la llama, llevara a un error en la medicin de la concentracin.

3.2.5 INTERFERENCIAS

Se considera aqu la influencia de diversos factores sobre la absorbancia atmica del elemento a determinar y la forma de evitar dichos efectos. Las interferencias que se pueden producir en la espectroscopia de absorcin atmica se clasifican en: fsicas, qumicas y espectrales.

3.2.5.1

INTERFERENCIAS FSICAS:

Este tipo de interferencias est relacionado con la efectividad con que la solucin es transportada a la llama y son causadas por diferencias en las propiedades fsicas de las soluciones: viscosidad, tensin superficial o presin de vapor.

Un ejemplo de estas interferencias se observa en la determinacin de Mg y Cu en presencia de cido fosfrico. A mayor concentracin de H3PO4 la viscosidad de la solucin aumenta, disminuyendo la velocidad de aspiracin de ella y una fraccin menor llega a la llama, producindose una absorbancia menor de la muestra.

Tambin la presencia de solventes orgnicos produce este tipo de interferencias debido a un aumento en la eficiencia de la nebulizacin (menor viscosidad y menor tensin superficial), lo que produce un aumento de la absorbancia.

Una forma de compensar este tipo de interferencia es preparar las soluciones estndar con los mismos componentes de la matriz de la solucin problema.

3.2.5.2

INTERFERENCIAS QUMICAS

Interferencia qumica es cualquier alteracin en el nmero total de tomos libres formados por unidad de volumen debido a la formacin de compuestos qumicos termoestables. Las causas ms comunes de stas son:

i.

Disociacin incompleta de la molcula formada o formacin de una sal difcil de fundir.

El efecto del fosfato en la determinacin de calcio es un ejemplo de este tipo de interferencia. El calcio con el fosfato forman el fosfato de calcio, el cual se transforma en pirofosfato de calcio, que es relativamente estable en una llama aire/acetileno. As la cantidad de tomos libres de calcio generados en la llama ser menor que la obtenida con una solucin de calcio de igual concentracin, pero sin presencia de fosfato, provocando una disminucin de la seal.

Existen otros componentes refractarios que dan tambin una disminucin de la seal de absorcin del elemento de inters. Tal es el caso de silicatos, aluminatos y pirosulfatos de calcio, magnesio, estroncio y bario.

ii.

Reaccin espontnea de los tomos libres con otros tomos o radicales presentes en el medio ambiente.

Esta interferencia es causada por la formacin de xidos e hidrxidos u ocasionalmente carburos o nitruros, debido a la reaccin de los tomos libres con los productos de la combustin de la llama. Aproximadamente unos 30 metales no se pueden determinar con llama aire/acetileno (ejemplo: aluminio, silicio, boro, elementos lantnidos, etc.). La magnitud de la interferencia va a depender del tipo de estequiometra de la llama.

Las interferencias qumicas pueden ser minimizadas por las siguientes formas:

Empleo de llamas con mayores temperaturas. Como ejemplo tenemos la llama acetileno/xido nitroso, la que es capaz de descomponer totalmente los compuestos refractarios. Agregar a la solucin muestra un elemento buffer, el cual forma con el elemento interferente un compuesto ms estable que con el elemento a determinar. El ejemplo ms conocido es la adicin de lantano o estroncio en la determinacin de calcio en presencia de fosfato. Preparacin de las soluciones estndar de modo tal que su composicin sea lo ms semejante con la de la solucin problema. Esta alternativa es difcil de aplicar debido a que requiere un conocimiento completo de la muestra.

3.2.5.3

INTERFERENCIAS ESPECTRALES

En este tipo de interferencias, la radiacin del elemento a determinar es directamente influenciada, existiendo interferencias espectrales de lnea e interferencias espectrales de banda:

Las

interferencias

espectrales

de

lnea

ocurren

cuando

hay

superposicin de dos lneas atmicas o cuando stas no son resueltas por el monocromador.

Un ejemplo para el primer caso se tiene en la determinacin de trazas de zinc en una matriz de hierro, debido a que la lnea de absorcin del hierro (213.86 nm) se superpone a la lnea de resonancia del zinc (213.86 nm).

El empleo de lmparas multielementales fabricadas con una combinacin inadecuada de elementos puede producir interferencias del segundo tipo, si dentro de la banda espectral del monocromador se encuentra una lnea de resonancia de otro elemento junto a la del elemento a determinar.

En general este tipo de interferencias no son frecuentes debido a la naturaleza muy especfica de la longitud de onda que se usa en espectroscopia de absorcin atmica. Si se llegan a presentar se pueden eliminar seleccionando una segunda lnea de resonancia del elemento de inters (probablemente se obtenga mayor sensibilidad o empleando una ranura del monocromador ms angosta).

Las interferencias espectrales de banda se producen debido a la absorcin de la radiacin por molculas o radicales, y por dispersin de la radiacin por slidos. Para ambos efectos, que en principio son distintos, se emplea el trmino absorcin de fondo. Aqu existe una prdida de radiacin no especfica que lleva a absorbancias mayores que la absorbancia obtenida por el analito. La seal est compuesta por la absorcin del elemento a determinar ms la absorcin no especfica.

La absorcin molecular ocurre cuando una especie molecular en el atomizador posee un perfil de absorcin que se superpone al del elemento de inters. El espectro molecular del hidrxido de calcio muestra un mximo de absorcin en la lnea de resonancia del bario.

Este problema es ms serio en la regin espectral bajo los 250 nm, donde concentraciones altas de metales alcalinos y de otras sales muestran una alta absorcin molecular.

La dispersin de la luz ocurre cuando partculas de slidos causan una deflexin de parte de la radiacin de la fuente fuera del eje del sistema monocromadordetector. Estos problemas son relevantes con muestras conteniendo altas concentraciones de elementos refractarios.

4 METODOLOGIA

4.1 CONDICIONES DE TRABAJO

Para el desarrollo de la presente validacin es necesario la preparacin de una curva de calibracin que conste de como mnimo de cinco estndares de calibracin (para la presente validacin se realizaron dos curvas de calibracin). Esta(s) curva(s) se usa(n) para obtener el valor de la pendiente que es el valor de la sensibilidad del mtodo. Los datos de la curva se ingresan en el Software Kalibo 1.2a, el cual realiza el anlisis estadstico de datos y reporta el valor de pendiente, entre otros.

Es necesaria tambin la preparacin de seis lotes conformados por:

Dos blancos constituidos por agua desionizada ms

un volumen

determinado de una solucin de KCl al 25% y cido clorhdrico concentrado (37%), para eliminar interferencias, denominadas BK1 y BK2 respectivamente. Dos patrones de 0,9C y 0,09C (donde C es el valor mximo de concentracin permitido por la Norma Tcnica Colombiana NTC 531 del 29 de noviembre 1995). [3]

Dos muestras naturales de Sulfato de Aluminio Granulado Tipo B, denominadas M1 y M2 respectivamente. Dos muestras con adiciones conocidas, nombradas M1+A1 y M2+A2 respectivamente.

Estas cuarenta y ocho muestras representan seis lotes que deben ser analizados en das diferentes que pueden ser continuos o alternos, con una diferencia mxima de tres das entre un ensayo y otro (viernes-lunes).

Los resultados arrojados por el anlisis mediante la espectroscopia de absorcin atmica para estas cuarenta y ocho muestras son ingresados en el Software Kalibo el cual se apoya en el Software Validar 1.1 que proporciona los valores de los atributos del mtodo tales como:

Media de los blancos. Desviacin estndar para el blanco. Lmite de deteccin. Lmite de cuantificacin. Exactitud. Sensibilidad.

Nota: para el desarrollo de la presente validacin se sigui el Instructivo de Validacin de Metodologas Analticas elaborado por el Laboratorio de Aguas y Alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira. [7]

5 DATOS EXPERIMENTALES

5.1 MATERIALES

A continuacin se enumeran los materiales que fueron necesarios para la realizacin de la presente validacin, entre los cuales se encuentran reactivos, equipos y material de vidrio.

5.1.1 REACTIVOS

Agua desionizada. Solucin de cloruro de potasio (KCl) al 25%: Se disuelven 25 g cloruro de potasio, en agua desionizada, en un baln volumtrico de 100 ml y se afora a volumen. Acido clorhdrico (HCl), concentrado. Densidad: 1190 kg/m3, (solucin 37%). Punto de fusin: 247 K (-26 C). Punto de ebullicin: 321 K (48 C). Viscosidad: 1,9 Solucin patrn de hierro de 1000 mg/L.

5.1.2 EQUIPOS

Espectrofotmetro absorcin atmica (EAA). Lmpara de ctodo hueco de hierro. Estufa de calentamiento. Cabina de extraccin de gases. Equipo de filtracin al vaco. Balanza analtica de precisin.

5.1.3 MATERIAL DE VIDRIO

Matraces aforados de 100, 250, 500, 1000 ml. Pipetas volumtricas de 5 y 10 ml. Beaker de 100 y 250 ml. Erlenmeyer con desprendimiento lateral. Bureta de 50 ml. Crisol gooch.

5.2 PREPRACION DE SOLUCIONES MADRE

Solucin madre de 100 mg/L de hierro

Esta solucin se prepara tomando un baln volumtrico de 500 ml, al cual se le adiciona 50 ml de una solucin patrn de hierro de 1000 mg/L y se afora a volumen con agua desionizada.

Solucin madre 10 mg/L de hierro Se toman 50 ml de la solucin madre de 100 mg/L en un baln volumtrico de 500 ml y se afora a volumen con agua desionizada.

5.3 PREPARACION DE PATRONES PARA LA CURVA DE CALIBRACION

Para la realizacin de la curva de calibracin del mtodo se procede a preparar la siguiente serie de patrones:

Patrones (2) de 0,0 mg/L (blancos) Dos blancos conformados por agua de desionizada mas los reactivos para eliminar las interferencias (2,0 ml de una solucin de KCl al 25% y 1,0 ml de acido clorhdrico al 37 %).

Patrn de 1,0 mg/L Se toman 10 ml de solucin madre de 10 mg/L de hierro en un baln volumtrico de 100 ml, se adicionan 2,0 ml de solucin de KCl al 25 % y 1,0 ml de acido clorhdrico al 37 % y se afora.

Patrn de 2,0 mg/L Se toman 20 ml de solucin madre de 10 mg/L de hierro en un baln volumtrico de 100 ml, se le adicionan 2,0 ml de solucin de KCl al 25 % y 1,0 ml de acido clorhdrico al 37 % y se afora.

Patrn de 4,0 mg/L Se toman 40 ml de solucin madre de 10 mg/L de hierro en un baln volumtrico de 100 ml, se le adicionan 2,0 ml de solucin de KCl al 25 % y 1,0 ml de acido clorhdrico al 37 % y se afora.

Patrn de 5,0 mg/L (patrn de calibracin) Se toman 50 ml de solucin madre de 10 mg/L de hierro en un baln volumtrico de 100 ml, se le adicionan 2,0 ml de solucin de KCl al 25 % y 1,0 ml de acido clorhdrico al 37 % y se afora.

Patrn de 6,0 mg/L Se toman 60 ml de solucin madre de 10 mg/L de hierro en un baln volumtrico de 100 ml, se le adicionan 2,0 ml de solucin de KCl al 25 % y 1,0 ml de acido clorhdrico al 37 % y se afora.

Patrn de 7,0 mg/L Se toman 70 ml de solucin madre de 10 mg/L de hierro en un baln volumtrico de 100 ml, se le adicionan 2,0 ml de solucin de KCl al 25 % y 1,0 ml de acido clorhdrico al 37 % y se afora.

Patrn de 8,0 mg/L Se toman 80 ml de solucin madre de 10 mg/L de hierro en un baln volumtrico de 100 ml, se le adicionan 2,0 ml de solucin de KCl al 25 % y 1,0 ml de acido clorhdrico al 37 % y se afora.

5.4 MUESTRAS DE ANALISIS

Tratamiento de la muestra Inicialmente se debe eliminar la humedad de la muestra de sulfato de aluminio granulado tipo B, para lo cual se toma una cantidad representativa (aproximadamente 10 g) y se lleva a una estufa durante dos horas, posteriormente se deja enfriar en el desecador, despus de lo cual se tritura finamente. Se toman por duplicado muestras con un peso de alrededor 2,0 g

(registrando su peso exacto) en un beaker de 250 ml y se adiciona un poco de agua destilada caliente, se calienta otro poco para disolver la muestra, se agita por cinco minutos ms, y finalmente se filtra al vaco en un erlenmeyer que debe contener 0,5 ml de cido sulfrico concentrado, y la solucin resultante se afora a 500 ml en un baln volumtrico.

5.4.1 PREPARACION DE LAS MUESTRAS NATURALES M1 Y M2

Despus de tratamiento de la muestra, se deben realizar las diluciones necesarias con el fin de que la concentracin de las dos muestras que se deben

tomar se ubiquen dentro del rango de concentracin de los patrones, para lo cual previamente se deben hacer los clculos tericos necesarios para

posteriormente determinar la concentracin real en mg/L de hierro en las muestras de sulfato de aluminio.

Clculos tericos Teniendo en cuenta la concentracin mxima permitida de Fe2O3 en el sulfato de aluminio granulado tipo B, regulada por la Norma Tcnica Colombiana NTC 531 [3], la cual establece que esta no debe superar el 2,0 %. Sabiendo esto, se halla la concentracin de hierro en mg/L en el sulfato de aluminio para una muestra hipottica que contiene el mximo porcentaje permitido de Fe2O3.

Concentracin terica de hierro (Fe) en mg/L en el sulfato de aluminio granulado tipo B

. .

2,0

0,5 /

2,0 100

2 3

1 159,7

2 3 2 3

111,7 1 2 3

1000 1

55,9505

Ahora sabiendo que una muestra de sulfato de aluminio granulado tipo B, debe tener como mximo una concentracin de aproximadamente 56 mg/L de hierro; se procede a realizar una curva de calibracin apropiada para obtener la concentracin real de hierro en las muestras sulfato de aluminio tomadas para

realizar esta validacin, para lo cual se preparan una serie de patrones que cubran un rango de concentracin en torno a los 56 mg/L; como por ejemplo: 20, 40, 50, 60, 70, y 80 mg/L.

Se optimizan los parmetros experimentales tales como la posicin el quemador, alineacin de la lmpara, relaciones de combustible-oxidante y velocidad de nebulizacin, segn las instrucciones del analista del laboratorio; se aspira y se mide la absorbancia del blanco, los patrones de referencia y las muestras, despus de lo cual se determina que la primera muestra tiene una

concentracin de 25,1880 mg/L de Fe, y la segunda muestra tiene una concentracin de 27,0030 mg/L de Fe. Posteriormente se preparan las muestras de sulfato de aluminio granulado tipo B, realizando las respetivas diluciones si es necesario.

Dilucin de la muestra natural M1 La primera muestra denominada M1 con una concentracin inicial de 25,1880

mg/L se prepara tomando 130,8 ml (con bureta), se adicionan 2,0 ml de una solucin de KCl al 25 % y 1,0 ml de acido clorhdrico al 37 % y se afora a 250 ml en un baln volumtrico, quedando con una concentracin aproximada de 13,18 mg/L, posteriormente esta muestra es diluida dos veces para que quede ubicada en el rango de concentracin de de los patrones (1, 2, 4, 5, 6, 7 y 8 mg/L).

Dilucin de la muestra natural M2

La segunda muestra denominada M2 con una concentracin inicial de 27,1880 mg/L se prepara tomando 53,2 ml (con bureta), se adicionan 2,0 ml de una solucin de KCl al 25 % y 1,0 ml de acido clorhdrico al 37 % y se afora a 250 ml en un baln volumtrico, quedando con una concentracin aproximada de 5,75 mg/L.

5.4.2 PREPARACION DE LAS SOLUCIONES ESTANDAR 0,9C Y 0,09C

Conociendo las concentraciones reales de la muestras de sulfato de aluminio (25,1880 y 27,0030 mg/L) se toma el valor de la concentracin mayor (27,0030 mg/L) estableciendo este como el valor de C para la preparacin de las

soluciones estndar 0,9C y 0,09C

Las soluciones estndar 0,9C y 0,09C son solo una sugerencia que no es necesario cumplir con exactitud, funcionan como gua; con lo cual se busca un margen de error bajo en la preparacin de los patrones, por lo que pueden usarse valores aproximados a los tericos.
0,9 0,9 27,1880 / 24,3027 /

0,09

0,09

27,1880

2,43027

Teniendo en cuenta lo anteriormente citado se aproximan estos valores de concentracin a valores enteros que son ms convenientes a la hora preparar las soluciones, por ejemplo: 0,9
28 / 0,09 3 / .

Preparacin de la solucin estndar 0,9C (28 mg/L) Se toman 28 ml de solucin madre de 100 mg/L en un baln volumtrico de 100 ml, se adicionan 2,0 ml de una solucin de KCl al 25 % y 1,0 ml de acido clorhdrico al 37 % y se afora a volumen; posteriormente esta solucin es diluida diez veces para que quede ubicada dentro del rango de concentracin de los patrones de referencia (1, 2, 4, 5, 6, 7 y 8 mg/L).

Preparacin de la solucin estndar 0,9C (3 mg/L) Se toman 30 ml de solucin madre de 10 mg/L en un baln volumtrico de 100 ml, se adicionan 2,0 ml de una solucin de KCl al 25 % y 1,0 ml de acido clorhdrico al 37 % y se afora a volumen.

5.4.3 PREPARACION DE LAS SOLUCIONES ENRIQUECIDAS M1+A1 y M2+A2

Las soluciones enriquecidas constan de una muestra natural de sulfato de aluminio (M1 y M2) a las cuales e les ha adicionado un volumen determinado de una solucin (A1 y A2) que contienen una concentracin conocida del analito en estudio, para lo cual se hace uso del concepto de volmenes aditivos, el cual establece que el volumen total de una solucin es igual a la suma de los volmenes parciales, lo cual se expresa como:
1 1 2 2 1 2

Donde: 1 1 2 2 1 2 1 2 1 2 1 2

. .

1000 2 2,

/ 1

. 1 1 2 2.

Preparacin de la solucin enriquecida M1+A1 Para la preparacin de las muestras enriquecidas se trata de gastar la mnima cantidad de solucin estndar de 1000 mg/L de hierro, para lo cual se toman 5 ml para la preparacin de ambas soluciones M1+A1 y M2+A2. Para la preparacin de la solucin enriquecida M1+A1 se deben tomar por medio de una bureta 1,2 ml de los 5 ml tomados anteriormente de la solucin estndar

de 1000 mg/L y se adiciona por medio de otra bureta 98,8 ml de la muestra natural M1 con lo cual se obtiene una solucin M1+A1 con una concentracin de:
. 1 1

0,0988

13,18 / 0,0988

0,0012 0,0012

1000

25,0218

Posteriormente esta solucin es diluida cinco veces para que quede ubicada en el rango de concentracin de de los patrones de referencia.

Preparacin de la solucin enriquecida M2+A2 Para la preparacin de la solucin enriquecida M2+A2 se toman por medio de una bureta 2,1 ml de los 5 ml tomados anteriormente de la solucin estndar de 1000 mg/L y se adiciona por medio de otra bureta 97,9 ml de la muestra natural M2 obtenindose una solucin M2+A2 con una concentracin de:
,
26,6292 /

. .

2 2 2

Posteriormente esta muestra es diluida dos veces con lo cual quedar ubicada dentro del rango de concentracin de los patrones de referencia.

6 RESULTADOS Y ANALISIS

6.1 CURVAS DE CALIBRACION DEL METODO

Tabla 2: Datos para la curva de calibracin nmero 1 del mtodo.

La tabla 2 muestra los datos de concentracin y absorbancia para realizar la curva de calibracin nmero 1 del mtodo.

PATRON 1 2 3 4 5 6 7 8

CONCENTRACION (mg/L) 0,0000 1,0000 2,0000 4,0000 5,0000 6,0000 7,0000 8,0000

ABSORBANCIA 0,000 0,083 0,149 0,282 0,346 0,412 0,472 0,521

Tabla 3: Datos para la curva de calibracin nmero 2 del mtodo.

La tabla 3 muestra los datos de concentracin y absorbancia para realizar la curva de calibracin nmero 2 del mtodo.

PATRON 1 2 3

CONCENTRACION (mg/L) 0,0000 1,0000 2,0000

ABSORBANCIA 0,000 0,074 0,144

4 5 6 7 8

4,0000 5,0000 6,0000 7,0000 8,0000

0,277 0,337 0,409 0,468 0,513

Tabla 4: Absorbancias obtenidas en el anlisis de los 6 lotes.

La siguiente tabla presenta las absorbancias obtenidas para las 48 muestras, las cuales se encuentran divididas en 6 lotes.

MUESTRA BK 1 BK 2 0,9C 0,90C M1 M2 M1+A1 M2+A2

LOTE 1 0,002 0,001 0,131 0,130 0,293 0,256 0,234 0,239

LOTE 2 0,002 0,002 0,128 0,137 0,303 0,259 0,233 0,236

LOTE 3 0,001 0,003 0,130 0,140 0,304 0,267 0,242 0,246

LOTE 4 0,003 0,002 0,135 0,140 0,304 0,267 0,255 0,243

LOTE 5 0,004 0,003 0,131 0,142 0,307 0,270 0,242 0,243

LOTE 6 0,003 0,005 0,132 0,142 0,307 0,269 0,248 0,245

Para el anlisis de resultados, es necesario tabular los datos de concentracin obtenidos mediante la espectroscopia de absorcin atmica y posteriormente introducirlos en el Software Kalibo con el fin de que ste arroje los resultados experimentales del analito en estudio. de

Tabla 5: Concentraciones en mg/L de hierro obtenidas en el anlisis de los 6 lotes.

La siguiente tabla presenta las concentraciones obtenidas para las 48 muestras, las cuales se encuentran divididas en 6 lotes analizados durante 6 das.

MUESTRA BK 1 BK 2 0,9C 0,09C M1 M2 M1+A1 M2+A2

LOTE 1 0,0000 0,0000 2,8503 3,0594 6,5610 5,7356 5,2288 5,2124

LOTE 2 0,0000 0,0000 2,7422 2,9592 6,6389 5,6586 5,0907 5,1605

LOTE 3 0,0000 0,0000 2,7347 2,9461 6,5109 5,7789 5,1682 5,2384

LOTE 4 0,0000 0,0000 2,8767 2,9963 6,6151 5,7954 5,5325 5,2792

LOTE 5 0,0000 0,0000 2,7511 2,9888 6,6033 5,7947 5,1684 5,2104

LOTE 6 0,0000 0,0000 2,7683 2,9902 6,5987 5,7665 5,3060 5,2420

Tabla 6: Concentraciones en mg/L de hierro corregidas por el factor de dilucin.

La tabla 6 reporta las concentraciones en mg/L de hierro corregidas por el factor de dilucin correspondiente para cada una de las 48 muestras analizadas durante los 6 das de ensayos.

Media X

MUESTRA (BK 1) (BK 2) (0,9C) 10 = (0,09C) (M1) 2 = (M2) (M1+A1) 5 = (M2+A2) 5 =

LOTE 1 0 0 28,5026 3,0594 13,1221 5,7356 26,1439 26,062

LOTE 2 0 0 27,4217 2,9592 13,2777 5,6586 25,4535 25,8027

LOTE 3 0 0 27,3468 2,9461 13,0218 5,7789 25,8414 26,1922

LOTE 4 0 0 28,7618 2,9963 13,2303 5,7954 27,6623 26,3959

LOTE 5 0 0 27,5114 2,9888 13,2067 5,7947 25,8418 26,0519

LOTE 6 0 0 27,6833 2,9902 13,1975 5,7665 26,5299 26,2102

(GMC) 0 0 27,8713 2,0990 13,1760 26,2455 5,7550 26,1192

Para hallar la fila de concertacin (GMC) se realiza el promedio de las concentraciones, su abreviatura GMC indica Gran Media Corregida y se calcula mediante la siguiente frmula:

Tabla 7: Tabulacin de los datos de concentracin de hierro en mg/L, para el anlisis estadstico por parte del software validar 1.1.

Los datos tabulados en la tabla 7 deben ser ingresados en el Software

Validar

1.1 con el fin de saber si las desviaciones estndar son aceptables y si la recuperacin del mtodo es o no satisfactoria.

Constantes M1 MUESTRA LOTE1 BK1 0,0000 BK2 0,0000 0.9C 28,5026 0.09C 3,0594 M1 13,1221 M1 5,7356 M1+A1 26,1439 M2+A2 26,0620 Constantes M2

13,18 LOTE2 0,0000 0,0000 27,4217 2,9592 13,2777 5,6586 25,4535 25,8027 5,75

1000 LOTE3 0,0000 0,0000 27,3468 2,9461 13,0218 5,7789 25,8414 26,1922 1000

1.2 LOTE4 0,0000 0,0000 28,7618 2,9963 13,2303 5,7954 27,6623 26,3959 2,1

98.8 LOTE5 0,0000 0,0000 27,5114 2,9888 13,2067 5,7947 25,8418 26,0519 97,9

LOTE6 0,0000 0,0000 27,6833 2,9902 13,1975 5,7665 26,5299 26,2102

Donde:

es la concentracin en mg/L de la muestra de sulfato de aluminio sin adicin. es la concentracin en mg/L de la solucin usada para la adicin (CSA). es el volumen en ml de CSA usado para la adicionar. es el volumen en ml de la muestra natural de sulfato de aluminio a la cual se le har la adicin.

Nota: CSA es la concentracin en mg/L de la solucin usada para la adicin, es decir, el volumen que se va a adicionar de C.

Tabla 8: Prueba para verificar si las desviaciones estndar son aceptables.

La tabla 8 reporta los valores de Se, St, GMC y W, necesarios para verificar si las desviaciones estndar son aceptables o no.

BLANCO
St = Se, (St = Sd) para el testigo St = Se + Sd St Concentracin (GMC) W (meta a alcanzar) 0,05 GMC St < W ?
2 2 2

0,9C
Se

0,09C
Se

M1
Se

M2
Se

M1+A1
Se

M2+A2
Se

Sd

0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 -

0,6056
0.3667 0.6056 27.8713 1.3936

0,0393
0.0015 0.0393 2.0990 0.1495

0,0910
0.0083 0.0910 0.6588

0,7813
0.6104 0.7813 1.3123

0,0521
0.0027 0.0521 5.7550 0.2877

0,1991
0.0396 0.1991 26.1192 1.3060

13.1760 26.2455

SI

SI

SI

SI

SI

SI

La ltima fila, St<W? es el anlisis de resultados de la tabla que realiza el software automticamente. Es positivo en el caso que W sea mayor que St. Es negativo en el caso que W sea menor que St. 0,05 0,05 27,871 1,394

DONDE: .

. .

Para obtener los valores de la tabla 8 el Software realiza el siguiente tratamiento estadstico, resumido a continuacin mediante un ejemplo:

Tabla 9: Clculo de la sumatoria de las columnas L y la sumatoria de las columnas x para la solucin estndar 0,9C.

La tabla 9 presenta el clculo de la sumatoria de las filas L y la sumatoria de las columnas x para la solucin estndar 0,9C, necesarios para realizar un ejemplo de cmo realiza el tratamiento estadstico el Software Kalibo 1.2a.

Prueba 1 Prueba 2 Columnas L

LOTE1 28,503 28,503

LOTE2 27,422 27,422

LOTE3 27,347 27,347

LOTE4 28,762 28,762

LOTE5 27,511 27,511

n=1 m=6

LOTE6 27,683 27,683 L2 x2 L2/n (L) ( 2/mxn

Suma de Filas 167,228 167,228 4662,679 4662,679 4662,679 4660,845

n = numero de replicas. m = numero de lotes.

Donde:

L representa la sumatoria de los valores de concentracin para cada lote, de la solucin estndar 0,9C. X representa la sumatoria de los valores de concentracin para todos los lotes, de la solucin estndar 0,9C.

Nota: los datos usados para este ejemplo son los de la tabla 7 que corresponden a la solucin estndar 0,9C.

FUENTES DE VARIACION: 4662,679 1 167,228 1 6 1,834 0,000

4662,679

4662,679 1,834

4662,679

4660,845

GRADOS DE LIBERTAD:

1 1

6 6

6 2 1

DONDE:

CUADRADOS MEDIOS: 1,834 5 0,367

# DIV/0!
DONDE:

. .

VALORES PARA LA TABLA 8: 0,3667 0,606

 0,6055

# DIV/0!

0,606

0,367

DONDE: . .

Tabla 10: Datos para la evaluacin de la recuperacin de la adicin estndar A1.

La tabla 10 presenta los datos necesarios para la evaluacin de la recuperacin de la adicin estndar A1 para la muestra natural M1.

MUESTRA ADICIONADA (M1+A1) - MUESTRA SIN ADICION M1 PRUEBA M1+A1 M1 (M1+A1)-M1=A1 (A1)
2

LOTE 1 26,1439 13,1221 13,0218 169,5673

LOTE 2 25,4535 13,2777 12,1758 148,2501

LOTE 3 25,8414 13,0218 12,8196 164,3421

LOTE 4 27,6623 13,2303 14,4320 208,2826

LOTE 5 25,8418 13,2067 12,6351 159,6458

LOTE 6 26,5299 13,1975 13,3324 177,7529

La recuperacin es la capacidad que tiene un procedimiento analtico para determinar cuantitativamente una especie qumica que ha sido adicionada a una muestra.

La varianza , se calcula llevando a cabo las siguientes operaciones, utilizando los valores de A1 tabulados en la tabla 11.

1027,8408

78,4167 6

0,7717

Calculo de la recuperacin: 1 6 78,4167 6 13,0690 13,07

1,2

10

1000 / 13,18 98,8 1,2 10

11,8418

11,84

Donde:

es la concentracin en mg/L de la muestra de sulfato de aluminio sin adicin. es la concentracin en mg/L de la solucin usada para la adicin (CSA). es el volumen en ml de CSA usado para la adicionar. es el volumen en ml de la muestra natural de sulfato de aluminio a la cual se le har la adicin.

Nota: CSA es la concentracin en mg/L de la solucin usada para la adicin, es decir, el volumen que se va a adicionar de C.

Calculo de los parmetros A y B: , 1,05 , 0,7717 6 2,01 13,0670 13,07

11,8418

, 0,95 11,842

, 0,7717 6 2,01 10,6150 10,62

El siguiente esquema se utiliza para verificar si la recuperacin de la adicin estndar A1 es satisfactoria o no.

A=13,07 R=13,07 d=11,84

B=10,62 R/d=1,104

R/d>=0,95

SI R/d<=1,05

NO R>=B

SI RECUPERACION SATISFACTORIA

NO R<=A

NO RECUPERACION NO SATISFACTORIA

SI RECUPERACION SATISFACTORIA

SI RECUPERACION SATISFACTORIA

NO RECUPERACION NO SATISFACTORIA

La primera celda a observar en este esquema es la que indica el valor de R/d y a continuacin se debe responder a las preguntas que hace el cuadro con base en ese resultado. Es decir, si R/d>=0,95 es verdadero y R/d<=1,05 tambin es verdadero, entonces la recuperacin es satisfactoria. recuperacin De lo contrario se pueden presentar las siguientes situaciones, para las cuales se deben tener en cuenta los valores de R/d, A y B.

a) Se debe entonces responder respondersi R>=B, en el caso de que esto sea =B, afirmativo la recuperacin es satisfactoria. b) Se debe responder R<=B, en el caso afirmativo la recuperacin es respondersi satisfactoria.

Tabla 11: Datos para la evaluacin de la recuperacin de la adicin estndar A2.

La tabla 11 presenta los datos necesarios para la evaluacin de la recuperacin de la adicin estndar A2, para la muestra natural M2.

MUESTRA ADICIONADA (M2+A2) - MUESTRA SIN ADICION M2 PRUEBA M2+A2 M2 (M2+A2)-A2=A2 (A2)2 LOTE 1 26,0620 5,7356 20,3264 413,1625 LOTE 2 25,8027 5,6586 20,1441 405,7847 LOTE 3 26,1922 5,7789 20,4133 416,7028 LOTE 4 26,3959 5,7954 20,6005 424,3806 LOTE 5 26,0519 5,7947 20,2572 410,3541 LOTE 6 26,2102 5,7665 20,4437 417,9448

La varianza , se calcula llevando a cabo los siguientes clculos, utilizando los valores de A2 de la tabla 12.

2488,3295

122,1852 6

0,1586

Calculo de la recuperacin:

66

 2 6

122,1852 6

20,3642

20,36

2,1

10

1000 / 5,75 97,9 2,1 10

20,8792

20,88

Calculo de los parmetros A y B: , ,

1,05 ,

20,879

0,1586 6 ,

2,01

22,0524

22,05

2,01 19,7051 19,70 6 El siguiente esquema se utiliza para verificar si la recuperacin de la adicin estndar A2 es satisfactoria o no.

0,95

20,879

0,1586

A=22,05 R=20,36 d=20,88

B=19,70 R/d=0,975

67

R/d>=0,95

SI R/d<=1,05

NO R>=B

SI RECUPERACION SATISFACTORIA

NO R<=A

NO RECUPERACION NO SATISFACTORIA

SI RECUPERACION SATISFACTORIA

SI RECUPERACION SATISFACTORIA

NO RECUPERACION NO SATISFACTORIA

En el que nuevamente l primera celda a observar en el esquema es la que la a indica el valor de R/d y a continuacin se debe responder a las preguntas que hace el cuadro con base en ese resultado. Es decir, si R/d>=0,95 es verdadero y R/d<=1,05 tambin es verdadero, entonces la recuperacin es satisfactoria. De lo contrario se pueden presentar las siguientes situaciones, para las cuales ontrario se deben tener en cuenta los valores de R/d, de A y de B.

a) Se debe entonces responder respondersi R>=B, en el caso de que esto sea afirmativo la recuperacin es satisfactoria.

68

b) Se debe respondersi R<=B, en el caso afirmativo la recuperacin es satisfactoria. Adicionalmente, los datos obtenidos en la presente validacin permiten hallar los siguientes atributos del mtodo:

6.1.1 MEDIA DE LOS BLANCOS

La media de los blancos es el promedio aritmtico de las concentraciones, o sea, el cociente entre la suma de todas las concentraciones y el nmero de ellas

/ 0 /

/12

6.1.2 DESVIACION ESTANDAR PARA LOS BLANCOS

La desviacin estndar es una medida de la dispersin de los valores alrededor de la media en una distribucin de valores. La desviacin estndar para los blancos se calcula mediante la siguiente frmula:

69

/ 0 /

0 / 12

6.1.3 LIMITE DE DETECCION DEL METODO

El lmite de deteccin es la mnima concentracin de analito que se puede detectar en una muestra, pero no necesariamente cuantificar bajo las condiciones estipuladas para el ensayo. El lmite de deteccin es un nmero, expresado en unidades de concentracin que describe el ms bajo nivel de concentracin de una sustancia que puede determinarse como estadsticamente diferente del blanco. Otra definicin que se utiliza frecuentemente es que el lmite de deteccin es igual al promedio del blanco, , ms tres veces la desviacin estndar del blanco, , debido a que

en algunos mtodos no siempre es posible detectar una respuesta analtica de la solucin estndar de ms baja concentracin para calcular estos lmites. As, usando la desviacin estndar total :

) )

70

Nota: Si existe una respuesta analtica para el blanco y este es determinado en cada lote, el promedio del blanco es incluido en la frmula y la desviacin estndar dentro del lote en lugar de la desviacin estndar total , es usada

en el clculo de los mencionados lmites. 0 3 0

) 0 /

6.1.4 LIMITE DE CUANTIFICACION DEL METODO

El lmite de cuantificacin es la mnima concentracin de un analito que se puede determinar con aceptable repetibilidad y exactitud bajo las condiciones estipuladas para un ensayo. Los lmites de medicin cuantitativa son caractersticas de rendimiento que denotan la capacidad de un proceso de medicin qumica para cuantificar adecuadamente un analito. El lmite de deteccin es igual al promedio del blanco , ms 10 veces la desviacin estndar del blanco, 0 10 0 .

) 0 /

71

6.1.5 CALCULO DE LA EXACTITUD

INEXACTITUD

La inexactitud es el porcentaje de error entre el valor terico del analito adicionado a cada una de las muestras y el valor real. Para el clculo de la inexactitud se utilizan los datos de la recuperacin para cada una de las muestras M1 y M2. | 13,07 |11,84 13,07| 11,84 10,39 20,36 |20,88 20,36| 20,88 2,49 |

11,84

100

20,88

100

72

10,39

2,49

6,44%

EXACTITUD

La

exactitud

es

el

grado

aproximacin

entre

un

valor

obtenido

experimentalmente y un valor real aceptado; normalmente se expresa en trminos de error; se calcula promediando las inexactitudes y haciendo la diferencia con el 100%, que es el valor mximo e exactitud.

100

6,44

93,56%

6.1.6. SENSIBILIDAD

La sensibilidad es la pendiente de la curva de calibracin del mtodo.

La sensibilidad es una medida del factor de respuesta del instrumento como una funcin de la concentracin del analito. Normalmente se mide como la

73

pendiente de la curva de calibracin del mtodo. Como valor se reporta el promedio para las curvas de calibracin desarrolladas en esta validacin. : : 0,06523 0,06483 0,06523 0,0264 0,0295 0,06483

0,06503

Tabla 13: Resumen de los atributos del mtodo.

La tabla 13 presenta un resumen de los valores de los atributos del mtodo obtenidos, para la determinacin del contenido de hierro en muestras de sulfato de aluminio granulado tipo B.

Media de los blancos Desviacin estndar para el blanco Limite de deteccin Limite de cuantificacin Exactitud Sensibilidad %

0 mg/L Hierro 0 mg/L Hierro 0 mg/L Hierro 0 mg/L Hierro 0,06503 Abs/mg/L Hierro 93,56%

74

7 CONCLUSIONES

75

La validacin de una metodologa analtica es un proceso altamente importante a la hora de verificar que los parmetros de rendimiento de una tcnica analtica empleada son o no aceptables.

La validacin de una tcnica analtica utilizando en software Kalibo permite hallar de una manera fcil y rpida los resultados de la recuperacin, la media para los blancos, la desviacin estndar para los blancos, el lmite de deteccin, el lmite de cuantificacin, la exactitud y la sensibilidad.

Teniendo en cuenta los resultados obtenidos en la evaluacin de la recuperacin de las adiciones hechas a las muestras naturales, se puede concluir que la tcnica analtica empleada (Espectroscopia de Absorcin Atmica) arroja resultados satisfactorios para la determinacin del contenido de hierro en muestras de sulfato de aluminio granulado tipo B.

El Software Kalibo 1,2a de validacin de mtodos qumicos, es una herramienta eficaz y fcil de usar una vez el analista se ha familiarizado con su funcionamiento.

76

8 RECOMENDACIONES

77

Antes de comenzar el proceso experimental, se deben realizar los clculos tericos necesarios para as determinar mediante un anlisis preliminar, la concentracin del anualito en la muestra.

En lo posibles, seguir un instructivo detallado para el desarrollo de la validacin de una tcnica analtica, con el fin de evitar posibles errores en el desarrollo de la misma.

Utilizar el software Kalibo 1.2a de validacin de mtodos qumicos para la validacin de otras metodologas utilizadas por el Laboratorio de Aguas y Alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira.

BIBLIOGRAFA

[1]

Protocolo Estandarizacin de Mtodos Analticos, Instituto de Hidrologa, meteorologa y estudios ambientales, IDEAM.

[2]

Tcnicas de Laboratorio, Validacin de Mtodos Analticos,

78

nmero 252, Junio del ao 2000, paginas 382 383.

[3]

Norma tcnica colombiana 531 (quinta revisin).

[4]

RECOMENDACIONES ARMONIZADAS PARA LA VALIDACIN DE MTODOS DE ANLISIS EN UN SOLO LABORATORIO.

http://docs.google.com/gview?a=v&pid=gmail&attid=0.3&thid=12194a4 bd56f453d&mt=application%2Fpdf.

[5]

Octavo curso-taller, Validacin de mtodos analticos. Instituto Nacional de Salud. Bogot D.C; Septiembre 5-9 de 2005.

[6]

Espectroscopia de Absorcin Atmica. http://www.fao.org/docrep/field/ 003/ab482s/ab482s04.htm

[7]

Instructivo de Validacin de Metodologas Analticas, para el Laboratorio de Aguas y Alimentos de la Universidad Tecnolgica de Pereira.

79