DETERMINAREA INDICELUI DE POLIFENOLI TOTALI (IPT) SAU INDICELE D280

Nucleele benzenice, caracteristice compuilor fenolici, absorb puternic lumina ultraviolet, avnd un maxim n jur de 275-280 nm. Aparatur i materiale - spectrofotometru care s permit citiri la 280 nm; - cuve de cuar de 1, 2; 5 si 10 mm; - baloane cotate de 50 si 100 cm3: - pipete gradate i cotate de 1; 2; 5 i 10 mL; Modul de lucru n prealabil, este necesar ca vinul s fie limpezit prin centrifugare sau filtrare prin membrane cu pori de 0,45 - 3. Vinul se dilueaz 1% cu ap distilat. Fie d factorul de diluie. Se citete absorbana (densitatea optic) la 280 nm n cuv de cuar (sau din plastic) de 1 cm (10 mm) traseu optic n comparaie cu ap distilat. Fie D280 (A280) densitatea optic (absorbana) citit la spectrofotometru. Calculul rezultatelor Indicele de polifenoli totali (IPT) sau indicele D280 este egal cu: IPT = D280 = D280(A280) d Se exprim cu o zecimal. La citirea absorbanei la 280 nm, trebuie deasemeni s se in cont de proteine. Se poate face o dubl citire dup ce polifenolii au fost fixai pe PVPP. Aceast particularitate este interesant pentru vinurile albe i roze. Exprimarea coninutului de compui fenolici n g/L se face cu ajutorul metodei curbei de etaloare. Pentru aceasta este necesar s se traseze o curb de etalonare, folosind soluii de acid galic de concentraii de (0; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 i 1 g/L) sau de Dcatechin, respectnd modul de lucru de la determinarea indicelui Folin-Cioclteu. Datele obinute se nscriu ntr-un sistem de dou axe coordonate astfel: - n abscis concentraia soluiilor de acid galic; - n ordonat absorbantele coorespunztoare fiecrei soluii.
-1-

Unind punctele coorespunztoare fiecrei perechi de date se obine curba de etalonare (Fig. 1), care este o dreapt care trece prin originea axelor coordonate. Ecuaia acestei drepte este descris de ecuaia de gradul I de forma: y = 1,3238 x - 0,0014 n care: y - coninutul de compui fenolici (acid galic), g/L; x - valoarea absorbantei A750 citit la aparat.

Figura 1

-2-

DETERMINAREA INDICELUI FOLIN-CIOCLTEU

Indicele Folin-Cioclteu (Fc) este specific numai compuilor fenolici cu nsuiri reductoare i are valori cuprinse ntre 2,5 i 11,5 la vinurile albe i ntre 16 i 75 la cele roii. Principiul metodei n mediul bazic i n prezena fenolilor, amestecul de acizi fosfotungistic (H3PW 12040) i fosfomolibdic (H3PMo12O40) este redus la oxizii albatri de tungisten (W 8O23) i molibden (Mo12O23). Aceast coloraie albastr posed un maxim de absorbie la = 750 nm. Coloraia este proporional cu coninutul de compui fenolici totali. Reacia se produce n mediul alcalin, intesitatea colorant albastr obinut este n funcie de cantitatea de fenoli din mediu. ns aceast culoare nu este stabil i evolueaz n timp urmnd 2 faze: - o faz rapid (0 - 30 minute) care conduce la culoarea albastr; - o faz lent dup 30 minute, cu evoluia culorii ctre albastru nchis. Dac citirea absorbanei se face dup 30 - 45 de minute, eroarea este foarte mic i valoarea sa este reproductibil. Aparatur i materiale - spectrofotometru care s permit citiri la 280 i 750 nm; - cuve de cuar i de sticl de 1, 2, 5 i 10 mm: - baloane cotate de 50 i 100 cm3; - pipete gradate i cotate de 1; 2; 5 i 10 mL; - hrtie de filtru. Reactivi - reactiv Folin- Cioclteu preparat astfel: Se dizolv 100 g wolframat de sodiu (Na2WO4 2 H2O) i 25 g molibdat de sodiu (Na2MoO4 2 H2O) n aproximativ 700 mL ap distilat. Se adaug 50 mL acid ortofosforic 85% i 100 mL HCl conc.( = 1,18 - 1,19). Soluia obinut se fierbe timp de 10 ore ntr-un balon prevzut cu refrigerent cu reflux. Dup 10 ore se adaug 150g sulfat de litiu (Li2SO4 H2O) i 5 picturi de ap de brom i se continu
-3-

fierberea, fr refrigerent, timp de 15 minute (pn se obine culoarea galben deschis). Se prefer s se utilizeze n momentul folosirii. - Na2CO3 anhidru, soluie 20% sau 200 g/L (m/v): 200 g carbonat de sodiu se dizolv n 700-800 ap fierbinte, se rcete i se aduce la semn cu ap distilat ntr-un balon cotat de 1 litru. Modul de lucru ntr-un balon cotat de 100 mL se introduc: - 1 mL vin rou, diluat n prealabil 1/5 (10 mL vin la balon cotat de 50 mL); - 50 mL ap distilat; - 5 mL reactiv Folin- Cioclteau sub agitare; - 20 mL soluie Na2CO3 20%. Se aduce la semn la 100 mL cu ap distilat, se agit energic coninutul balonului si se las n repaos timp de 30 minute. Se citete absorbana (densitatea optic) la = 750 nm cu o cuv de 10 mm (l cm) prin raportare la un martor preparat cu ap distilat n loc de vin. Fie A750 absorbana probei citit la spectrofotometru. Pentru a se evita erorile de analiz trebuie ca absorbana s aib valori cuprinse ntre 0,3 i 0,8. n caz contrar se face o diluie corespunztoare vinului pentru a se obine absorbata dorit. Observaie: Reactivul Folin-Cioclteu reacioneaz cu proteinele, zaharurile i S02. Este necesar s se fac o diluie care s nu depeasc 10 g/L zaharuri. Aceast determinare este indicat pentru vinurile roii seci. Calculul i exprimarea rezultatelor Rezultatul n funcie de tipul vinului analizat, este exprimat sub form de indice Folin-Cioclteu (Fc) obinut, nmulind absorbana (densitatea optic) cu 100 n cazul vinurilor roii diluate 1/5 (sau prin factorul corespunztor diluiei folosite) i prin 20 n cazul vinurilor albe conform relaiilor: Fc = A750 100 n care: Fc= indicele Folin-Cioclteau i A750 = absorbana (densitatea optic) citit la 750 nm. Precizare: Diferena ntre rezultatele a dou determinri efectuate simultan i rapid de acelai analist prin aceiai metod, nu trebuie s fie mai mare ca 1.

-4-