ANTGENOS DE DIFERENCIACIN LEUCOCITARIA (CD)

Los antgenos leucocitarios se comenzaron a descubrir gracias al desarrollo de los Anticuerpos Monoclonales (MoAbs). Un antgeno leucocitario no es otra cosa que una protena de superficie de algn tipo de leucocito (clulas blancas de la sangre). Para hacer una nomenclatura sistemtica, segn se iban descubriendo nuevas protenas con diversos anticuerpos monoclonales, inmunlogos de todo el mundo se pusieron de acuerdo y as surgi la nomenclatura CD. CD (cluster of differentiation) significa grupo de diferenciacin y viene seguido de un nmero ordinal. Este nombre deriva del hecho de que al madurar las clulas adquieren y/o eliminan protenas en su superficie: antgenos leucocitarios. Existen ms de 160 protenas con CD asignado; adems existen 3 tipos de protenas (BCR , TCR , HLA) que marcan el reconocimiento especfico del antgeno por el sistema inmune y que no han recibido un nmero CD de identificacin. 3.1 Antgenos de diferenciacin de Linfocitos T:

La clula stem procedente de la mdula sea que entra en el timo (diapositiva 3.1), expresa CD7 y Tdt (Deoxirribonucleotidil transferasa terminal). Ya dentro del timo, los timocitos inmaduros expresan, CD2 y CD7, adems de Tdt. En una etapa posterior de maduracin (timocito comn) adquieren la expresin de CD1, CD3 y TcR, CD4 y CD8 y pierden la actividad Tdt. Estas clulas, tambin llamadas doble positivas por co-expresar CD4 y CD8 suponen ms del 90% de los timocitos totales. Los procesos de seleccin (positiva y negativa) van a eliminar el 95% de los timocitos. La ltima etapa de maduracin intratmica, supone el apagado selectivo de la expresin de CD4 o CD8, puesto que en sangre perifrica no pueden co-expresar ambas molculas, estos son los denominados timocitos maduros (suponen el 5% de los timocitos totales). Una vez en la periferia, los linfocitos T son una poblacin celular muy heterognea formada por, al menos, tres tipos diferentes de clulas: aquellas con TcR , y dentro de las que tienen TcR se distinguen 2 tipos principales: CD4 y CD8. Dado que el TcR va acompaado de un grupo de molculas accesorias, denominadas CD3, es este marcador el que mejor define el Linaje T. Pero adems, hay un grupo de molculas accesorias (diapositiva 3.2), entre las que cabe destacar el marcador CD2 que acta de receptor para la molcula LFA-3, fundamental en la adhesin celular. Otra molcula muy importante, que expresan casi todos los linfocitos T es el CD28, que transmite al interior celular una seal coestimuladora para la activacin de los linfocitos T. Por ltimo, y aunque ya mencionados, no son menos importantes los denominados correceptores (CD4 y CD8) que se expresan de modo excluyente y que se unen a partes conservadas de las molculas HLA de clase II y clase I, respectivamente. 3.2 Antgenos de diferenciacin de Linfocitos B:

Las clulas poco diferenciadas (pro-B) expresan el enzima Tdt (diapositiva 3.4). Los linfocitos B desde etapas de diferenciacin tempranas expresan molculas HLA de clase II que slo existen adems en clulas presentadoras de antgenos. Tambin, en todas las etapas del proceso de diferenciacin se expresa CD 19 , que es el mejor marcador del linaje B. En la tercera etapa madurativa (pre-B) se comienza a expresar la Inmunoglobulina en superficie, aunque slo se completa en la ultima etapa de diferenciacin (clula B inmadura), con la expresin de IgM e IgD en superficie. Es tambin en esta ltima etapa de diferenciacin donde se aprecia la expresin de CD 20 (diapositiva 3.5), que se pierde en el paso a clulas plasmticas Los linfocitos B inmaduros y maduros expresan CD21 que es a la vez receptor para complemento y para el virus de Epstein-Barr (EBV). Las molculas CD19 y CD20 son importantes en la proliferacin y activacin de los linfocitos B. Por ltimo, en los linfocitos B activados se enciende la expresin de la protena CD38 (marcador de estado de activacin que tambin tienen los linfocitos T activados). Otra molcula accesoria fundamental en los linfocitos B es CD40, puesto que cuando esta molcula se une a su ligando, da seales al linfocito B para que cambie de isotipo en su Inmunoglobulina. 3.3 3.3 Antgenos de diferenciacin de Linfocitos NK.

A diferencia de los linfocitos T y B, no existe un marcador de linaje perfecto para los linfocitos NK (diapositiva 3.6). Algunos de los Linfocitos NK presentan CD56, pero no todos, por lo que no sirve como marcador especfico. Se crea que eran especficos los receptores NK: KAR y KIR, pero se han encontrado en otros tipos celulares (esta errneo en la figura) y adems son variables entre individuos y clulas. Luego, hay una serie de marcadores que comparten con otras clulas linfoides: CD2 que ya sabemos lo expresan los linfocitos T, pero no los B. CD8 se expresa en el 30-80 % de linfocitos NK, aparte de los Linfocitos Tc. La integrina LFA1 (CD11a/CD18) es comn a todos los tipos de linfocitos (T, B y NK). CD25, parte del receptor para interleucina-2 tambin se encuentra en linfocitos T activados, linfocitos B y NK. Por ltimo, hay una serie de marcadores que comparten con otras clulas de la estirpe mieloide: destaca el CD16 es un receptor para Ig que expresan las clulas NK y los monocitos y granulocitos. Debido a todo lo expuesto la identificacin de linfocitos NK en la prctica real se hace buscando aquellas clulas que expresan CD16 y/o CD56 pero que carecen de CD3. Todos los linfocitos NK presentan CD16 pero no nos vale como marcador, puesto que engloba a granulocitos y monocitos. Haciendo la correccin con la ausencia de CD3, corregimos este problema. 3.4 Antgenos de diferenciacin del linaje mieloide.

En la diferenciacin de linaje mieloide hay una caracterstica llamativa: todas las clulas precursoras expresan HLA-DR, pero al final de la diferenciacin (diapositiva 3.7) slo las clulas presentadoras de antgenos mantienen dicha expresin (esto es la estirpe monocitomacrfago). La molcula CD34, con funciones de adhesin celular, resulta ser el marcador ms primitivo en la diferenciacin, de hecho se utiliza en la prctica clnica para seleccionar clulas primordiales pluripotentes (o clulas stem), y no se expresa en ninguno de los tipos celulares finales. CD16 (receptor para Fc de Igs) aparece en todas las clulas, pero se expresa ms en granulocitos que en monocitos. (diapositivas 3.8 y 3.9). El marcador mejor de la estirpe monocito-macrfago parece ser CD14 (receptor para lipopolisacridos bacterianos), prcticamente ausente en los granulocitos. Por el contrario, CD17 (implicado en transduccin de seales) es mejor marcador de granulocitos, aunque tambin se ha encontrado expresado en plaquetas. Todas las clulas del linaje mieloide expresan diferentes isoformas de CD45 (que es el mejor marcador pan-leucocitario), as como distintas combinaciones de integrinas: siendo CD18 comn (expresado algunas veces junto a CD11b y otras junto a CD11c). 3.5 Clasificaciones de los antgenos de diferenciacin:

Estas molculas CD, que son siempre protenas estructurales de membrana se pueden clasificar atendiendo a diferentes criterios, pero fundamentalmente segn criterios estructurales y/o funcionales. a) Clasificacin atendiendo a criterios estructurales: Dentro de los antgenos de diferenciacin (CD) se establecen una serie de superfamilias. Cada superfamilia se caracteriza porque las protenas que la integran renen una serie de caractersticas estructurales comunes. Normalmente estas caractersticas estructurales comunes significa que comparten dominios de protena de un determinado tipo. As podemos hablar de las superfamilias de las Inmunoglobulinas, de las integrinas, de las selectinas, de los receptores de citocinas, etc... La mejor conocida de todas es la superfamilia de las inmunoglobulinas (diapositiva 3.10) que se caracteriza porque las protenas que la componen presentan dominios globulares de unos 110 aminocidos con estructura tridimensional muy semejante a la de los dominios globulares de Inmunoglobulina. Estos dominios globulares pueden ser similares a los de regiones constantes (C), a los de regiones variables (V), o en general a los de cadenas pesadas (H) de Inmunoglobulina. Hay una gran coleccin de protenas en esta superfamilia. Podemos destacar: Las propias inmunoglobulinas El receptor de la clula T (TcR) y las cadenas de su estructura asociada: CD3. Los antgenos HLA, tanto de clase I como de clase II Los co-receptores del linfocito T: CD4 y CD8 La molcula que transmite seales coestimuladoras: CD 28, as como sus dos ligandos: CD80 y CD86 (antiguamente llamados B 7-1 y B 7-2)

Uno de los receptores para Fc de la IgG (CD32) Distintas molculas de adhesin: ICAM-1 (CD54), ICAM-2 (CD102), VCAM1 (CD106), NCAM (CD56) Uno de los receptores para IL-1: IL-1R tipo I (CD121a)

b) Clasificacin atendiendo a criterios funcionales: Cuando una clula presentadora de antgeno (APC) y un linfocito T entran en contacto, hay una gran cantidad de molculas que intervienen en la adhesin y transmisin de seales entre ambos tipos celulares (diapositiva 3.11). Las funciones que tienen cada una de estas molculas es muy diferente: As estn las molculas que intervienen en el reconocimiento del antgeno: TcR (en el caso de los linfocitos B sera el BcR) Las molculas para el anclaje correcto de dicho receptor y transduccin de seales al interior: complejo de protenas CD3. Los co-receptores: CD4 o CD8 Las molculas que presentan el antgeno a la clulas T: antgenos HLA Los receptores para Fc de Inmunoglobulinas: CD16 Los receptores para fragmentos de complemento: CD 35 Los receptores para interleucinas: CD 121 a Molculas de co-estimulacin: CD28 Molculas de sealizacin: CD40 (en el APC) y CD40L (en el linfocito T) Molculas de activacin, que se expresan cuando la clula se ha activado: como el receptor de IL-2 (CD25) CD38. Marcadores del estado de diferenciacin celular: CD 45 R0 (memoria) CD45RA (vrgenes) Molculas de adhesin Inter.-celular: CD 18, CD2, etc... En negrita: las molculas que participan en el reconocimiento especfico del antgeno. Desarrollando un poco ms los marcadores que identifican el estado de diferenciacin celular (diapositiva 3.12), se ha encontrado que la molcula CD45 tiene varias isoformas, entre las que prevalecen las denominadas CD45RO y CD45RA. Se ha determinado adems, que CD45RA se expresa en clulas vrgenes (que an no han encontrado el antgeno), en tanto que CD45RO se expresa en clulas de memoria. La transicin de la expresin de un tipo al otro es un proceso contnuo (de modo que en un momento determinado una clula T puede co-expresar ambas isoformas). Adems, hay otros marcadores del estado de activacin: as CD2, CD29 y CD18 se expresan a mayor densidad en las clulas de memoria, aunque tambin se expresan (pero en menor densidad) en las clulas vrgenes.