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Formation

Par Martin Morin

Table des matires


1. Chapitre 1 La chromatographie...Page 8

1.1

Dfinition de la chromatographie Page 8

1.2

Historique de la chromatographie.. Page 8


1.2.1

Historique de la chromatographie .. Page 8


Diffrents types de chromatographie.. Page 11

1.3
1.3.1

La chromatographie dadsorption.. Page 11

1.3.2

La chromatographie de partition Page 11

1.3.3

La chromatographie daffinit.. Page 12

1.3.4

La chromatographie sur couche mince (TLC).. Page 12

1.3.5

La chromatographie change ionique. Page 12

1.3.6

La chromatographie dexclusion.. Page 12

1.3.7

La chromatographie par lectrophorse capillaire.. Page 13


Dfinitions utiles en chromatographie. Page 13

1.4
1.4.1

Temps de rtention. Page 13

1.4.2

Le facteur de slectivit et le temps relatif (RRT). Page 13

1.4.3

Facteur dasymtrie Tailing Page 14

1.4.4

Efficacit de la colonne.. Page 14

1.4.5

Rsolution de la colonne Page 15

1.4.6

Facteur de rtention ou capacit de rtention ( Capacity


factor )

1.5

. Page 16

Exercices. Page 16

2. Chapitre 2 chromatographies liquides haute performance (CLHP)


High performance liquid chromatography (HPLC) Page 17

Introduction.. Page 17

2.1

Phase stationnaire (colonne)... Page 17

2.1.1

2.1.1.1

Maintenance et prcaution. Page 22

Phase normale. Page 23

2.1.2

2.1.2.1

Phase mobile et phase stationnaire.. Page 23

2.1.2.2

Prparation de lappareil ....Page 23

Phase inverse... Page 24

2.1.3

2.1.3.1

Phase mobile et phase stationnaire.. Page 24

2.1.3.2

Leffet silanol.. Page 25

2.1.3.3

Le pairage dions... Page 26

2.1.3.4

Prparation de lappareil.... Page 27

2.1.4

Chromatographie isocratique.. Page 27

2.1.5

Chromatographie gradient Page 28


Instrumentation et paramtre... Page 28

2.2
2.2.1

Pompe.... Page 28

2.2.2

Injecteur.... Page 29

2.2.2.1

Boucle dinjection, 6 Port valve ,


3 Port valve ..Page 29

2.2.2.2

Rinse and purge ... Page 31

2.2.2.3

carry over .. Page 32

2.2.3 Dtecteur.... Page 32


2.2.3.1

UV/ Visible.. Page 32

I-

Principe de labsorbance.. Page 32

II-

La loi de Beer Lambert.... Page 33

III-

Facteur de rponse Page 34

IV-

Double .. Page 34

V-

Paramtre de lappareil (, Resp., Aux., threshold, fils du


dtecteur) Page 36

2.2.3.2

Fluorimtre(dtecteur de fluorescence).. Page 37

I-

Principe de la fluorimtrie.. Page 37

II-

La loi de lintensit de fluorescence.. Page 37

III-

Les raies de diffusion Rayleigh et Raman.. Page 38

2.2.3.3

Rfractomtre (lindice de rfraction)... Page 40

2.2.3.4

Light scatterring . Page 42

2.2.3.5

lectrochimique. Page 44

2.2.3.6

Spectre de masse... Page 44

2.2.4 Refroidisseur dchantillon..


2.2.5 Chauffe colonne..
2.2.6 Effet Peltier
2.2.7 Contrleur...
2.3

Interprtation...
2.3.1 Chromatogramme..
2.3.1.1

Intgration (Logiciel)....

2.3.2 Identification..
2.3.3 Quantification
2.3.3.1

Selon le type de dtecteur (loi mathmatique)

2.3.3.2

Selon le dveloppement de la mthode.

2.3.4 system suitability (SST).


2.3.4.1

RDS..

2.3.4.2

tailling .

2.3.4.3

Rsolution....

2.3.4.4

Plateau..

2.3.4.5

Validation des std..

2.3.4.6

Autres...

3. Chapitre 3 Analyse et prparation des chantillons


3.1

Introduction

3.2

Bien documenter ce qui est fait..

3.3

Prparation simple....

3.4

Extraction....
3.4.1

Liquide liquide...

3.4.2

Liquide solide.

3.4.3

Liquide liquide sur phase solide....

3.4.4

Microextration.

3.5

Drivatization.
3.5.1

Principe..

3.5.2

Les ractions.

3.6

Stabilit des solutions...


3.6.1

Phase mobile.

3.6.2

Solvant de dilution..

3.6.3

Needle rinse .

3.6.4

Solution de rinage..

3.6.5

Les solutions de rsolution....

3.6.6

Les solutions de STD et dchantillon.

3.6.7

Vials neutraliss..

4. Chapitre 4 Dveloppement et validation de mthode..


4.1

Introduction
4.1.1 Principe

4.2

Validation
4.2.1

Spcificit..

4.2.1.1

Stability indicating .

A- Forced degradation ....

4.2.2

I-

Acide..

II-

Alcalin...

III-

Thermal

IV-

Oxydation..

V-

UV...

Linarit.

4.2.2.1

Principe

4.2.2.2

Dtermination du facteur de rponse...

4.2.3

Prcision de la mthode.

4.2.3.1
4.2.4

Exactitude..

4.2.4.1
4.2.5

Principe....

LOD, LOQ.

4.2.6.1
4.2.7

Principe....

Stabilit.

4.2.5.1
4.2.6

Principe....

Principe....

Robustness ..

4.2.7.1

Principe....

4.2.7.2

Paramtre modifier....

4.2.8

Ruggedness ..

4.2.8.1

Principe.....