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UNIVERSIDADE DO CONTESTADO UnC CURSO DE FARMCIA

KELLY CRISTINA SOARES WOEHL

AVALIAO DO EFEITO TIPO-ANTIDEPRESSIVO DO EXTRATO BRUTO E FRAES DE Persa cordata EM CAMUNDONGOS

CANOINHAS 2012

KELLY CRISTINA SOARES WOEHL

AVALIAO DO EFEITO TIPO-ANTIDEPRESSIVO DO EXTRATO BRUTO E FRAESDE Persa cordata EM CAMUNDONGOS

Projeto de Pesquisa apresentado ao Comit de tica da Fundao Universidade do Contestado UnC Canoinhas, sob orientao da professora Dra. Simone Molz.

CANOINHAS 2012

SUMRIO

1. INTRODUO

1.1.

APRESENTAO DO TEMA

O sentimento de depresso um evento comum que ocorre durante a vida, como a perda de um ente querido ou uma traio e conseqentemente a separao, mas no se pode chamar esses eventos de transtornos. Transtorno afetivo chamado de depresso algo mais prolongado e muito mais grave, caracterizado por um sentimento de no ter mais controle sobre o prprio estado emocional. Em qualquer momento particular, cerca de 5-6% da populao sofrem de depresso, e estima-se que 10% das pessoas possam apresentar depresso durante a vida (KATZUNG, 2005, p. 404). Estima-se que no Brasil, incluindo o estado de Santa Catarina, existam aproximadamente 54 milhes de pessoas que em algum momento de suas vidas tero algum tipo de depresso, sendo que 7,5 milhes tero episdios agudos e graves, muitas com risco de suicdio (NARDI, 2000). Alm disso, um estudo realizado no municpio de Itaja em Santa Catarina mostrou que a depresso apresenta prevalncia superior a 22% em idosos, um indicativo de que a doena apresenta altos ndices no Estado (PEREIRA, 2005). Segundo a Organizao Mundial da Sade, devido a dificuldades econmicas e a falta de acesso a medicamentos, cerca de 65-85 % da populao que vive em pases em desenvolvimento depende essencialmente das plantas para seus cuidados primrios de sade. Diferentes regies tm registrado o uso de plantas medicinais com efeitos psicotrpicos e neuroprotetores, oferecendo desta forma um vasto repertrio de substncias potencialmente ativas que podem atuar na farmacologia moderna. O uso de produtos naturais ou remdios alternativos para o tratamento de

enfermidades cresceu mundialmente, em especial, derivados de plantas medicinais, pois muitas das substncias isoladas a partir de extratos vegetais tem apresentado significativo potencial teraputico (LIU, 2004). A planta Persea cordata(Vell.) Mez, tambm conhecida como pau-deandrade ou abacate-do-mato uma espcie da flora catarinense,

comumente usada na medicina popular como anti-inflamatrio e cicatrizante de feridas. Estudos comprovaram ao antibacteriana do extrato de acetato de etila contra cepas de Staphylococcus aureuse Streptococcus pyogenes, o que suporta oseu uso popular no tratamento de feridas cutneas. Outros estudos demonstraram efeito antiespasmdico e antiedematognico (ZAMPIROLOet al., 2008). A Persea cordata pertence grande famlia Lauraceae, e quimicamente h poucos relatos sobre sua composio, sendo relatados a presena de esterides como -sitosterol e polifenis (ZAMPIROLO et al., 2008). As plantas da famlia Lauraceae destacam-se entre as demais famlias pela sua importncia econmica. Algumas espcies tm sido utilizadas pelas indstrias para a fabricao de diversos produtos, porm, a maioria das espcies tem seu uso restrito s comunidades tradicionais que detm o conhecimento emprico da utilizao dessas plantas (MARQUES, 2001). Na medicina popular, as Lauraceae, e mais especificamente as espcies do gnero Persea apresentam utilizao variada, desempenhando diferentes funes contra diversas doenas. P. americana utilizada para combater problemas renais, atravs de chs feitos com suas folhas. Na regio de Feira de Santana, na Bahia, o ch feito com as folhas do abacate usado como diurtico. Em Goinia, a infuso feita com as folhas, casca ou semente tem utilizao, no s como diurtico, mas tambm como calmante (MARQUES, 2001). Tendo em vista o uso etnofarmacolgico da P. cordata, bem como a necessidade se investigar outros compostos com potencial teraputico frente depresso, faz com que a planta torna-se foco do presente estudo.

1.2.

PROBLEMA

A depresso uma doena crnica, recorrente e potencialmente ameaadora de vida, que afeta cerca de 20% da populao mundial (BERTON e NESTLER, 2006). Esta doena reconhecida como um problema de sade pblica e possui grandes implicaes sociais, uma vez que os acometidos pela

doena apresentam limitao da sua atividade e bem-estar, o que provoca incapacidade e perda de produtividade, alm de uma maior utilizao dos servios de sade (FLECKet al., 2003; NEMEROFF, 2007). Em muitos indivduos a depresso desenvolve-se gradualmente e apresenta um curso crnico e remitente, ao longo da vida. A reverso dos sintomas em resposta ao tratamento farmacolgico disponvel no mercado farmacutico ocorre dentro de semanas ou meses. A depresso uma doena muito grave e que se no tratada pode ser a causa de suicdios. Alm disso, os tratamentos farmacolgicos disponveis atualmente so eficazes para apenas 50% dos indivduos com depresso. Portanto, deve-se estar sempre a procura de novas substncias farmacolgicas como estratgia teraputica para esta patologia (NEMEROFF, 2007.

1.3.

JUSTIFICATIVA

Segundo a Organizao Mundial da Sade, devido a dificuldades econmicas e a falta de acesso a medicamentos, cerca de 65-85 % da populao que vive em pases em desenvolvimento depende essencialmente das plantas para seus cuidados primrios de sade. Diferentes regies tm registrado o uso de plantas medicinais com efeitos psicotrpicos e neuroprotetores, oferecendo desta forma um vasto repertrio de substncias potencialmente ativas que podem atuar na farmacologia moderna. O uso de produtos naturais ou remdios alternativos para o tratamento de

enfermidades cresceu mundialmente, em especial, derivados de plantas medicinais, pois muitas das substncias isoladas a partir de extratos vegetais tem apresentado significativo potencial teraputico (LIU, 2004). A anlise de substncias ativas muito mais complexa e longa, j que geralmente os compostos presentes em menor proporo na planta so os que apresentam melhores efeitos biolgicos. Por isto, no desenvolvimento de um fitomedicamento, existe a necessidade da anlise ampla de extratos, onde se obtm extratos semi-puros, fraes e finalmente, os compostos puros. Portanto, a fase inicial do desenvolvimento de novos frmacos a partir de

plantas medicinais depende da avaliao do potencial teraputico em diferentes modelos experimentais e tambm da anlise da potncia das diferentes fraes (SANT ANA E ASSAD, 2002).

1.4.

OBJETIVO GERAL

Avaliar o efeito tipo-antidepressivo do extrato bruto e de diferentes fraes de Persea cordata, em modelo animal preditivo de atividade antidepressiva.

1.5.

OBJETIVOS ESPECFICOS

1.5.1. Preparar o extrato bruto metanlico das cascas de P. cordata.

1.5.2. Preparar fraes hexano, acetato de etila e ter de petrleo a partir do extrato bruto. 1.5.3. Verificar o efeito da administrao pela via oral de diferentes doses do extrato bruto metanlico e das fraes hexano, acetato de etila e ter de petrleo de Persea cordata, no teste de suspenso da cauda (TSC).

1.5.4. Verificar o efeito da administrao pela via oral de diferentes doses do extrato bruto metanlico e das fraes hexano, acetato de etila e ter de petrleo de Persea cordata, no teste do campo aberto (CA).

1.5.5. Comparar a eficcia entre os diferentes extratos testados.

2 DESENVOLVIMENTO Contribuies alunos(escrever sobre a depresso, os antidepressivos utilizados atualmente e suas limitaes; escrever sobre a fitoterapia e P. cordata, classificao, o que os estudos dizem sobre os efeitos dela. 2.1 DEPRESSO Segundo a Organizao Mundial de Sade (OMS), 450 milhes de indivduos tem problemas mentais e psicossociais (BORDIN, 2006). A depresso considerada como problema de sade pblica, econmico e social. As pessoas com depresso desencadeiam sentimento de inferioridade, contnua alterao do humor e rejeio social, prejudicando suas relaes pessoais (PETERSON, 2007) . Alguns fatores esto relacionados ao aparecimento da depresso, entre eles: estresse, relaes conflituosas, desemprego, dificuldades financeiras, baixa renda e escolaridade alm de divrcio (MESQUITA, 2005; ZANATTA et al. 2010). A depresso pode ser caracterizada como um transtorno mental do humor que ocorre em todas as faixas etrias. Por razes ainda pouco esclarecidas vem se tornando mais frequente. Estima-se que de 30 a 50% dos pacientes com depresso, no se recuperam totalmente com a utilizao de medicamentos para este fim (ROZENTHAL,2004). Segundo WHO (2001,p.9), A depresso grave atualmente a principal causa de incapacitao em todo mundo, e ocupa o quarto lugar entre as dez principais causas de doenas, a nvel mundial (BARBOSA, 2011). O fator gentico-hereditrio est presente nesta doena, que quando no tratada corretamente, pode perdurar por muito tempo, com srio risco vida, trabalho, famlia e lazer, podendo acarretar em alto risco de suicdio (LAFER et al., 2000). Em muitos indivduos a depresso desenvolve-se gradualmente e apresenta um curso crnico e remitente, ao longo da vida. A reverso dos sintomas em resposta ao tratamento farmacolgico disponvel no mercado farmacutico ocorre dentro de semanas ou meses (CHANG; FAVA, 2010). A depresso uma doena muito grave e que se no tratada pode ser a causa de suicdios. Alm disso, os tratamentos farmacolgicos disponveis atualmente so eficazes para apenas 50% dos indivduos com depresso.

Vrios fatores podem ser considerados para causar a depresso, na depresso maior os principais sintomas so: perda ou aumento de apetite, insnia ou hipersonia, fadiga, sentimentos de inutilidade e culpa, dificuldade de concentrao, e pensamentos recorrentes sobre morte (BEAR; CONNORS; PARADISO, 2002, p. 686). Episdios de depresso maior raramente duram mais de dois anos. Sem tratamento, entretanto, a depresso recorre em 50% dos casos, e aps trs ou mais episdios, as chances de recorrncia aumentam para 70%. Outro tipo de depresso que afeta 2% da populao adulta chamada de distimia. Embora mais leve que a depresso maior, a distimia tem um curso crnico e arrastado, desaparecendo freqentemente de forma espontnea. A

depresso maior e a distimia so duas vezes mais comuns em mulheres do que em homens (BEAR; CONNORS; PARADISO, 2002, p. 686). 2.1.2 Antidepressivos 2.1.2.1. Histria dos antidepressivos Os primeiros frmacos com efeitos comprovadamente benficos sobre o humor agiam principalmente sobre o sistema monoaminrgico, como os inibidores da enzima monoamina oxidase (MAO) e os inibidores da recaptao de monoaminas (NEMEROFF, OWENS, 2002). Esta constatao sugeriu que os antidepressivos atuassem aumentando a neurotransmisso serotoninrgica e noradrenrgica, compensando um possvel estado de deficincia destes neurotransmissores (hiptese monoaminrgica da depresso). Esta

constatao sugeriu que os antidepressivos atuassem aumentando a neurotransmisso serotoninrgica e noradrenrgica, compensando um possvel estado de deficincia destes neurotransmissores (hiptese monoaminrgica da depresso). Entretanto, esta hiptese falha ao no explicar a ao de alguns antidepressivos que no agem sobre o sistema monoaminrgico. Alm disso, as vrias classes de medicamentos antidepressivos usados para o tratamento da depresso (tricclicos, inibidores da MAO, inibidores seletivos da recaptao de serotonina e inibidores mistos da recaptao de serotonina e noradrenalina) proporcionam uma completa remisso para apenas cerca de 50% dos

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indivduos (NESTLER, 2002), alm de causarem efeitos colaterais (BRUNELLO et al., 2002), o que contribui para diminuir a adeso dos pacientes ao tratamento. Ainda, nem toda droga que aumenta as monoaminas apresenta efeito antidepressivo. Desta forma, existe uma grande necessidade do desenvolvimento de terapias antidepressivas alternativas ou de substncias que possam aumentar a eficcia clnica no tratamento da depresso. Acredita-se que outros sistemas de neurotransmissores tambm estejam envolvidos na patofisiologia da depresso, como por exemplo, o sistema glutamatrgico e seus receptores do subtipo N-metil-D-aspartato (NMDA). Estudos pr-clnicos e clnicos demonstraram que substncias que inibem a liberao de glutamato, tais como a lamotrigina e o riluzole, apresentam efeito antidepressivo (SANACORA et al., 2008). Logo, o estudo de substncias que possam modular o sistema glutamatrgico e/ou diminuir o estresse oxidativo tambm apresenta considervel potencial teraputico no tratamento da depresso. Apesar de a hiptese amnica ser, sem dvida alguma, muito simplista, ela forneceu os principais modelos experimentais para a descoberta de novos frmacos antidepressivos atualmente disponveis exceo da bupropiona so classificados de acordo com as suas aes primrias sobre o metabolismo, a recaptao ou o antagonismo seletivo dos receptores da serotonina, da noradrenalina ou da noradrenalina ou de ambas (KATZUNG, 2005, P. 404). Regies do encfalo como o crtex pr-frontal, crtex cingulado anterior, complexo amigdalide, giro parahipocampal e hipocampo esto envolvidas no processamento da emoo e na integrao desta com a cognio e as funes viscerais (FRANGOU, 2006). A depresso est associada a alteraes morfolgicas dessas regies, como atrofia, vulnerabilidade seletiva a morte celular de neurnios regionais, alteraes neuroqumicas, mudanas na sinalizao intracelular e na expresso gnica (TSANKOVA et al., 2007). A patofisiologia da depresso envolve fatores genticos e ambientais que contribuem para a vulnerabilidade de um indivduo ao desenvolvimento da depresso de forma que a etiologia e a neurobiologia destes transtornos ainda no se encontram totalmente elucidados (SHALTIEL et al., 2007).

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A teoria de monoaminrgica da depresso (HENDLEY e SNIDER,1968) ainda a mais aceita para explicar a etiologia e a patognese da depresso, atribuindo esta psicopatologia a um prejuzo na neurotransmisso

serotonrgica e noradrenrgica e mais recentemente, dopaminrgica (KAPUR & MANN,1992). A ao de antidepressivos tricclicos (TCAs) e inibidores da monoamina oxidase (MAOIs), eficazes em aumentar os nveis das

monoaminas e o fato de drogas como a reserpina induzirem depresso, suportaram por mais de meio sculo a hiptese monoaminrgica da depresso, e apoiados nesta teoria os antidepressivos comumente utilizados na clnica foram desenvolvidos (ORDWAY et al., 1999). A primeira substancia antidepressiva foi identificada por acaso, em 1950. Observou-se uma melhora do humor em pacientes que estavam sendo tratados com medicamentos para tuberculose. Um derivado deste medicamento, um inibidor da enzima monoamina oxidase (IMAO) iproniazida - mostrou sua capacidade de reduzir os sintomas depressivos, formando assim a primeira farmacoterapia efetiva para este distrbio. Depois os TCAs, inicialmente usado como anti-histamnicos, foram usados na clnica para tratar transtornos depressivos. Outras classes de drogas como antidepressivos, betabloqueadores, antipsicticos e estratos de espcies vegetais, tm sido utilizadas com sucesso em alguns casos. (FERREIRA, 2010). A descoberta dos alvos moleculares para a primeira gerao de medicamentos antidepressivos levou ao desenvolvimento das drogas da segunda e terceira gerao, tais como os inibidores seletivos da recaptao de serotonina (ISRS). Todos estes frmacos agem com o mesmo mecanismo farmacolgico, chamado monoaminrgico, caracterizado pela reverso do dficit que leva ao estado de depresso. Estes frmacos exercem seu efeito antidepressivo por aumentarem a disponibilidade de monoaminas na fenda sinptica, por inibirem sua recaptao, agindo direta e indiretamente nos sistemas transportadores pr-sinpticos, ou por inibirem a degradao dos mediadores (MANN,1999; PAUWELS, 2000). Os antidepressivos utilizados na clnica aumentam os nveis das monoaminas em minutos ou horas, enquanto o efeito teraputico s observado depois de algumas semanas (RACAGNI e POPOLI, 2008).

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O sistema glutamatrgico, tem sido apontado como responsvel pelo efeito dos antidepressivos atuarem clssicos, do uma vez que, apesar dos desses das

medicamentos

atravs

aumento

rpido

nveis

monoaminas, parece que esta classe de medicamentos converge em ltima instncia para a regulao da plasticidade sinptica e do processo de informaes mediados por receptores de glutamato (SANACORA et al., 2008). Os ISRSs (Inibibores seletivos da recaptao de serotonina), citalopram, fluoxetina, fluvoxamina, paroxetina e sertralina so o resultado de uma pesquisa feita para encontrar medicamentos to eficientes quanto os TCAs, mas com poucos problemas de torelabilidadee segurana (MORENO; MORENO; SOARES, 1999). So to eficientes quanto os TCA e os inibidores da monoamina oxidase no tratamento da depresso de grau moderado, porm so provavelmente menos eficazes do que os TCA no tratamento da depresso grave, (RANG; DALE; RITTER, 2004, p. 467). Esses medicamentos inibem de forma potente e seletiva a recaptao de serotonina, resultando na potencializao da neurotransmisso serotoninrgica. A potncia da inibio de recaptao da serotonina variada, assim como a seletividade por noradrenalina e dopamina. A sertralina e a paroxetina so os mais potentes inibidores de recaptao. A potncia relativa da sertralina em inibir a recaptao de dopamina a diferencia farmacologicamente dos outros ISRSs, (MORENO; MORENO; SOARES, 1999). A fluoxetina notvel pela meia vida longa de seu metablito ativo, a norfluoxetina (7-9 dias no estado de equilbrio dinmico). Essa longa meia-vida permitiu a introduo de uma formulao para administrao uma vez por semana. A fluoxetina inibe diversas enzimas envolvidas no metabolismo de drogas, resultando em diversas interaes farmacolgicas significativas com outros antidepressivos, bem como com outros frmacos. A sertralina e a paroxetina apresentam parmetros farmacocinticos semelhantes aos dos frmacos tricclicos. O citalopram e a fluvoxamina assemelham-se a fluoxetina (KATZUNG, 2005, p. 407).

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Entre 1980 e 1996, foram introduzidos diversos frmacos, designados como antidepressivos de segunda e terceira gerao ou heterocclicos. A amoxapina e a maprotilina apresentam uma estrutura que se assemelha dos frmacos tricclicos, enquanto a trazodona e a bupropiona so distintas. Em 1990 foi introduzida a venlafaxina, um frmaco de terceira gerao quimicamente singular; a mirtazapina e a nefazodona, desenvolvida a partir da trazodona (KATZUNG, 2005, p. 404). A venlafaxina, mirtazapina, milnaciprano e duloxetina so inibidores seletivos da recaptao de serotonina e noradrenalina (ISRSNs), e apresentam fraca atividade como inibidores da recaptao de dopamina. A nefazodona um: inibidor de recaptao de serotonina e antagonista alfa-2 (IRSAs), esse mecanismo de ao se d por meio da captao neuronal de serotonina e noradrenalina. A fluvoxamina indicada no tratamento de certos distrbios afetivos e seu mecanismo de ao parece estar relacionado inibio seletiva da recaptura da serotonina nos neurnios cerebrais (MORENO; MORENO; SOARES, 1999; KATZUNG, 2005, p. 404). A bupropiona um inibidor seletivo de recaptao de dopamina (ISRD). A reboxetina um inibidor altamente seletivo e potente da recaptao da noradrenalina, portanto, pode ser chamada de ISRN (Inibidor Seletivo da Recaptao da Noradrenalina). A tianeptina um antidepressivo derivado dos triccliclos e seu mecanismo de ao essencialmente serotoninrgico, pois Tianeptina induz a recaptao da serotonina pelos neurnios da crtex, do hipocampo e do sistema lmbico (MORENO; MORENO; SOARES, 1999; KATZUNG, 2005, p. 404).

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2.1.3 FITOTERAPIA

H sculos a fitoterapia a forma de tratamento teraputico mais praticado. Mdicos famosos como Hipcrates (460-377a.C), Galeno (129-199), Avicena (980-1037), Paracelsus (1493-1541) e os mdicos botnicos A. Lonicerus, H.Bock, A.Matthiolus e L. Fucks (sculos XIV e XV.) foram os primeiros a ensinar, descrever e desenvolver a fitoterapia na prtica. As plantas medicinais foram descobertas pelo homem atravs da procura por alimentos e desde ento, foram aplicadas empiricamente para o tratamento de patologias (WISENAUER, 2006). No Brasil, o fitofarmco considerado uma substancia isolada do vegetal, cujas caractersticas qumicas so conhecidas, com a capacidade de produzir efeito farmacolgico (WISENAUER, 2006). Extratos so preparaes concentradas de consistncia lquida, viscosa, ou em forma de p, geralmente feita a partir de partes secas das plantas por macerao ou percolao (SCHULZ, HANSEL, TYLER, 2002). Dois fatores bsicos determinam a composio de um extrato: a qualidade da matria-prima vegetal e o processo de produo.A natureza no fornece seus produtos com uma composio definida e padronizada. Os materiais obtidos das plantas medicinais cultivadas apresentam variaes menores do que os materiais conseguidos de plantas que crescem livremente. A natureza do solvente e dos processos de extrao e secagem tambm afeta criticamente a composio do produto final (SCHULZ, HANSEL, TYLER, 2002).

2.1.4 PERSEA CORDATA

A Persea cordata pertence grande famlia Lauraceae, e quimicamente h poucos relatos sobre sua composio, sendo relatados a presena de esterides como -sitosterol e polifenis (ZAMPIROLO et al., 2008). As espcies da famlia Lauraceae so compostas de cerca de 55 gneros e mais de 2.000 espcies (JOSHI; VERMA; MATHELA, 2009). Esta rvore possui de 20-30 metros de altura, seu dimetro de 40-60 centmetros. A sua madeira

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avermelhada passando a pardacenta, com finas e curtas estrias mais claras de aspecto fibroso e superfcie um tanto spera e lustrosa (CORREIA, 1978) As plantas da famlia Lauraceae destacam-se entre as demais famlias pela sua importncia econmica. Algumas espcies tm sido utilizadas pelas indstrias para a fabricao de diversos produtos, porm, a maioria das espcies tem seu uso restrito s comunidades tradicionais que detm o conhecimento emprico da utilizao dessas plantas (MARQUES, 2001). De acordo com Vieira et al (2001), os estudos sobre as propriedades teraputicas da Persea cordata so poucos.A Persea cordata uma planta com atividade biolgica interessante, testes j comprovaram a existncia de compostos importantes em sua constituio, como flavonides, saponinas, cumarinas, polifenois e taninos. Segundo Silva (2004), a presena de flavonides faz com que ela possua uma variedade de atividades farmacolgicas, incluindo a de antioxidantes, antiinflamatria, antimicrobiana e a capacidade de inibir a angiogenese para induzir a apoptose e assim previnir a carcinogenese em modelos animais. A presena de saponinas pode inibir o crescimento das clulas tumorais por deteco do ciclo celular (FUCHS et. al., 2009; LOPEZ, 2009). Tradicionalmente a populao vem se utilizando de fitoterpicos para o tratamento de vrias patologias desde os primrdios da civilizao e em funo disso muitas plantas da flora brasileira vem sendo pesquisadas a fim de que se tenha garantias sobre a eficcia e segurana no uso destes medicamentos. Dentre essas plantas a Persea cordata, da famlia das Lauracease, conhecida popularmente como Abacate-do-mato, Canela-Rosa ou Pau-Andrade utilizada como cicatrizante e antiinflamatrio (VIEIRA, et al, 2001). Foram descritas recentemente a atividade antibacteriana do extrato da planta contra Staphylococccus aureus, Staphylococccus epidermidis, Streptococcus pyogenes, Bacilus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Salmonella dysenteriae, Proteus vugaris e Salmonella sp. Foram descritas tambm, atividades antifngicas contra levedura Candida albicans (VIEIRA et. al., 2001; SCHLEMPER et. al., 2001). A planta Persea

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cordata, tambm conhecida como pau-de-andrade ou abacate-do-mato uma espcie da flora catarinense, comumente usada na medicina popular como anti-inflamatrio e cicatrizante de feridas.

3 METODOLOGIA

3.1 EQUIPAMENTOS

Balana analtica (Bel Engineerring); Banho Maria Biomatic); Estufa de cultura Quimis (modelo 317 342), micropipetas, cronmetros.

3.2 OBTENAO DO EXTRATOBRUTO

As cascas (3 kg) aps secas foram fragmentadas em pedaos pequenos e acondicionadas em Erlenmeyers. A droga vegetal foi umedecida com gua para fazer o esponjamento das clulas. Em seguida o material vegetal foi macerado com metanol por vinte e um dias, com troca do solvente a cada sete dias, a fim de renovar o lquido extrator e assim esgotar a droga vegetal. Para realizar a troca do solvente, a droga vegetal era filtrada com papel filtro, o extrato bruto recolhido era armazenado em garrafas de vidro e conservado em geladeira. Aps trmino do processo de macerao, o solvente foi evaporado e o extrato bruto foi acondicionado em recipientes previamente tarados, os quais foram mantidos em dessecador por 2 (dois) dias com troca diria da slica ativada, a fim de estabelecer o rendimento total do extrato (SILVA, 2010; CECHINEL FILHO; YUNES, 1998).

3.3 OBTENO DAS FRAES

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Uma alquota (20 g) do extrato bruto ser dissolvida em 100 ml de metanol e foi acrescentado mais 50 ml de gua, e todo o lquido foi vertido em um funil de separao, ao qual ser adicionado 100 ml de hexano, para realizao do particionamento lquido-lquido com solventes de polaridade crescente, cujo processo foi repetido 3 vezes, a fim de extrair completamente as substncias lipoflicas, especialmente os compostos esterides. Em seguida, ser realizado o particionamento com o solvente acetato de etila, de caracterstica polar. A extrao ser repetida trs para que haja o esgotamento do extrato bruto, indicando que a maioria das substncias apresentar carter polar. O resduo do extrato bruto ser descartado (SILVA, 2010). Outra alquota do extrato bruto (20 g) ser dissolvida em 100 ml de metanol e 50 ml de gua e o particionamentoser iniciado com ter de petrleo, solvente apolar, cujo processo ser feito em triplicata, a fim de tentar extrair mais compostos apolares, seguido de particionamento com acetato de etila (SILVA, 2010). Os solventes das fraes sero evaporados e estas acondicionadas em recipientes previamente tarados, que ficaro armazenados em dessecador at peso constante, para determinao do rendimento de cada frao (SILVA, 2010).

3.4 ANIMAIS:

Sero utilizados na presente pesquisa camundongos Swiss fmeas, oriundos do Biotrio de passagem da Fundao Universidade do Contestado Campus Canoinhas, que sero mantidos em ciclo claro/escuro de 12 horas, em temperatura entre 22 e25C, com gua e rao ad libitum.

3.5 TRATAMENTO DOS ANIMAIS

Os procedimentos adotados com os animais seguiro os Princpios ticos, de acordo com a lei federal nmero 6.638 de 08 de maio de 1979. Uma soluo de 100mg/kg do extrato bruto ou fraes (hexano, acetato de etila e ter de petrleo) de Persea cordatasero preparadas atravs da diluio em Tween 5% (fraes apolares) ou em gua (fraes polares). A

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partir destas solues, sero feitas diluies seriadas para obteno das doses de 1 mg/kg, 0,1 mg/kg e 0,01 mg/kg de cada extrato. Os animais sero

tratados por via oral (p.o), com diferentes doses dosdiferentes extratos de Persea cordata 60 minutos antes da realizao do teste de suspenso pela cauda (TSC). Os animais controles sero tratados por via oral com uma soluo de Tween 5% (veculo). Os mesmos animais que foram submetido os TSC sero posteriormente submetidos ao teste do campo aberto (seguindo-se o mesmo protocolo de tratamento) a fim de excluir a possibilidade de que a diminuio do tempo de imobilidade no TSC seja devido a uma estimulao motora. Tendo em vista a necessidade de quatro grupos exerimentais (controle e trs doses de teste) e que sero testados quatro diferentes extratos (bruto, frao hexano, acetato de etila e ter de petrleo), estima-se que sero necessrios 6 animais para cada grupo, totalizando assim Para a realizao do presente trabalho sero utilizados 96 camundongos.

3.6. TESTE DE SUSPENSO DA CAUDA (TSC)

O tempo total de durao da imobilidade ser medido de acordo com o mtodo de Steruet al. (1985). Os camundongos ficaram acstica e visualmente isolados e foram suspensos 50 cm acima do cho com a calda presa por uma fita adesiva e a imobilidade ser registrada durante 6 minutos (Figura 1). Os antidepressivos reduzem o tempo de imobilidade neste teste (BUDNI, 2008).

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Figura 1. O teste de suspenso da cauda, segundo descrito por Steru (1985).

3.5 TESTE DO CAMPO ABERTO (CA)

Este teste utilizado para avaliar a atividade locomotora dos animais. Como frmacos que apresentam um efeito psicoestimulante podem representar um resultado falso positivo no TSC, o teste do campo aberto imprescindvel para se determinar a especificidade do efeito antidepressivo. O teste consiste em uma caixa de madeira medindo 40x60x50 cm, com o cho dividido em 12 quadrados iguais (Figura 2). O nmero de quadrados cruzados em um perodo de 6 minutos o parmetro utilizado para avaliar a atividade locomotora (RODRIGUES et al., 1996).

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Figura 2. O teste do campo aberto, segundo descrito por Rodrigues (1996).

3.8ANLISE ESTATSTICA

Os resultados obtidos sero avaliados atravs da anlise de varincia de uma via (ANOVA), seguido do Teste de Duncan. Os resultados sero considerados significativos quando p < 0,05.

4 RECURSOS

4.1 RECURSOS HUMANOS

Este trabalho ser realizado por dois alunos de iniciao cientfica do curso de Farmcia e uma professora orientadora.

4.2 RECURSOS MATERIAIS

Agulhas e seringas

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Balana analtica (Bel Engineerring); Balo volumtrico; Banho Maria ( Biomatic); Basto de vidro; Becker; Caixa para realizao do campo aberto Estante para tubos de ensaio; Estufa Extratos de P. cordata Pipetas volumtricas de vidro e micropipetas automticas; Solventes: metanol, ter de petrleo, hexano, acetato de etila; Tubos de ensaio

4.3 RECURSOS FINANCEIROS

Todos os equipamentos e reagentes constantes neste projeto e que sero utilizados j fazem parte dos recursos permanentes da Fundao Universidade do Contestado (FUnC-Campus Canoinhas), e encontram-se disponveis para utilizao.

5 CRONOGRAMA

Janeiro fevereiro 2013 Preparao dos extratos X

Maro abril 2013

Maiojunho 2013

Julhoagosto 2013

Setembro outubro 2013

Novembro dezembro 2013

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Avaliao do efeito tipoantidepressivo do extrato bruto Avaliao do efeito tipoantidepressivo da frao hexano Avaliao do efeito tipoantidepressivo da frao acetato de etila Avaliao do efeito tipoantidepressivo da frao ter de petrleo Reviso bibliogrfica Anlise estatstica Elaborao de relatrios Elaborao de artigo cintfico X X

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REFERNCIAS

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