FUNDAMENTOS DE CRIOPRESERVACIN - BIOFISICA UCSM MEDICINA HUMANA

ENSAYO SOBRE LOS FUNDAMENTOS DE CRIOPRESERVACION INTRODUCCION El objetivo del presente artculo cientfico es dar a conocer los parmetros propios del proceso de criopreservacin, as como la importancia de conocer las caractersticas celulares que inciden en la viabilidad del producto congelado para lograr la tcnica adecuada, este artculo se basa en las propiedades fisicoqumicas de la clula, especialmente de la membrana plasmtica ya que es la estructura que sufren mayor dao en los procesos de congelacin, a su vez determina los eventos celulares primordiales en el proceso de criopreservacin. FUNDAMENTOS TERICOS Al hablar de criopreservacin, hablamos de bajas temperaturas que en el caso de la clula aumentan la rigidez de la membrana y la rapidez de los cambios osmticos, el movimiento celular a travs de membrana se hace difcil mediante procesos de transporte activo, al disminuir la temperatura (de 25C a 10C) la actividad de las bombas dependientes de ATP, se reduce a menos de la mitad, por ende los procesos de difusin (Ley de Fick) y smosis (movimiento de agua de soluciones de baja a elevada concentracin de soluto) prevalecen en los momentos de estrs osmtico. Por otro lado los productos criopreservados se almacenan a temperaturas de -133C a -196C (para vapor y lquido de nitrgeno respectivamente), a estas temperaturas no se realizan reacciones qumicas, hay formacin de hielo intracelular y estrs osmtico lo que lesiona a la clula; para esto Merryman plantea una hiptesis acerca del volumen celular mnimo: El volumen se reduce mientras que la osmolaridad extracelular aumenta, y al excederse la resistencia de la membrana, sta presentar cambios irreversibles en su permeabilidad. Para mantener a estos productos necesitamos de criopreservantes, sustancias de baja toxicidad e hidrosolubles que disminuyen el punto eutctico de una solucin, por lo que la clula se deshidratar y el gradiente osmtico ser menor. Bioqumicamente se tiene tres tipos de crioprotectores, los alcoholes, azcares y el dimetil sulfxido. Tambin se clasifican en agentes penetrantes: Son de bajo peso molecular y permeables a travs de la membrana celular, tenemos al glicerol, el dimetilsulfoxido (DMSO) un solvente bipolar aprtico que posee una habilidad de prevenir acumulacin excesiva de electrolitos y otras sustancias durante los procesos de criopreservacin y el propanediol (PROH), ha sido utilizado principalmente para congelacin de blastocistos y embriones en estado de preimplantacin y los agentes no penetrantes: Son de alto peso molecular, efectivos a velocidades altas de congelacin, actan como crioprotectores promoviendo la rpida deshidratacin celular, los ms utilizados son: sacarosa, glucosa, dextrosa y dextrano. Estos compuestos generalmente son polmeros que forman puentes hidrgeno con el agua, reduciendo la actividad de agua a una magnitud mucho mayor que la que se predecira por su concentracin molar. Para una mejor comprensin es necesario recurrir a parmetros biofsicos de las clulas, ya que stas se comportan como osmmetros, los movimientos en la membrana durante la criopreservacin se rigen por stos parmetros como: El volumen osmticamente inactivo, se relaciona a la hiptesis de Merryman, se puede conocer mediante micro perfusin en un sistema de micro manipulacin; la permeabilidad de la membrana celular se basa en el aumento de concentracin de electrolitos y otros durante la deshidratacin de la clula sin congelacin intracelular, as mismo se aumenta el transporte de agua al medio externo en congelacin, esto genera liberacin de calor de fusin proporcional a la cantidad de agua removida de la clula; y la relacin rea de superficie celular a volumen que es variable entre las clulas. La funcin que debe mantener la clula descongelada in vivo es la funcin ideal para medir un ndice de viabilidad, que puede ser medida por tcnicas citomtricas y ensayos de cultivos clonognicos. Una vez analizados estos tpicos, hablaremos de los mtodos de criopreservacin, los clasificaremos por la velocidad de congelamiento y descongelamiento: congelacin lentadescongelacin lenta, congelacin lenta-descongelacin rpida, en ellas la adicin del crioprotector se realiza por pasos y la temperatura disminuye progresivamente, esto en un congelador programable. La descongelacin rpida se hace rpidamente a temperatura ambiente o a 30C para evitar la recristalizacin. La congelacin ultrarrpida consiste en una deshidratacin celular pronta, utiliza altas concentraciones de crioprotector (DMSO y sacarosa) luego se la introduce en nitrgeno lquido. La vitrificacin no necesita de un congelador programable. CONCLUSIN Al trabajar con criopreservacin, es menester conocer el perfil biofsico de la clula que se manipular, a travs de los ensayos de permeabilidad y volumen osmticamente inactivo para poder determinar que criopreservantes y que protocolos sean los ms adecuados para asegurar una correcta viabilidad y funcionabilidad del procedimiento.

Perteneciente: Crislee Elizabeth Lpez Colque