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Extraccin y Clean-Up de Residuos de Pesticidas Rpida y Simple con la Tcnica QuEChERS

Incremente por cuatro la velocidad de tratamiento Reduzca significativamente los costes de materiales Productos preparados con productos ultra-puros y pre-pesados
Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, y Safe, el mtodo QuEChERS para la extraccin de pesticidas en alimentos, se basa en el trabajo de investigacin realizado por el Departamento de Agricultura de Estados Unidos(1). Adems de usar menos solventes y materiales frente a los mtodos tradicionales de Extraccin en Fase Slida, QuEChERS emplea un mtodo nuevo y mucho ms rpido mediante Extraccin en Fase Slida Dispersiva (dSPE). Este mtodo ha sido aprobado por la AOAC (Mtodo 2007.01) y en Europa bajo prEN-15662. Estos mtodos tienen varias etapas comunes: PASO 1: Preparacin y Extraccin de la Muestra.
Se homogeneiza el producto con la cantidad de agua necesaria, ver TABLA 1. Se aade acetonitrilo como solvente de extraccin. Se aaden sales, cidos, tampones para mejorar le eficacia de la extraccin y proteger compuestos sensibles. Se pueden aadir estndares de fortificacin y/o patrones internos para comprobar la eficiencia de la extraccin.

PASO 2: Limpieza de la Muestra.


Una alcuota del extracto se limpia mediante Extraccin en Fase Slida Dispersiva (dSPE), elemento clave en la tcnica QuEChERS. Se preparan unos tubos de Polipropileno de centrfuga con cantidades precisas de MgSO4 y sorbentes de Extraccin en Fase Slida para eliminar el exceso de agua y contaminates no deseados de las muestras extraidas(2). Tras agitacin y centrifugacin, los extractos limpios estn listos para ser analizados por GC/MS o LC/MS.

PASO 3: Anlisis de las Muestras


Se puede ajustar el pH de las muestras para proteger pesticidas sensibles y/o cambiar el solvente para mejorar el anlisis por GC/MS o LC/MS. Se pueden aadir patrones internos. El procedimiento general descrito se basa en el AOAC Official Method 2007.01, Pesticide Residues in Foods by Acetonitrile Extraction and Partitioning with MgSO4(2). El mtodo Europeo prEN-15662 sigue etapas similares. En la TABLA 2 se muestra un ejemplo de tratamiento para fresas. La TABLA 3 muestra las tasas de recuperacin obtenidas en fresas.

Extraccin (ver QuEChERS adecuados en TABLA 4)


1. Homogeneizar el producto fro. Aadir agua si el producto contiene poca agua o es un producto seco(1) Ver TABLA 1. Pesar el homogeneizado (8-15g) en un tubo de centrfuga limpio de 50 mL. 2. Aadir 15 mL de Acetonitrilo con un 1% de cido Actico y la cantidad adecuada de Patrn Interno

Limpieza (ver QuEChERS adecuados en TABLA 4)


6. Tomar una alcuota del sobrenadante. La cantidad depender del tipo de tubo de dSPE seleccionado. Por cada mL a tratar se necesitan 50mg PSA, 150mg MgSO4, 50mg C18, o 50mg de carbn grafitizado. 7. Transferir el volumen de extracto elegido a uno de los tubos de limpieza de la TABLA 4.

3. Aadir el contenido de un tubo CL2660 (o, en funcin del mtodo CL1510 o DO3380).

8. Agitar a mano o en VORTEX durante 30.

4. Agitar a mano o en VORTEX durante 30-60.

9. Centrifugar a 3.000 rpm durante 3 para separar el material slido.

5. Centrifugar a 3.000 rpm durante 3 para separar el material slido.

10. Transferir la muestra a un vial para inyector y analizar por GC o LC. Las etapas para el anlisis de analitos especficos se detallan el AOAC Official Method 2007.01(2).

V2 071108

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TABLA 1
Matriz Aceite Cereales Especias Frutas, Vegetales 25-80% Agua Frutas,Vegetales >80% Agua Frutos Secos Naranja, limn Miel Cantidad Muestra 1,5 mL 5g 2g 10 g 10 g 5g 15 g 5g Dilucin 1,5 mL C6(*) 10g H2O 10g H2O csp 10g H2O(**) no 7,5g H2O no(***) 10g H2O

(*) Procedimiento especial con CL2680 (**) La cantidad de H2O a aadir depende del contenido original. El contenido en agua del homogeneizado ha de ser de 80% aprox. (***) En extractos muy cidos puede ser conveniente ajustar el pH con la adicin de NaOH diluido al extracto final.

TABLA 2 Ejemplo de Tratamiento de Fresas con QuEChERs y Clculo de las Tasas de Recuperacin
Preparacin y Extraccin de la Muestra Muestra: 10g de fresas se homogeneizan y se disponene en un tubo vaco de centrfuga de 50 mL de PP. Solvente: Aadir 10mL de acetonitrilo al homogeneizado. Agitar durante 1 minuto hasta obtener una dispersin homognea. Sales: Aadir 6 g MgSO4 Anhidro, 1.5g NaCl, 1.5g Citrato de Sodio dihidrato y 0.75g Citrato de Sodio sesquihidrato. Producto DO3380 Agitar durante 1 minuto. Centrifugar y tomar el sobrenadante para la limpieza de la muestra. Los estndares de Pesticidas (200ng/mL) se aaden ahora al sobrenadante. Limpieza de la Muestra Tubo QuEChERS: 1mL del sobrenadante de la etapa anterior se vierte en varios tubos de PP para centrfuga de 2 mL cada uno con las siguientes composiciones de sorbentes: A. 50mg PSA + 150mg MgSO4 (CL2680) B. 50mg PSA + 150mg MgSO4 + 50mg C18 (CL2690) C. 50mg PSA + 150mg MgSO4 + 50mg GCB (CL2670) Clean up: Agitar las muestras con los adsorbentes durante 30 (el que contiene carbn durente 120), y centrifugar para producir un sobrenadante claro apto para GCMS. Patrn Interno: Pentacloronitrobenceno en solucin de cido frmico pH 5 (o otros P.I. convenientes).
PSA. Material de intercambio basado en amina primaria y secundaria. GCB. Negro de carbn grafitizado.

TABLA 3 Recuperacin de Pesticidas en Extractos de Fresa tratados con C18 o GCB, frente solo PSA
Pesticida 4,4-DDT Acephate Bifenthrin Captan Carbaryl Chlorothalonil cis-Permethrin Deltamethrin Diazinon Dichlofluanid Dichlorvos Dicofol Dimethoate Endrin Fenhexamid Fenpropathrin Folpet Imazalil Iprodione Malathion Metalaxyl Methamidophos Mevinphos Myclobutanil o -Phenylphenol Omethoate Propargite 1 Propargite 2 Thiabendazole trans -Permethrin Vinclozolin CAS 50-29-3 30560-19-1 82657-04-3 133-06-2 63-25-2 1897-45-6 52645-53-1 52918-63-5 333-41-5 1085-98-9 62-73-7 115-32-2 60-51-5 72-20-8 126833-17-8 39515-41-8 133-07-3 35554-44-0 36734-19-7 121-75-5 57837-19-1 10265-92-6 7786-34-7 88671-89-0 90-43-7 1113-02-6 2312-35-8 2312-35-8 148-79-8 51877-74-8 50471-44-8 Accin/Uso Insecticida Insecticida Insecticida Fungicida Insecticida Fungicida Insecticida Insecticida Insecticida Fungicida Insecticida Acaricida Insecticida Insecticida Fungicida Insecticida Fungicida Fungicida Fungicida Insecticida Fungicida Insecticida Insecticida Fungicida Fungicida Insecticida Acaricida Acaricida Fungicida Insecticida Fungicida Clasificacin Organoclorado Organofosforado Piretroide Organoclorado Carbamato Organoclorado Piretroide Piretroide Organofosforado Organoclorado Organofosforado Organoclorado Organofosforado Organoclorado Organoclorado Piretroide Organoclorado Organonitrogenado Organonitrogenado Organofosforado Organonitrogen Organofosforado Organofosforado Organonitrogenado n/d Organofosforado Organosulfurado Organosulfurado Organonitrogenado Piretroide Organoclorado C18 (1) 102 128 106 88 114 125 106 97 108 122 111 98 124 104 118 113 108 115 118 124 105 105 112 119 106 120 110 121 88 109 102 GCB (2) 95 147 81 91 111 13(3) 65 52 127 103 116 54 151 101 77 96 63 95 90 160 117 107 130 114 97 119 95 114 14(3) 71 98

1. Recuperacin 50mg C18 / 50mg PSA

2. Recuperacin 50mg GCB / 50mg PSA

3. Muy retenidos por GCB. Requiere eluyente especial (Acetona:Tolueno 3:1)

TABLA 4 QuEChERs disponibles


Descripcin Material Mtodos
Mini-Multiresiduo, EU prEN-15662 AOAC 2007.1 Mini-Multiresiduo AOAC 2007.1, Mini-Multiresiduo AOAC 2007.1, Mini-Multiresiduo AOAC 2007.1, Mini-Multiresiduo AOAC 2007.1, Mini-Multiresiduo AOAC 2007.1, Mini-Multiresiduo Variante de Schenck(3) Variante de Schenck(3) Variante de Schenck(3)

Cantidad
250 250 250 50 50 100 100 100 30 30 30

Tubos Centrfuga PP, 50mL para Extraccin de Muestra DO3380 6 g MgSO4 Anhidro, 1.5g NaCl, 1.5g Citrato de Sodio dihidrato y 0.75g Citrato de Sodio sesquihidrato CL2660 6 g de MgSO4 Anhidro y 1.5g de Acetato de Sodio Anhidro CL1510 4 g de MgSO4 Anhidro y 1.5g de NaCl. Tubos Centrfuga PP, 15mL para Clean-Up de Muestra CL2640 900 mg de MgSO4 Anhidro, 300 mg PSA y 150 mg C18 E CL1520 900 mg de MgSO4 Anhidro, 300 mg PSA y 150 mg GCB Tubos Centrfuga PP, 2mL para Clean-Up de Muestra CL2680 150 mg de MgSO4 Anhidro y 50 mg PSA CL2690 150 mg de MgSO4 Anhidro, 50 mg PSA y 50 mg C18 E CL2670 150 mg de MgSO4 Anhidro, 50 mg PSA y 50 mg GCB Tubos EFS PP, 6mL para Clean-Up de Muestra. Variante de Schenck CL2700 200 mg carbn, 400 mg de PSA frit de PTFE CL2710 250 mg carbn, 500 mg de PSA frit de PTFE CL2720 500 mg carbn, 500 mg de PSA frit de PTFE

1. Michelangelo Anastassiades, Steven J. Lehotay, Darinka tajnbaher, Frank J. Schenck. Fast and Easy Multiresidue Method Employing Acetonitrile Extraction/Partitioning and Dispersive Solid-Phase Extraction for the Determination of Pesticide Residues in Produce. J. AOAC International, 2003, vol. 86(22), pp.412-431. 2. AOAC Official Method 2007.01, Pesticide Residues in Foods by Acetonitrile Extraction and Partitioning with Magnesium Sulfate. 3. Schenck, F.J., SPE Cleanup and Analysis of PPB Levels of Pesticides in Fruits and Vegetables. Florida Pesticide Residue Workshop, 2002.

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