VALIDACIN DE MTODOS ANALTICOS

Por qu validar?

Q.F MARA MERCEDES MEDINA H

Por qu validar?
La validacin forma parte integral del sistema de calidad. Las BPM exigen que tanto los procesos como las metodologas analticas estn validadas. Proporciona confianza y seguridad al mtodo analtico y calidad a los resultados. Optimizacin del mtodo. Competitividad. Y
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NORMA 17025
REQUISITOS TCNICOS

5.4.2 Seleccin de los mtodos.

.....Preferiblemente, se deben emplear mtodos publicados en normas internacionales, regionales o nacionales. El laboratorio debe garantizar que utiliza la ltima edicin vlida de las normas, a menos que sea apropiado o imposible de hacerlo as.
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NORMA 17025
REQUISITOS TCNICOS
5.4.2

Seleccin de los mtodos.

.... Los mtodos desarrollados o adoptados por el laboratorio tambin pueden ser utilizados si resultan adecuados para los fines propuestos y si estn validados. El cliente debe ser informado sobre el mtodo elegido
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NORMA 17025
REQUISITOS TCNICOS
5.4.3

mtodos desarrollados por el laboratorio. La introduccin de mtodos de ensayo y calibracin desarrollados por el laboratorio para su propio uso debe ser una actividad planeada y se debe asignar a personal calificado y equipado con los recursos adecuados.
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NORMA 17025
Qu es validar?
5.4.5

Validacin de los Mtodos.

5.4.5.1

Validacin es la confirmacin por examen y suministro de evidencias objetivas del cumplimiento de los requisitos particulares para un uso especfico.
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USP 31
Qu es validar? Proceso por el cual se establece mediante estudios de laboratorio que las caractersticas de calidad del mtodo analtico se adecuan a los requerimientos y necesidades de la aplicacin analtica propuesta.

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DEFINICIONES
TCNICA
Aplicacin de un principio cientfico del cual se ha demostrado su utilidad para proveer informacin analtica. Ej.: AA , IR, CG, HPLC.
Taylor JK. Validation of analytical methods. 184th Q.F MARA MERCEDES MEDINA ACS National Meeting. Kansas. USA. 1982. H

DEFINICIONES
MTODO
Adaptacin

de una tcnica para una medicin especfica con un fin determinado.

Taylor JK. Validation of analytical methods. 184th ACS National Meeting. Kansas. USA. 1982.
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DEFINICIONES
PROCEDIMIENTO
Conjunto

de instrucciones detalladas necesarias para llevar a la prctica un mtodo, presentadas en forma escrita.

Taylor JK. Validation of analytical methods. 184th ACS National Meeting. Kansas. USA. 1982.11 Q.F MARA MERCEDES MEDINA
H

FASES DE LA VALIDACIN

FASE I : ESTANDARIZACIN OPTIMIZACIN DE CONDICIONES Y VARIABLES FASE II : DETERMINACIN DE LAS CARACTERSTICAS DE DESEMPEO DEL MTODO FASE III : EVALUACIN POR RESULTADO
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VALIDACIN
La documentacin es parte esencial de la validacin
ESTANDARIZACIN OPTIMIZACIN DE CONDICIONES Y VARIABLES

PROTOCOLO DE VALIDACIN

REALIZACIN DE LA VALIDACIN

CERTIFICADO DE VALIDACIN

INFORMES TCNICOS

EVALUACIN RESULTADOS ANALTICOS

PROTOCOLO DE VALIDACIN
Conjunto de instrucciones que garantizan resultados uniformes de un procedimiento de validacin, constituye la planificacin, ejecucin, verificacin y control de la validacin.

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PROTOCOLO DE VALIDACIN
Objetivos Alcance Responsabilidad Referencias Factores crticos Parmetros a evaluar y C.A. Muestras Equipos Mtodo analtico
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VALIDACIN- Referencias

USP

ICH

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VALIDACION
Parmetro I
Cuantitativo Exactitud Precisin Si Si Si Si

II
Ensayo lmite * No

III

IV

* Si

No No

Especificidad
Lmite de deteccin Lmite de cuantificacin Linealidad Rango

Si
No No Si Si

Si
No Si Si Si

Si
Si No No *

*
* * * *

Si
No No No No

Q.F MARA MERCEDES MEDINA * Puede ser requerido, H

17 dependiendo del ensayo

SELECTIVIDAD
Este parmetro se refiere a la propiedad del mtodo para producir una respuesta debida solo al analito de inters, libre de interferencias de otros componentes. Metabolitos del analito. Productos de degradacin. Matriz de la muestra.
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SELECTIVIDAD
Como se hace? Analizar matriz sin activo. Analizar por triplicado matriz adicionado con los productos de degradacin, sustancias relacionadas y sustancias de inters equivalente al 100%. Analizar por triplicado muestras solas, solo el analito de inters.
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SELECTIVIDAD
Como se hace? Someter al activo a condiciones de degradacin forzada. Termlisis (105C, 8 das) Fotolisis (Luz natural o ultravioleta, 8 das) Hidrlisis acida (HCl 0.1N, 24 horas) Hidrlisis alcalina (NaOH 0.1N, 24 horas) Oxidacin (H2O2)
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SELECTIVIDAD
Ensayos separativos No se puede hacer identificacin slo con el tiempo de retencin.
HPLC/DAD HPLC/MS HPLC FR / FN CG/MS CG/FTIR
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SELECTIVIDAD
Criterios de aceptacin.
Al analizar el placebo no hay respuesta. Resolucin > 1.5 Factor de coleo <2 Nmero de platos tericos > 2000 Identidad del pico Pureza de pico. Ausencia de coelucin. Recuperacin del analito 98-102%
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LINEALIDAD Y RANGO
Se refiere a la proporcionalidad entre la concentracin del analito y su respuesta.
Como se hace? Solucin patrn Muestra problema 3 a 5 niveles de concentracin, mnimo por triplicado.
mg de activo vs Vol. titulante 16.000 14.000 12.000 10.000 8.000 6.000 4.000 2.000 0.000 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 mg Q.F MARA MERCEDES MEDINA H mg activo vs Vol titulante Lineal (mg activo vs Vol titulante) y = 0.7215x + 0.1719 R2 = 0.9973

Volumen

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LINEALIDAD Y RANGO
Criterios de aceptacin
Coeficiente de correlacin r y de determinacin r2. r: >= 0.999 r2: >= 0.990 Prueba para el intercepto (prueba t) Prueba para la pendiente (prueba t) Prueba para la regresin (Prueba F) Q.F MARA MERCEDES MEDINA
H

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EXACTITUD
Grado de concordancia entre el valor que es aceptado convencionalmente como valor verdadero o un valor de referencia y el valor encontrado. Indica que cerca se esta del valor verdadero

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EXACTITUD
Como se hace?
Se recomienda un mnimo de 3 determinaciones por 3 niveles de concentracin en todo el rango especificado. (80%-120%) La exactitud se expresa como: Porcentaje de recuperacin (%R) %R = MERCEDES MEDINA xm/U*100 Q.F MARA
H

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EXACTITUD
Criterios de aceptacin
Porcentaje de recuperacin: 98.0 - 102.0% Coeficiente de variacin: <= 2.0% Test De Cochran Si G calculado < G tabulado se acepta Ho entonces las varianzas entre los niveles de concentracin son equivalentes, es decir el factor concentracin no influye en la variabilidad de los resultados.
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PRECISIN
Grado de concordancia (grado de dispersin) entre una serie de medidas obtenidas de mltiples muestras de una muestra homognea bajo condiciones prescritas.
Se presentan tres niveles de precisin Repetibilidad Precisin intermedia Reproducibilidad
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REPETIBILIDAD
Expresa la precisin de la tcnica analtica bajo las mismas condiciones de operacin en un intervalo de tiempo corto.
Es llamada precisin intra-ensayo. La repetibilidad esta dividida en dos niveles Repetibilidad del sistema Repetibilidad del mtodo
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PRECISIN
Como se hace?
Repetibilidad Mnimo 6 muestras al 100% un mnimo de 3 muestras a tres niveles. (80%-120%) Precisin intermedia Se estudiara la variacin de los factores da (3 das) y analista (2 analistas) al 100% de la concentracin.
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PRECISIN
Criterios de aceptacin Repetibilidad Coeficiente de variacin: <= 2.0% Precisin intermedia Coeficiente de variacin global: <= 2 CV de la repetibilidad. Coeficiente de grupos: <= 2.0% El resultado se presenta con intervalos de confianza para cada nivel de concentracin. X t * s/n Q.F MARA MERCEDES MEDINA
H

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REPRODUCIBILIDAD
El objetivo, es verificar que el mtodo de anlisis proporciona los mismos resultados en diferentes laboratorios. Es llamada precisin inter-laboratorios. Se acepta una variacin del 10% del valor promedio de los resultados del laboratorio primario.
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ROBUSTEZ
Medida de la capacidad para permanecer inalterado ante pequeas pero deliberadas variaciones en ciertos parmetros. Proporciona idea de fiabilidad durante la aplicacin de rutina.
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ROBUSTEZ
Como se hace? La evaluacin de la robustez se realiza mediante diseos factoriales: Diseo factorial completo y fraccionado Diseo de Youden-Steiner

Q.F MARA MERCEDES MEDINA H

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ROBUSTEZ
Criterio de aceptacin
Clculo del efecto:

Vd-vd s+t+y+z - u+v+w+z 4 4 El valor encontrado se compara con la desviacin estndar de la repetibilidad del mtodo.
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VALIDACIN- Referencias
US FDA Guidance on method validation http://www.fda.gov/cder/guidance/2396df t.htm For US FDA data submissions
Guideline for Submitting Samples and Analytical Data for Methods Validation Published by employees of the US FDA, February 1987, http://www.fda.gov/cder/guidance/ameth.htm

VALIDACIN- Referencias
Validation of chromatographic methods, Reviewer Guidance (FDA) http://www.fda.gov/cder/guidance/cm c3
Policies and Procedures Guide for the Official Methods Program (OMA) http://www.aoac.org/vmeth/omamanual/omaman ual.htm

VALIDACIN- Referencias
USP 32 : <1225> Validation of Compendial Methods, United States ICH Q2A: Validation of Analytical Procedures: Methodology http://www.fda.gov/cder/guidance/ichqa2.
ICH Publicaciones, Guas: http://www.ich.org/UrlGrpServer.jser?@_ID=363& @_TEMPLATE=272

VALIDACIN- Referencias
Programas de Validacin de Mtodos

http://www.aoac.org/vmeth/page1.htm

http://www.ivthome.com/publications/index.htm http://www.ivthome.com/free/index.htm

Gracias