REMOO DE FENOL UTILIZANDO PEROXIDASES DE AGRO-PRODUTOS

WILBERG, K.Q., NUNES, D.G. & RUBIO, J. LTM-Laboratrio de Tecnologia Mineral e Ambiental - UFRGS Rua Osvaldo Aranha 99, 512 Porto Alegre RS e-mail: jrubio@vortex.ufrgs.br Palavras chave: Peroxidase, Remoo de fenol, Tratamento de efluentes lquidos Os compostos fenlicos (fenis e derivados) so poluentes comumente encontrados em efluentes lquidos industriais. Os mtodos usuais de remoo desses compostos apresentam problemas como alto custo, purificao incompleta, formao de subprodutos txicos ou baixa eficincia (1). A enzima peroxidase catalisa a oxidao de uma variedade de fenis na presena de perxido de hidrognio. Durante a oxidao so gerados radicais livres que difundem do stio ativo da enzima para o meio, formando produtos poliaromticos. Estes polmeros so insolveis em gua, o que facilita sua remoo do meio aquoso (1). Neste trabalho, foi testada a capacidade de remoo de fenol em soluo aquosa utilizando o extrato de agroprodutos como fonte de enzima peroxidase. Uma centrfuga domstica para sucos foi utilizada para obter os extratos das razes de rabanete, nabo, gengibre e raiz forte. J o extrato de soja foi obtido em liqidificador na presena de tampo fosfato 0,1 M e pH 7,4. Os extratos obtidos foram ainda centrifugados a 8.000 rpm por 30 min e armazenados a 5 oC. A atividade da peroxidase nestes agro-produtos foi determinada por colorimetria da seguinte forma: amostras de 3 mL foram preparadas utilizando 1,5 mL de fenol 20 mM, 0,75 mL de 4-aminoantipirina 9,6 mM, 0,3 mL de perxido de hidrognio 2 mM, 0,15 0,45 mL de soluo de extrato de agro-produto, e 0 0,3 mL de tampo fosfato 0,1 M e pH 7,4. Todos os reagentes utilizados nestas anlises foram preparados em tampo fosfato 0,1 M e pH 7,4 (2). A concentrao de peroxidase ativa proporcional taxa de desenvolvimento de cor medida a 510 nm, durante um perodo de tempo no qual a concentrao de substrato no reduzida significativamente. A taxa de desenvolvimento de cor foi convertida em atividade utilizando um coeficiente de extino de 7.100 M-1 .cm-1, baseado em perxido de hidrognio. Define-se uma unidade de atividade enzimtica (U) como a quantidade de enzima que provoca a transformao de 1,0 mol de perxido de hidrognio por minuto a 25 o C em condies timas de pH de 7,4 (2). Na Tabela 1 so apresentados os valores de atividade de peroxidase determinados para 1 grama de cada agro-produto testado bem como o seu custo a granel. Tabela 1 Atividade de peroxidase e custo de agroproduto por Kg. Custo Agro-produto Atividade Peroxidase (U/g) (R$/Kg) Rabanete 0,9 0,84 Nabo 1,2 2,97 Gengibre 1,6 3,35 Raiz Forte 21,0 10,00 Soja 27,2 0,90 A atividade da enzima peroxidase por grama de soja e raiz forte foi muito superior as obtidas com as demais razes. Solues aquosas contendo 4 mM (376,44 ppm) de fenol foram tratadas utilizando estes extratos. Em frascos agitados contendo 100 mL de soluo de fenol acrescentou-se cada extrato a 1,124 U/mL, polietilenoglicol (PM 1500) a 0,268 g/L e H2O2 a 4,4 mM. O polietilenoglicol foi utilizado para suprimir a aparente inativao da enzima, atribuda adsoro dos polmeros aromticos ao stio ativo da mesma (3). Estas condies experimentais foram otimizadas para a reao utilizando extrato de raiz forte, o primeiro sistema estudado em detalhe. Os resultados de remoo de fenol aps 4h 30 min de reao so descritos na Tabela 2. A concentrao de fenis totais foi determinada por um mtodo espectrofotomtrico direto. A faixa analtica compreende concentraes de fenol de 0,03 a 0,12 mM (4). Em cubetas de 16mm de caminho tico foram adicionados 2 mL de amostra, 1,4 mL de bicarbonato de sdio 0,25 M e 0,3 mL de 4-aminoantipirina 20,8 mM. Aps vigorosa agitao adicionou-se 0,3 mL de ferricianeto de potssio 83,4 mM e agitou-se novamente. A concentrao das amostras foi medida a 525 nm em fotmetro Merck modelo SQ 118 aps 9 min da adio do ferricianeto. Tabela 2 Remoo de fenol aps 4h 30 min de reao. Agro-produto Remoo de Fenol (%) Rabanete 82,64 Nabo 61,24 Gengibre 0,00 Raiz Forte 99,89 Soja 58,6 Os resultados descritos na Tabela 2, mostram que a maioria dos extratos utilizados remove fenol do meio aquoso nas condies testadas. O uso do extrato de raiz forte resultou em maior remoo (>99 %), em funo das caractersticas experimentais otimizadas para este sistema. Porm, devido a seu mais alto custo (Tabela 1), futuros estudos visam a otimizao das condies que permitam utilizar as peroxidases dos demais agro-produtos. Referncias Bibliogrficas (1) Klibanov A.M. et al. 1980. J. Appl. Biochem., 2, 414-421. (2) Nicell J.A. et al. 1992. Wat. Sci. Tech., 25, (3), 157-164. (3) Wu J. et al. 1993. Wat. Res., 27, (12), 1701-1706. (4) Buchanan, L.D., Nicell, J.A. 1998. J. Chem. Technol. Biotechnol., 72, 23-32.