Practica de Laboratorio 4: Actividad Enzimtica

Marco terico:
Una enzima es una porteina especializada en la catlisis de reacciones biolgicas especficas, su funcin es incrementar la velocidad de una reaccin. Las caractersticas que presenta una enzima son: Ser protenas Ser catalizadores ms eficientes que se conocen. La mayor parte de las reacciones celulares ocurren a una velocidad alrededor de un milln de veces ms alta de lo que seran en ausencia de enzimas. Se distinguen por su especificidad, lo que significa que cada conversin de un reactivo (llamado sustrato) en un producto es catalizada por una enzima determinada. Estn regulados porque pueden cambiar de un estado de baja a alta actividad, dependiendo de las condiciones en las que se encuentren. La actividad de una enzima depende de su estructura y otras necesitan uno o ms componentes como los proteicos llamados cofactores, que puede ser un ion metlico o una molcula llamada coenzima. EL efecto producido en enzimas por el calor es la desnaturalizacin en temperaturas comprendidas entre 55-60 C. En esta prctica se utilizaran hgado, papa y manzana debido a que contienen la enzima catalasa. La reaccin de la catalasa es la siguiente: 2 H2O2 2 H2O + O2

En la prctica la reaccin anterior se observara por un burbujeo en el agua que se encontrara contenido en el tubo de ensayo. El sitio activo de la catalasa es la agrupacin ordenada espacialmente pero estructuralmente asimtrica de un pequeo nmero de residuos aminoacidicos responsables de la actividad cataltica de la enzima, sus caractersticas son:

Es una porcin relativamente pequea en el volumen total de la enzima. Es una hendidura u hoyo que se forma al plegarse la protena Los aminocidos que la forman estn alejados en la secuencia lineal Los aminocidos que lo forman son polares con y sin carga.

Un inhibidor es una molcula que se une a enzimas y disminuye su actividad, la unin impide la entrada del sustrato al sitio activo de la enzima y obstaculiza que la enzima catalice su reaccin correspondiente. Los reactivos que utilizaremos en la prctica ser: Cianuro y Plomo. El efecto de cada uno es el siguiente: Plomo: La accin de la enzima es una reaccin directa de ion Fe (III) con el oxgeno, para liberar perxido y H2O, sin embargo la adicion de plomo logra una sustitucin de ion Fe por el de Pb, cuando se logra la sustitucin en el sitio activo, la enzima queda desactivada, pues el plomo ahora en la enzima no tiene la cantidad de orbitales vacios para cumplir con la misma funcin del hierro. Cianuro: El ion cianuro se coordina muy fuertemente con el ion Fe (III), esto hace que el ion Fe(III) no tenga la capacidad de reaccionar con el oxigeno entra del perxido de hidrogeno y entonces no cumpla su funcin. En conclusin en el sitio activo solo puede tener 1 sustrato y en el caso del plomo se sustituye el Fe por Pb y en el caso del cianuro este se une al Fe y al estar 2 sustratos ya no se puede llevar a cabo la reaccin.

La catalasa es una enzima que podemos encontrar en muchos organismos vivos. El grupo Hemo se compone de un anillo de porfirinas y un tomo de hierro, la protena est formada por 4 subunidades idnticas, cada monmero contiene un grupo protesticohemo en el centro activo, el grupo hemo tambin contiene ferroprotpporfirina. La siguiente imagen la estructura del grupo hemo:

Fundamento:
La catalasa es una enzima con un grupo hemo, el grupo hemo contiene hierro y un anillo de porfirina el que corresponde a un tetrapirrol cclico, este macro ciclo est compuesto por cuatro anillos `pirrol unidos por enlaces meteno o metileno, en el centro de este anillo se encuentra el tomo de hierro. La accin de la enzima es una reaccin directa del in Fe(III) de el grupo hemo de la catalasa y con el oxgeno del agua oxigenada, para liberar el perxido y formar agua y oxigeno. En la reaccin ocurre la transferencia de dos

electrones entre dos molculas de perxido de hidrgeno en la cual una funciona como donador y otra como aceptor de electrones. El mecanismo de reaccin se lleva a cabo en dos pasos. En el primero la catalasa se oxida por una molcula de perxido formando un intermediario llamado compuesto I. El compuesto I se caracteriza por tener un grupo ferroxilo con FeIV y un radical catinico de porfirina. En esta reaccin se produce una molcula de agua (Reaccin 1). En el segundo paso de la reaccin, el compuesto I es reducido por otra molcula de perxido regresando la catalasa a su estado inicial y produciendo agua y dioxgeno (Reaccin 2)

Cuando se le agrega plomo este logra una sustitucin del in Fe(III) por la del in Pb(II). Cuando se logra la sustitucin, la enzima queda desactivada, pues el plomo (ahora en la enzima) no tiene la cantidad de orbitales vacos para cumplir con la misma funcin del hierro. Enz (por FeIII) + H2O2 + Pb Enz (el FeIII se sustituyo por el Pb) + H2O2 *

La adicin de in cianuro tiene un modo diferente de actuar. El in cianuro se coordina muy fuertemente con el in Fe(III). Esto hace que el in Fe(III) no tenga la capacidad de reaccionar con el oxgeno extra del perxido de hidrgeno, y entonces no cumpla su funcin. Enz (con FeIII) + H2O2 + CN FeCN3 (el FeIII se reacciono con el CN) + H2O2

Todas las enzimas son protenas. Por lo tanto, todas las enzimas sufren desnaturalizacin frente al calor. Esto quiere decir que cuando la temperatura es muy elevada, la enzima pierde su estructura terciaria, por lo tanto su sitio activo tambin se desnaturaliza, y ya no puede cumplir su funcin.

Fichas de seguridad:
Cianuro de sodio
Formula: NaCN Riesgos por:

Inhalacin: Puede causar dolor de garganta, dolor de cabeza,

Confusin mental, debilidad, jadeo, convulsiones y

Prdida del conocimiento.

Ingestin: Puede producir sensacin de quemazn, nuseas,

Vmitos y diarrea.

Contacto con la piel: Puede provocar enrojecimiento y dolor. Contacto con los ojos: Puede causar enrojecimiento y dolor.

Almacenamiento:
Recipientes bien cerrados. Ambiente seco. En local bien ventilado. Temperatura ambiente. Acceso restringido, slo autorizado a tcnicos. No almacenar en recipientes metlicos.

Propiedades fsicas y qumicas

Aspecto: Polvo blanco. Olor: Dbil a almendras amargas. PH X11.7 Punto de ebullicin: 1496C Punto de fusin: 563C Presin de vapor: 1 pH (20C) Densidad (20/4): 1,55 Solubilidad: 600 g/l en agua a 20C

Nitrato de plomo
Formula: Pb (NO3)2
Riesgos por:

Inhalacin: Trasladar a la persona al aire libre. En caso de que persista el

malestar, pedir atencin mdica.

Contacto con la piel: Lavar abundantemente con agua. Quitarse ropas

contaminadas.

Ojos: Lavar con agua abundante manteniendo los prpados abiertos.

Ingestin: Beber agua abundante. Provocar el vmito. Pedir inmediatamente

atencin mdica.

Almacenamiento:
Recipientes bien cerrados. Mantener alejado de sustancias inflamables, fuentes de ignicin y calor. Temperatura ambiente.

Propiedades fsicas y qumicas

Aspecto: Slido

Olor: Inodoro.

PH: 3 - 4 (50g/l)

Punto de fusin/punto de congelacin 470 Cr Color: blanco Densidad relativa: 4,53 Solubilidad: 525 g/l agua 20 C

Resultados:
Muestra biolgica: HIGADO Numero de Tubo 1 2 3 4 Simbologa: 0 : No hay burbujeo +: Grado de Burbujeo Observaciones: +++++++ 0 ++++ +++

Muestra biolgica: PAPA Numero de Tubo 1 2 3 4 Simbologa: 0 : No hay burbujeo +: Grado de Burbujeo Muestra biolgica: MANZANA Numero de Tubo 1 2 3 4 Simbologa: 0 : No hay burbujeo +: Grado de Burbujeo Observaciones: +++++ 0 +++ ++ Observaciones: +++++ 0 ++ ++++

Discusin y comparaciones de resultados:

La actividad de una enzima puede ser disminuida o eliminada completamente por la Accin de ciertas sustancias a las cuales se las conoce con el nombre genrico de Inhibidores enzimticos. Debemos aclarar que no deben ser incluidos en este grupo de sustancias, aquellos agentes que producen simplemente una

destruccin irreversible de la enzima, como podran ser todos aquellos que conducen a su desnaturalizacin, por ejemplo los cidos fuertes. Dentro de los inhibidores enzimticos se encuentran los inhibidores irreversibles los cuales hacen que la enzima no recobre su actividad por remocin del inhibidor libre. Esto es debido a que el inhibidor irreversible, acta por lo general modificando Irreversiblemente o an destruyendo algunos de los grupos esenciales del centro activo. En otras palabras se puede decir que es la reaccin con un grupo qumico de la enzima, modificndola covalentemente.

Sus efectos dependen del tiempo de actuacin del inhibidor.

Bloquean unin al sustrato

Inhiben actividad

Por lo general son altamente txicos. Casi todos los inhibidores enzimticos irreversibles son sustancias txicas (naturales o sintticas).

Algunos ejemplos son los siguientes:

Hg2+, Pb2+, CN-, As

Tambin cabe decir que dentro de la temperatura las enzimas poseen una temperatura ptima a la cual la enzima presenta mxima eficiencia cataltica. La temperatura puede modificar propiedades biolgicas de las enzimas y hacer que las pierdan, como resultado que su actividad enzimtica ya no exista.

En la prctica tuvimos que separar las muestras de cada tipo (hgado, papa y manzana) en cuatro tubos con condiciones diferentes:

En el primer tubo se encontraba un pedazo de la especie sin hervir, en el segundo tubo se coloco un pedazo hervido de cada especie, mientras que en el tercero haba un pedazo sin hervir pero con 5 gotas de NaCN y en el ultimo tubo se encontraba tambin un pedazo sin hervir con 5 gotas de Pb(NO 3)2. Cuando se agrego el agua oxigenada a cada especie que contena catalasa como su enzima, esta reacciono con cada tubo demostrando la actividad de la catalasa que haba en cada uno de ellos despus de sus modificaciones hechas durante el experimento. En el primer tubo de cada muestra se pudo observar que la actividad de la catalasa era mayor al de los otros tres tubos ya que al hervir el pedazo correspondiente del segundo tubo este perdi sus propiedades biolgicas lo cual hizo que perdiera la enzima que poda hacer la reaccin de la descomposicin del perxido de hidrgeno en oxgeno y agua (H 2O2). El tercer y cuarto tubo se mostro muy poca reaccin ya que como se ha explicado antes el CN y el Pb resultan ser ambos inhibidores irreversibles y por lo tanto reacciona con el grupo qumico de la enzima en este caso con el Fe que representa el ncleo de hierro del grupo hemo unido a la enzima que actan como cofactores en cada una de nuestras especies y hace que no se recobre la actividad por remocin al inhibidor libre lo cual da a decir que el inhibidor irreversible acta por lo general modificando irreversiblemente o an destruyendo algunos de los grupos esenciales del centro activo. Dentro de las diferencias de nuestros resultados tericos y experimentales se puede concluir que no hay gran diferencia, ya que ambos nos explican que en presencia de inhibidores y a temperaturas altas la enzima no puede completar su reaccin, ya que se han perdido las propiedades biolgicas y se pausa la actividad de la enzima.

Conclusiones:
Dentro de nuestra practica y comparando nuestro resultados tericos y prcticos podemos concluir que estos son correctos y que se asemejan mucho a nuestra investigacin y el fundamento planteado. Por ltimo podemos dar una breve explicacin acerca de los fenmenos ocurridos durante la prctica; pudimos observar la diferente actividad

enzimtica de cada uno de nuestros experimentos utilizando diferentes fuentes biolgicas y se pudo ver la actividad de la catalasa que tenia cada una de nuestras especies, reaccin que se vio mucho ms marcada en el hgado sin hervir y sin ningn inhibidor, mientras tanto el resto de nuestro tubos tuvo complicaciones debido a la temperatura y los inhibidores aplicados dentro de estos.

Bibliografas:
http://www.uacj.mx/ICB/RedCIB/REB/2003/06/2003-2_LA%20ESTRUC_.pdf http://www.fmvuba.org.ar/grado/medicina/ciclo_biomedico/segundo_a%C3%B1o/bioquimica/Seminario%207 -Inhibicion%20enzimatica.pdf http://www2.uah.es/sancho/farmacia/temas%2009-10/Tema%209%20%20inhibicion%20enzimatica%20farmacia.pdf