INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

CARACTERIZACION ESPECTROFOTOMETRICA DEL DNA, ELABORADO POR: ESPINOZA CASANOVA GLORIA Y HERNANDEZ OBREGON YARA PATRICIA, LABORATORIO DE BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR, DEPARTAMENTO DE BIOQUIMICA, GRUPO: 3IV1, SECCION: V.

INTRODUCCION: Los cidos nuclecos son polmeros sustituidos de la aldopentosa ribosa, que llevan la informacin gentica de un organismo. Son biomoleculas formadas por polmeros de nucletidos, los cuales estn constituidos por una base nitrogenada una pentosa y un grupo fosfato unido mediante enlaces fosfodiester y puentes de hidrogeno. Los cidos nucleicos mas importantes son el cido ribonucleico (ARN) y el acido desoxirribonucleicos (ADN) El descubrimiento de la estructura de DNA por parte de James Watson y Francis Crick en el ao de 1953 fue un momento culminante en la historia de la ciencia, del que surgieron disciplinas completamente nuevas y que repercuti en el curso de otras muchas que ya estaban establecidas. Nuestros conocimientos actuales acerca de cmo se almacena y utiliza la informacin gentica de una clula se basan en investigaciones que han sido posibles gracias a este descubrimiento. La investigacin sistemtica de la bioqumica del DNA comenz con Friedrich Miescher, quien llevo a cabo los primeros estudios de los ncleos celulares. En 1868 aslo una sustancia que contena fosforo, a la cual denomino nucleina, obtenida del ncleo de las clulas del pus (leucocitos) en vendajes quirrgicos de desechos y demostr que dicha nucleina consista en una porcin acida la cual conocemos actualmente como DNA y una porcin bsica protenica. ADN: cido desoxirribonucleico (ADN), es el material gentico de todos los organismos celulares y casi todos los virus. El ADN lleva la informacin necesaria para dirigir la sntesis de protenas y la replicacin. La investigacin sobre el ADN tiene un impacto significativo, especialmente en el mbito de la medicina. A travs de la tecnologa del ADN recombinante los cientficos pueden modificar microorganismos que llegan a convertir en autnticas fbricas para producir grandes cantidades de sustancias tiles. Por ejemplo, esta tcnica se ha empleado para producir insulina (necesaria para los enfermos de diabetes) o interfern (muy til en el tratamiento del cncer). Este cido nuclico contiene las instrucciones genticas usadas en el desarrollo y funcionamiento de todos los organismos vivos y algunos virus. A los segmentos del ADN que tienen la informacin gentica se les llama genes, pero otras secuencias tienen propsitos estructurales, o estn envueltas en regular el uso de esta informacin gentica. Hoy da, el ADN juega un rol muy importante en la tecnologa, y se ha convertido en un gran mecanismo para estudiar y entender los procesos de la vida, en la medicina, en la gentica, en la biologa y en otras ramas de la ciencia. Estas molculas aportan al conocimiento, y de esta manera, aportan tambin al desarrollo de nuevas cosas que son tiles para la sociedad. Algunas aplicaciones del ADN en la tecnologa moderna son: el entendimiento de los mecanismos de la vida, la resolucin de crmenes y misterios la creacin de soluciones para la salud y la nutricin.

Las tcnicas de ADN son tiles para el entendimiento de los mecanismos de la vida

OBJETIVO El alumno conocera y realizara un procedimiento de purificacin del DNA de germen de trigo El alumno onvtendra el espectro de absorcin caracterstico del DNA PREPARACION CAPA FINA
aplicar a 1 cm de un extremo 2 aplicaciones de cada solucion y de los hidrolizados de DNA Y RNA

ESPECTRO DE ABSORCION DEL DNA

DEL CROMATOGRAMA EN

desarrollar la placa en una camara de cromatografia. utilizando como fase movil butanol:acido acetico:agua 5:2:3

revelar el cromatograma por exposicion a la luz ultravioleta en un cuarto obscuro

PREPARAR UNA DISOLUCION DEL DNA CON CITRATO SALINA DILUIDA

LEER LA ABSORBANCIA EN EL ESPECTOFOTO METRO

DETERMINAR LOS VALORES DE 210 A 300 NM DE 5 EN 5

TABLA DE DATOS: LONGITUD DE ABSORBANCIA ONDA (nm) 200 0.047 205 0.079 210 0.090 215 0.090 220 0.104 225 0.090 230 0.082 235 0.106 240 0.097 245 0.166 250 0.362 255 0.815 260 0.958 265 0.974 270 0.92 275 0.902 280 0.65 285 0.468 290 0.305 295 0.170 300 0.079 A continuacin se muestra la grafica de absorbencia contra longitud de onda

Despus de ver las manchitas que se hicieron en el cromatograma, las marcamos y procedimos a calcular el Rf de cada una de las soluciones como se muestra a continuacin TIMINA Rf =

725

URACILO Rf = 675 CITOCINA Rf = 587 ADENINA Rf = 537 GUANINA Rf = 4

Espacio para el cromatograma

1.2

A
1

ABSORBANCIA
ABSORBANCIA

0.8 0.6 0.4 0.2 0 0 200 400 2 per. Mov. Avg. (ABSORBANCI A)

ANALISIS DE RESULTADOS El DNA se disolvi con 2 ml de citrato salina diluida y se hizo una primera dilucin 1:60 y se fue a leer esta muestra al espectrofotmetro pero debido a que la absorbancia era mayor a uno se hicieron varias diluciones hasta llegar a un factor de dilucin que fue cuando la absorbancia se acerc a uno y se pudieron obtener los datos de absorbancia a su respectivo espectro de absorcin. Para la realizacin de la cromatografa empleamos soluciones de las bases puricas y pirimidicas posteriormente se aplic la solucin del hidrolizado de DNA y del RNA el cromatograma se corri con una fase mvil de butanol acido actico agua que tardo aproximadamente 40 min. Finalmente al revelar el cromatograma por exposicin de luz ultravioleta observamos la separacin de las bases puricas y pirimidicas de los hidrolizados comparando las manchas con las de las manchas de las soluciones de dichas bases. CONCLUSION La desnaturalizacin del DNA se puede detectar observando el aumento de la capacidad de una disolucin de DNA de absorber la luz ultravioleta

de una longitud de onda () de 260 nm (A260). Las bases de los cidos nucleicos absorben fuertemente la luz de 260 nm. Mediante el cromatograma se observo la separacin de bases puricas y pirimidicas que se encontraron en la muestra de hidrolizados de DNA y RNA. BIBLIOGRAFIA

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