UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS Departamento de Cincia dos Alimentos PCA522 Bioqumica de Alimentos Profa.

. Alcinia de Lemos Souza Ramos Aula Prtica 1 EFEITO DO pH NA ATIVIDADE DAS ENZIMAS
Objetivo: Estudar do efeito do pH na atividade da enzima amiloglicosidase Procedimento: 1- Identificar os tubos de ensaio; 2- Em cada tubo, adicionar 0,5 mL de soluo 1% de amido solvel e 0,4 mL da respectiva soluo tampo (conforme tabela abaixo). Incubar por cerca de 5 minutos no banho-Maria a 55oC, para equilibrar a temperatura.
TUBO Controle 1 2 3 4 5 6 7 AMIDO 1% 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL SOL. TAMPO 0,5mL H2O destilada 0,4mL tampo acetato pH 3,6 0,4mL tampo acetato pH 4,0 0,4mL tampo acetato pH 4,5 0,4mL tampo acetato pH 5,0 0,4mL tampo fosfato pH 6,0 0,4mL tampo pH 7,0 0,4 mL tampo fosfato pH 8,0 ENZIMA 0,1 mL 0,1 mL 0,1 mL 0,1 mL 0,1 mL 0,1 mL 0,1 mL ABSORBNCIA (510 NM)

3- Sem retirar os tubos do banho-Maria, adicionar 0,1 mL da enzima amiloglicosidase e incubar por exatos 5 minutos. (O tubo controle NO vai receber esta soluo). 4- Aps a incubao (5 minutos), paralisar a reao com 0,1 mL de HCl 0,1N em todos os tubos e fazer a determinao de acares redutores pelo mtodo de Somogyi-Nelson: 4.1. Adicionar 1 mL de Reagente I (azul) em todos os tubos de ensaio. 4.2. Colocar os tubos a 100C por 10 minutos (banho-Maria em ebulio). 4.3. Adicionar 1 mL de Reagente II (amarelo) em todos os tubos de ensaio. 4.4. Adicionar 10 mL de gua destilada em todos os tubos 4.5. Esperar 5 minutos e medir a absorbncia a 510 nm. Zerar o espectrofotmetro com o controle (branco).

UNIVERSIDADE FEDERAL DE LAVRAS Departamento de Cincia dos Alimentos PCA522 Bioqumica de Alimentos Profa. Alcinia de Lemos Souza Ramos Aula Prtica 2 EFEITO DA TEMPERATURA NA ATIVIDADE DAS ENZIMAS
Objetivo: Estudar do efeito do temperatura na atividade da enzima amiloglicosidase Procedimento: 1- Identificar os tubos de ensaio; 2- Em cada tubo, adicionar 0,5 mL de soluo 1% de amido solvel e 0,4 mL da soluo tampo (pH 6,0). Incubar por cerca de 5 minutos no banho-Maria em diferentes temperaturas (conforme tabela abaixo), para equilibrar a temperatura.
TUBO Controle 1 2 3 4 5 6 7 8 AMIDO 1% 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL Temperatura de Incubao (C) 55 40 50 55 60 70 80 90 100 ENZIMA 0,1 mL 0,1 mL 0,1 mL 0,1 mL 0,1 mL 0,1 mL 0,1 mL 0,1 mL ABSORBNCIA (510 NM)

3- Sem retirar os tubos do banho-Maria, adicionar 0,1 mL da enzima amiloglicosidase e incubar por exatos 5 minutos. (O tubo controle NO vai receber esta soluo). 4- Aps a incubao (5 minutos), paralisar a reao com 0,1 mL de HCl 0,1N em todos os tubos e fazer a determinao de acares redutores pelo mtodo de Somogyi-Nelson. 4.1. Adicionar 1 mL de Reagente I (azul) em todos os tubos de ensaio. 4.2. Colocar os tubos a 100C por 10 minutos (banho-Maria em ebulio). 4.3. Adicionar 1 mL de Reagente II (amarelo) em todos os tubos de ensaio. 4.4. Adicionar 10 mL de gua destilada em todos os tubos 4.5. Esperar 5 minutos e medir a absorbncia a 510 nm. Zerar o espectrofotmetro com o controle (branco).