Apostila da Oficina Prtica de Gentica, Genoma e Biotecnologia www.odnavaiaescola.

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Contedo deste mdulo
Cromossomos Genes Alelos Estrutura da molcula de DNA Caractersticas fsico-qumicas do DNA Extrao de DNA

Primeiro Mdulo
Descoberta do DNA Todos os cromossomos so formados de DNA, ou podemos dizer que o cromossomo nada mais do que uma longa fita dupla de DNA, toda enovelada e dobrada sobre si mesma, de vrias formas, at atingir o aspecto de cromossomo. Dizer que um cromossomo feito de DNA o mesmo que dizer que um novelo feito de linha. Do ponto de vista estrutural, o DNA se apresenta como uma dupla fita dobrada em forma de hlice. As duas fitas so antiparalelas, ou seja, esto dispostas em direes opostas. O que define a direo de cada uma das fitas o local de ligao entre o grupo fosfato com o anel de desoxirribose. Se a ligao ocorre no carbono 3, dizemos que a fita est na direo 3-5; se a ligao ocorre no carbono 5, dizemos que a fita est na direo 5-3. Todas as informaes relativas construo e ao funcionamento de nosso organismo esto embutidas em nosso DNA. O que faz com que tenhamos diferentes caractersticas (ou seja, por que somos diferentes um do outro?) est no fato de termos diferentes formas de um mesmo gene, o que o mesmo que dizer que possumos diferentes alelos. Pense, por exemplo, na cor amarela. H diferentes tons de amarelo: amarelo da seleo, amareloouro, amarelo escuro. Todos so similares o suficiente para serem amarelos, mas so, no entanto, diferentes. O mesmo raciocnio pode ser feito para os alelos. Todos ns temos os mesmos genes caractersticos da espcie humana. Por exemplo, todos ns temos o gene amarelo, mas isso no significa que meu amarelo o mesmo que o seu. Deste modo, temos alelos diferentes e o que faz sermos quem somos a combinao entre todos os nossos alelos (gentipo) mais as influncias do ambiente a nossa volta (que em conjunto determina o fentipo). O que difere um alelo do outro est na seqncia de DNA. importante observar que o DNA de um indivduo o mesmo em todas as clulas do corpo. O que faz com que as clulas presentes no olho sejam diferentes de neurnios, por exemplo, so os genes que esto ativos em cada um desses dois tipos celulares. Dependendo  do tipo celular, diferentes grupos de genes esto ativos

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A espcie humana possui 22 tipos de cromossomos autossmicos (1 a 22) e dois cromossomos sexuais (X e Y). Enquanto as mulheres so XX os homens so XY. Acima est o caritipo de um homem.Todos os cromossomos esto duplicados.

A molcula de DNA formada por um acar, uma base nitrogenada e um grupo fosfato

Mdulo Um - Extrao de DNA

e produzindo determinadas protenas, enquanto outros genes esto desligados. Cada indivduo possui uma combinao allica diferente exceo para os gmeos monozigticos (gmeos iguais) e para a Dolly, que foi clonada a partir das clulas de outro indivduo. Imagine agora a quantidade de informao necessria para formar um ser humano, por exemplo. Pois toda essa informao est armazenada no ncleo das clulas. Tanta informao assim, para caber dentro do ncleo de cada clula, deve estar arrumada de uma forma supercompactada. Nesta aula teremos a chance de ver que cara tem o DNA e de entender melhor sua composio, estrutura e funcionamento. Iremos tambm entender que o DNA uma molcula universal, presente em todos os organismos vivos.

Todas as informaes relativas construo e ao funcionamento de nosso organismo esto embutidas em nosso DNA, localizado no ncleo da clula.


Extrao de DNA de mucosa bucal. Material (por grupo): 1. 1 copo descartvel 2. 1 esptula de madeira 3. 15 mL de soluo de sacarose a 3% 4. 1 bquer de 50 mL 5. 1 tubo de ensaio 6. lcool etlico gelado 7. Banho 600C 8. Estantes para tubos de ensaio 9. Caixa de isopor com gelo 10. 1 micropipeta de 500 L 11. 1 mL de detergente neutro diludo a 25%

Procedimento: 1. Higienizar a boca fazendo bochechos com gua ou se possvel escovando os dentes. 2- Delicadamente raspar a mucosa bucal com uma esptula de madeira. 3- Colocar aproximadamente 15mL de gua com acar na boca (1 colher de ch de acar em 100 ml de gua). 4- Bochecar vigorosamente por 30 segundos 5- Recolher o volume obtido do bochecho no mesmo copo descartvel. Mergulhar a esptula usada na raspagem da mucosa no volume obtido do bochecho. Desta forma coletaremos as clulas que ficaram na esptula. 6- Transferir apenas 5 mL do volume obtido no passo 5 para um tubo e adicionar uma pitada de sal de cozinha (para aprox. 1% final). Homogenizar invertendo o tubo. 7-Adicionar 500 L de detergente neutro diludo 25% (1:4) e homogeneizar cuidadosamente. 8- Aquecer a 55oC por 10 min. Resfriar 5 min no gelo. 10- Transferir todo o volume para um tubo de ensaio e adicionar lcool gelado (absoluto se possvel) pelas bordas do tubo lentamente, at que se alcance pelo menos 1cm de espessura. O DNA, insolvel no lcool, ficar visvel. visvel.

Para ver imagens tridimensionais de vrios tipos de molcula , inclusive DNA, visite o site Galeria de Molculas. O visitante ter que instalar um programa que pode ser obtido no site de graa para poder ver as imagens das molculas, mas vale a pena. http://www5.ufrgs.br/ bioquimica/


Em 1923 o ingls Frederick Griffith identificou duas linhagens de bactrias que apresentavam colnias lisas (L) e outras de colnias rugosas (R). As bactrias lisas eram virulentas, enquanto as rugosas no eram virulentas. Griffith observou que quando inoculava um rato com bactrias rugosas no virulentas junto com bactrias lisas virulentas mortas, o rato desenvolvia pneumonia, o que no era observado quando estas bactrias eram introduzidas no rato separadamente. O que ser que fez com que as colnias R se tornassem virulentas? Foi essa mesma pergunta que Griffith fez a si mesmo. Ele chamou de princpio transformante, essa coisa que fazia com que as bactrias no virulentas virassem virulentas. Vrios grupos tentaram ento descobrir o que seria este princpio transformante. At os anos 40 do sculo XX, as protenas eram as grandes candidatas ao cargo de princpio transformante. J a substncia inicialmente chamada de nuclei (e mais tarde DNA) era algo que no possua ainda uma funo definida e que parecia, a princpio, ser uma molcula montona, formada sempre pelas mesmas 4 bases nitrogenadas: adenina, timina, guanina e citosina. J as protenas pareciam muito mais dinmicas, maiores e formadas por 20 aminocidos diferentes! E tambm j se sabia que elas eram os componentes estruturais das clulas, ou seja, os tijolos de todos os organismos.

Extrao de DNA de morango

Material necessrio 1-1 morango 2-Tampo de extrao 3-Tubo eppendorf 4-Etanol 95% Procedimento: 1-Retirar pedao de morango com estilete. 2-Colocar cerca de 1 grama de morango picado em um tubo de eppendorf. 3-Macerar bem. 4-Adicionar 500 ul de Tampo de Extrao. Agitar manualmente o tubo eppendorf. 5-Colocar o tubo em banho-maria a 65C por 15 minutos (o tubo com a tampa aberta). 6-Colocar o tubo eppendorf no gelo por 5 minutos. 7-Centrifugar por 8 minutos. 8-Recolher o sobrenadante para novo tubo eppendorf. 9- Adicionar 2 vezes a quantidade do sobrenadante de etanol gelado 95 %. 10- O DNA ir formar um precipitado visvel.

Responda s seguintes perguntas: Qual a funo de cada um dos componentes abaixo, no processo de extrao de DNA? temperatura alta, sal, lcool, e detergente.

Por que o DNA tem o aspecto de novelo?

Compare os dois mtodos de extrao aqui utilizados. Quais as semelhanas e as diferenas?

Em 1944, Oswald Avery, junto com Colin MacLeod, conseguiu purificar o princpio transformante. Eles Oswald Avery descobriram que o mesmo no se alterava quando submetido tripsina, uma enzima especializada em degradar protena. Por outro lado, quando em contato com enzimas que degradavam nuclei (DNA) o princpio transformante no era mais observado. Assim concluiu-se que o que fazia com que as bactrias de Griffith se tornassem virulentas era a transferncia do DNA das bactrias virulentas para as no virulentas, quando juntas eram utilizadas para infectar um rato. No entanto, ainda levaram mais alguns anos e experimentos para que a comunidade cientfica aceitasse que o princpio transformante no cabia s protenas, mas sim ao cido nuclico.

Mas o que era esse misterioso nuclei? Como era a sua estrutura? Foi em 1953 que Watson e Crick propuseram a estrutura da molcula de DNA num pequeno artigo de duas pginas na renomada revista inglesa Nature. Para desvendar o mistrio, os dois cientistas utilizaram fotografias tiradas pela cientista Rosalind Franklin (sem a sua permisso). Uma verso em espanhol do artigo de Watson e Crick pode ser encontrada na pgina http:// www.bioxeo.com/ADN.htm A verso em ingls est disponvel no site da revista Nature no link http://www.nature.com/nature/ dna50/watsoncrick.pdf