O homem no isognico Menor suscetibilidade a doenas

1885 Vigor hbrido (reproduo)

Uniformidade
1

Padronizao
Participao de animais na pesquisa

Vacina anti-rbica > ces 1900 Anestsicos locais > coelhos e ces Transplante de crnea > coelhos 1910 Transfuso de sangue > ces, cobaias e coelhos 1920 Insulina > ces, coelhos e camundongos Vacina contra cinomose > ces

Repetibilidade

1930 Anestsicos intravenosos > coelhos, ces, gatos e primatas Vacina contra difteria > cobaias, coelhos, equinos e primatas Anticoagulantes > coelhos, cobaias, ces e camundongos 1940 Dilise renal > cobaias, coelhos, ces e primatas Antibiticos de amplo espectro > camundongos Coqueluche > camundongo e coelhos Mquina de circulao extra-corprea > ces 1950 Prteses > ces, caprinos e ovinos Transplante renal > ces Marcapassos cardacos > ces Medicamentos contra a hipertenso > ratos, camundongos, ces e gatos Vlvulas cardacas artificiais > ces, bovinos, coelhos, cobaias e ratos 1960 Vacina contra rubola > primatas Cirurgias coronarianas > ces Medicao contra distrbios neurolgicos > ratos, cobaias, coelhos Transplante cardaco (1967) > ces 1970 Contraste e tomografia > sunos Quimioterapia contra leucemia > camundongos Medicamentos contra lcera > ratos e ces Medicamentos contra asma > cobaias e coelhos

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1980 Equipamentos de suporte para prematuros > primatas Medicamentos contra rejeio de transplantes > camundongos, coelhos, ces e primatas Vacina contra hepatite (A e B) > primatas Medicamentos contra doenas virais > camundongos, coelhos, ces, primatas, etc. Medicamentos contra cercariose (ces) > roedores e bovinos 1990 Vacina contra leucemia felina > gatos Vacina contra meningite > camundongos Medicamentos contra depresso > ratos Terapia contra vrus HIV > camundongos e primatas Medicamentos contra cncer de mama e prstata > camundongos, ratos e ces 2000 Medicamentos contra leucemia e linfoma > camundongos, ratos e primatas Vacina contra Alzheimer ? > camundongos Terapia gnica contra doenas hereditrias > camundongos Vacina contra malria > camundongos e primatas Nmero de animais utilizados em pesquisa EUROPA 1960: 3,5 milhes 1975: 5,0 milhes 2003: 2,5 milhes 2006: 3,0 milhes Espcies utilizadas em pesquisa Espcie 1998 (%) Camundongos, ratos 85 Peixes, anfbios e rpteis 11 Coelhos e fures 1 Bovinos, ovinos, caprinos e sunos 2,7 Ces e gatos 0,3 Primatas 0,1 Espcies mais utilizadas em pesquisa (Animais convencionais de laboratrio) CAMUNDONGO Linhagens mais utilizadas: BALB/c, C57Bl/6, C3H/HePas

2003(%) 68 23 ni ni ni ni

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RATO Linhagens mais utilizadas: Wistar-Han, Sprage Doley, F344 COBAIA Raa mais utilizada: Inglesa (Geralmente, albina) COELHO Raa mais utilizada: New Zealand White (NZW, geralmente albina) HAMSTER Espcie mais utilizada: Sria ANIMAIS DE LABORATRIO = MODELOS ANIMAIS = REAGENTE BIOLGICO PESQUISAS CONFIVEIS Organismo vivo Complexo Dinmico Variado (Gentica) Prada, 2000: A organizao morfo-funcional do organismo animal igual dos seres humanos. A utilizao de animais essencial para o desenvolvimento contnuo do conhecimento cientfico, mas h limites ticos e humanitrios a serem considerados.

Fatos Quantos medicamentos para animais foram inicialmente desenvolvidos para seres humanos? 90% Qual a porcentagem de procedimentos mdicos so realizados diretamente no ser humano sem terem sido previamente testados em animais? 25% Qual a porcentagem de medicamentos, vacinas e produtos de higiene so testados em seres humanos? 100%

REPRODUO

RGOS REPRODUTIVOS DO MACHO - Pnis: rgo formado por corpo cavernoso que envolve a uretra peniana. - Prepcio: estrutura acessria da pele para exposio do pnis.

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- Bolsa Escrotal: adequa os testculos a uma temperatura tima para produo e manuteno da viabilidade dos espermatozides. - Testculos: rgos responsveis pela produo de clulas reprodutivas masculinas e pela definio das caractersticas secundrias masculinas. Podem ser mantidos no interior da cavidade inguinal. - Tbulos acessrios: Epiddimo: encontra-se junto ao testculo e dividi-se em cabea, corpo e cauda (principal reservatrio de espermatozides viveis). Ducto Deferente: continuidade do epiddimo, que passa pelo canal inguinal, circunda o uretr e abre-se dentro da uretra. lndulas Acessrias: Glndula ampular, Utrculo prosttico, Vescula seminal, Glndulas uretrais, Prstata, Glndulas prepuciais, Glndula bulbo-uretral, Glndulas inguinais, Glndula paraprosttica (atrao sexual)

TAMPO OU PLUG VAGINAL Aps a cpula, substncias produzidas pela prstata, vescula seminal e glndula bulbouretral resultam na formao do plugou tampo vaginal, o qual evita a perda do smen. Vesiculase + Procoagulase = Coagulase (Prstata) (Ves. Seminal) Coagulase + Coagulinognio + Glicoprotena = Tampo vaginal (Ves. Seminal) (Gl. Bulbo-uretral) RGOS REPRODUTIVOS DA FMEA - Vulva e vagina: rgos que permitem intromisso peniana e recepo do esperma; - tero: cervix e cornos uterinos; - Oviduto ou trompa: istmo, ampola e fmbrias; - Ovrio: produo de clulas reprodutivas femininas. As fases do ciclo estral podem ser identificadas pelas clulas presentes no lavado ou esfregao vaginal, que tem como finalidade a identificao da fase do ciclo estral em que as fmeas esto, principalmente para realizao de pesquisas. Exceo realizao do lavado vaginal: a hamster apresenta secreo vaginal densa e constante, que dificulta a identificao da fase do ciclo estral pela anlise da celularidade do lavado vaginal; O primeiro dia do ciclo estral desta espcie (que tem durao de 4 dias) identificado pela presena da descarga ps-ovulatria (DPO); DPO: Pr-estro secreo densa e viscosa abundante, de cor amarelada e odor pungente.

muitas clulas epiteliais nucleadas e poucas * Receptividade FASES DO CICLO sexual (RS)ESTRAL clulas epiteliais queratinizadas Estro **RS e Ovulao Metaestro (ou Diestro 1) Diestro (ou Diestro 2) muitas clulas epiteliais queratinizadas poucas clulas epiteliais queratinizadas e leuccitos principalmente leuccitos

IDENTIFICAO DA PRENHEZ Aumento de volume abdominal Palpao dos fetos, raio X e ultrasson. Cobaia: Palpao da snfise pubiana Ultrasonografia INSTINTO MATERNAL Grooming da ninhada: estmulo p/ defecar e urinar Agrupamento e aquecimento constantes da ninhada Ninho bem definido Amamentao (ninhada com estmago com leite) Ninhada saudvel e homognea

Idade da ninhada (dias) Neonato 1-2 3-4 5-6 9-10 14-15

Caractersticas (Camundongo, rato e hamster) Resqucios do cordo umbilical com ou sem cogulo Ferida umbilical com crosta, estmago com leite, orelhas coladas Cicatriz umbilical, orelhas parcial ou totalmente descoladas, vibrias Orelhas descoladas, pelagem em crescimento, olhos fechados Corpo recoberto p/pelos, abertura parcial ou total dos olhos, comem alimento slido Corpo recoberto p/pelos, olhos abertos, locomoo firme

SINCRONIZAO (INDUZIDA) DO CIO Efeito Whitten: agrupamento de fmeas sem a presena de um macho durante vrios dias promove anestro (ausncia de ciclo estral). As fmeas voltam a ciclar (estro) assim que tiverem contato, mesmo que indireto, com o macho. Efeito Bruce: durante os primeiros 4 dias aps a cpula, ocorre bloqueio da gestao devido a exposio da fmea a um macho estranho. SEXAGEM Camundongo, rato e hamster: macho apresenta maior distncia entre genitlia externa e nus, em comparao com a fmea. Cobaia e coelho: o pnis pode ser localizado por palpao na regio inguinal sob a linha alba.

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* No caso da coelha a uretra desemboca no assoalho da vagina

PARMETROS REPRODUTIVOS
Idade p/reproduo 1a Ovulao (d)
Durao do ciclo estral (d)

Espcie

Sistema de acasalamento (o:O)

Durao da gestao (d)

Vida reprodutiva*

Camundongo

6 sem

35

4-5

PP ou TH (1:2 a 4) PP ou TH (1:2 a 6)
PP ou TH (1:2 a 6)

20 19-21

7-8 m

Rato

10-12sem

38-71

4-5

21 20-22

9-10 m

Cobaia

3m

139

15-19

65 59-72 31 28-34

2 anos

Coelho

6-9 m

139

16 Ovulao induzida c/
4

TH

3 anos

Hamster Srio

6-8 sem

28-30

PM ou TH (1:1 a 5)

16 15-18

15 m

* Perodo da vida reprodutiva da fmea com fertilidade e nmero mximo de filhotes. MANEJO REPRODUTIVO Relacionado produo de animais para serem fornecidos comunidade usuria - Colnia de criao/produo - Visa o melhor desempenho reprodutivo da colnia para otimizao da produo de animais - Considerar: - Espao disponvel no biotrio; - Manuteno das caractersticas genticas da espcie e/ou linhagem. MTODO DE CRIAO 1. Aquisio e Seleo de Reprodutores 1.1 Fornecedor conhecido e idneo 1.2 Observao do exterior e comportamento (cor, doenas, defeitos fsicos, agressividade, canibalismo, etc.) 1.3 Avaliao do desempenho reprodutivo dos casais adquiridos

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Avaliao do desempenho reprodutivo do casal 1.3.1 Considerar a mdia de, pelo menos, trs partos, e analisar: - compatibilidade entre MACHO e FMEA(S) - instinto maternal - quantidade de filhotes nascidos e peso mdio - quantidade de filhotes desmamados e peso mdio - intervalo mdio entre partos 1.3.2 Selecionar os descendentes dos casais mais produtivos para dar continuidade colnia de criao.

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2. Sistemas de Acasalamento

Sistema Permanente monogmico Permanente poligmico Temporrio tipo harm Temporrio manual

Cio PsParto Psdesmame

Proporo macho:fmea Casais 1:1 Casais 1:>1 1:>1 1:>1

Espcie camundongo, rato e hamster* camundongo, rato e cobaia

5 espcies hamster e coelho

* Agressividade da hamster fmea

3. Direcionamento dos acasalamentos: define o padro gentico da colnia 3.1 Colnias heterognicas ou no consanguneas (outbred): animais apresentam elevado coeficiente de heterozigose, ou seja, so geneticamente distintos entre si, mas com variabilidade gentica uniforme. Ex.: Poiley, S.M. (1960). A systematic method of breeder rotation for non-inbred laboratory animal colonies. Proc. Animal Care Panel, 10(4):159-166. 3.2 Colnias isognicas (inbred): os animais so geneticamente iguais entre si (consanguneos), e apresentam quase 100% de genes em homozigose. - Exceo de residual de 1% de genes letais - Considerar que mutaes espontneas podem ocorrer a cada gerao. OBTENO DE ANIMAIS ISOGNICOS - Acasalamento entre irmo e irm para se obter o mais rpido aumento do coeficiente de consanguinidade; - O coeficiente de consanguinidade de 0% no incio dos acasalamentos consanguneos e atinge 100% quando a homozigose total; - Para obteno de uma linhagem isognica de camundongos so necessrios acasalamentos consanguneos entre irmo e irm por, pelo menos, 20 geraes consecutivas.

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Manuteno de uma Linhagem Isognica

Colnia Fundao Pedigree Expanso Comunidade Usuria

No de casais 10

Proporo macho:fmea(s) 1:1

Parentesco Irmos

20 ou +

1:1

Irmos

40 ou +

1:>1

Irmos ou Primos

ANIMAIS QUE APRESENTAM OUTROS PADRES GENTICOS Congnicos Co-isognicos Recombinantes Transgnicos Knock out, etc. CONTROLE GENTICO DE COLNIA Garantir as caractersticas genticas da colnia, evitando sublinhagens e contaminaes genticas 1. MANUTENO DA COLNIA: - Realizar corretamente identificao, acasalamentos e registros para acompanhamento da genealogia da colnia; - Subdiviso da colnia: fundao, pedigree e expanso; - Evitar animais de diferentes linhagens e de mesma cor em uma mesma sala; - Cruzamentos inter-linhagens. 2. TESTES LABORATORIAIS - Transplante de pele: quando h incompatibilidade gentica entre doador e receptor a rejeio tem incio por volta do 12o dia aps a cirurgia (Complexo Principal de Histocompatibilidade);

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- Isoenzimas (Eletroforese); - Tcnicas moleculares: Polymerase Chain Reaction (PCR): a tcnica mais completa e confivel Vantagens da utilizao de animais isognicos

RAO - As raes devem atender as necessidades nutricionais de cada linhagem; - Os fabricantes de rao baseiam-se, mas no seguem rigorosamente as recomendaes internacionais (Colli, 2004); - Exigir que o fabricante apresente anlises microbiolgica e de nutrientes realizadas por empresa independente. LEGISLAO NA UTILIZAO DE ANIMAIS

No Brasil no h legislao especfica para utilizao de animais em pesquisa e ensino. Por este motivo a comunidade cientfica brasileira segue normatizao internacional, que est muito bem fundamentada em preceitos ticos e morais, os quais so parmetros imprescindveis para o bem-estar animal e conseqente pesquisa de qualidade.

The Principles of Humane Experimental Technique (Princpio dos 3 Rs) RUSSEL E BURCH, 1959 Replacement - Substituio de animais por mtodos que no utilizem animais (Mtodos alternativos); - Atualmente a comunidade cientfica incentiva amplamente o desenvolvimento e a utilizao de mtodos substitutivos.

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Refinement Reduction

- Reduo do nmero de animais a serem utilizados; Colgio Brasileiro de Experimentao Animal (COBEA, 1990-1991) www.cobea.org.br Princpios ticos na Experimentao Animal A evoluo contnua das reas de conhecimento humano, com especial nfase quelas de biologia, medicinas humana e veterinria, e a obteno de recursos de origem animal para atender necessidades humanas bsicas, como nutrio, trabalho e vesturio, repercutem no desenvolvimento de aes de experimentao animal, razo pela qual se preconizam posturas ticas concernentes aos diferentes momentos de desenvolvimento de estudos com animais de experimentao. Postula-se: Artigo I - primordial manter postura de respeito ao animal, como ser vivo e pela contribuio cientfica que ele proporciona. Artigo II - Ter conscincia de que a sensibilidade do animal similar humana no que se refere a dor, memria, angstia, instinto de sobrevivncia, apenas lhe sendo impostas limitaes para se salvaguardar das manobras experimentais e da dor que possam causar. Artigo III - de responsabilidade moral do experimentador a escolha de mtodos e aes de experimentao animal. Artigo IV - relevante considerar a importncia dos estudos realizados atravs de experimentao animal quanto a sua contribuio para a sade humana em animal, o desenvolvimento do conhecimento e o bem da sociedade. Artigo V - Utilizar apenas animais em bom estado de sade. Artigo VI - Considerar a possibilidade de desenvolvimento de mtodos alternativos, como modelos matemticos, simulaes computadorizadas, sistemas biolgicos "in vitro", utilizando-se o menor nmero possvel de espcimes animais, se caracterizada como nica alternativa plausvel. Artigo VII - Utilizar animais atravs de mtodos que previnam desconforto, angstia e dor, considerando que determinariam os mesmos quadros em seres humanos, salvo se demonstrados, cientificamente, resultados contrrios. Artigo VIII - Desenvolver procedimentos com animais, assegurando-lhes sedao, analgesia ou anestesia quando se configurar o desencadeamento de dor ou angstia, rejeitando, sob qualquer argumento ou justificativa, o uso de agentes qumicos e/ou fsicos paralizantes e no anestsicos. Artigo IX - Se os procedimentos experimentais determinarem dor ou angstia nos animais, aps o uso da pesquisa desenvolvida, aplicar mtodo indolor para sacrifcio imediato.

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Artigo X - Dispor de alojamentos que propiciem condies adequadas de sade e conforto, conforme as necessidades das espcies animais mantidas para experimentao ou docncia. Artigo XI - Oferecer assistncia de profissional qualificado para orientar e desenvolver atividades de transportes, acomodao, alimentao e atendimento de animais destinados a fins biomdicos. Artigo XII - Desenvolver trabalhos de capacitao especfica de pesquisadores e funcionrios envolvidos nos procedimentos com animais de experimentao, salientando aspectos de trato e uso humanitrio com animais de laboratrio. Legislao LEI N. 6.638, DE 08 DE MAIO DE 1979 (Joo Figueiredo, Petrnio Portella, E. Portella e Ernani Guilherme Fernandes da Motta).Estabelece normas para a prtica didtico-cientfico da vivisseco de animais e determina outras providncias. PROJETO DE LEI N 1.153, DE 1995 (apenso o PL 3.964, de 1997) - COMISSO DE CINCIA E TECNOLOGIA, COMUNICAO E INFORMTICA Regulamenta o inciso VII, do 1, do art. 225, da Constituio Federal, que estabelece procedimentos para o uso cientfico de animais, e d outras providncias. (CONCEA e CEUAs). FOI APROVADO NA CMARA DE DEPUTADOS FEDERAIS AOS 20/05/08. INSTRUES NORMATIVAS DO MINISTRIO DA CINCIA E TECNOLOGIA (www.mct.gov.br) para ANIMAIS GENETICAMENTE MODIFICADOS - 1998 Instruo Normativa N 12, DOU - N 100-E, de 28 de maio de 1998. - Normas para trabalho em conteno com animais geneticamente modificados. Instruo Normativa N 13, DOU - N 103-E, de 02 de junho de 1998. - Normas para importao de animais geneticamente modificados (AnGMs) para uso em trabalho em regime de conteno. DECRETO LEI 40.400 DO ESTADO DE SO PAULO, 1998 Dispe sobre a obrigatoriedade de um Mdico Veterinrio em cada biotrio, como responsvel tcnico. DECRETO No 3.179, DE 21 DE SETEMBRO DE 1999 - Presidncia da Repblica - Subchefia para Assuntos Jurdicos. Art. 17. Praticar ato de abuso, maus-tratos, ferir ou mutilar animais silvestres, domsticos ou domesticados, nativos ou exticos: (....multas) RESOLUO N 671, DE 10 DE AGOSTO DE 2000 - Altera dispositivos da Resoluo n 592, de 26 de junho de 1992, e d outras providncias. LEI N 11.977, DE 25 DE AGOSTO DE 2005 (Projeto de lei n 707/2003, do deputado Ricardo Trpoli PSDB). Institui o Cdigo de Proteo aos Animais do Estado e d outras providncias. Dos Animais Silvestres Caa Pesca Dos Animais Domsticos

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Das Atividades de Trao e Carga Do Transporte de Animais Dos Animais Criados para Consumo Do Abate de Animais Das Atividades de Diverso, Cultura e Entretenimento Da Experimentao Animal Das Condies para Criao e Uso de Animais para Pesquisa Cientfica Da Escusa ou Objeo de Conscincia Das Penalidades Disposies Gerais e Transitrias Da experimentao Animal Artigo 23 - Considera-se experimentao animal a utilizao de animais vivos em atividade de pesquisa cientfica, teste de produto e no ensino. Pargrafo nico - Para as finalidades desta lei, entende-se por: //// 4. eutansia: a utilizao ou emprego de substncia apta a produzir a insensibilizao e inconscientizao antes da parada cardaca e respiratria do animal; 5. centro de criao: local onde so mantidos os reprodutores das diversas espcies animais, dentro de padres genticos e sanitrios preestabelecidos, para utilizao em atividades de pesquisa; //// Das Condies para Criao e Uso de Animais para Pesquisa Cientfica Artigo 24 - Os estabelecimentos de pesquisa cientfica devem estar registrados nos rgos competentes e supervisionados por profissionais de nvel superior, nas reas afins, devidamente registrados em seus Conselhos de classe e nos rgos competentes. Artigo 25 - condio indispensvel para o registro das instituies de atividades de pesquisa com animais, a constituio prvia de Comisso de tica no Uso de Animais - CEUA, cujo funcionamento, composio e atribuies devem constar de Estatuto prprio e cujas orientaes devem constar do Protocolo a ser atendido pelo estabelecimento de pesquisa. Artigo 26 - As CEUAs podero recomendar s agncias de amparo e fomento pesquisa cientfica o indeferimento de projetos, por qualquer dos seguintes motivos: I - que estejam sendo realizados, ou propostos para realizao, em instituies no credenciadas pela CEUA; II - que estejam sendo realizados sem a aprovao da CEUA; III - cuja realizao tenha sido suspensa pela CEUA. Artigo 27 - As CEUAs podero solicitar aos editores de peridicos cientficos nacionais que no publiquem os resultados de projetos que: I - estejam sendo realizados, ou propostos para realizao, em instituies no credenciadas pela CEUA; II - estejam sendo realizados sem a aprovao da CEUA; III - cuja realizao tenha sido suspensa pela CEUA. Artigo 31 - Fica proibida a utilizao de animais vivos provenientes dos rgos de controle de zoonoses ou canis municipais, ou similares pblicos ou privados, terceirizados ou no, nos procedimentos de experimentao animal. Artigo 35 - O animal s poder ser submetido eutansia de acordo com protocolos estabelecidos pelos rgos tcnicos nacionais, estaduais ou referendados por estes, sob estrita obedincia s prescries

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pertinentes a cada espcie, sempre que encerrado o procedimento ou em qualquer de suas fases, quando tica e tecnicamente recomendado, ou quando da ocorrncia de sofrimento do animal. ADIN 3595 (PG no 121.570), de 11.10.2005 O ento Governador do Estado de So Paulo, Geraldo Alckmin, entrou com uma ao de inconstitucionalidade (Adin), requerendo a urgente e necessria concesso de liminar, suspendendo a vigncia da Lei 11.977, de 2005, do Estado de S. Paulo, at sua definitiva declarao de inconstitucionalidade. At o momento no houve parecer jurdico sobre esta matria. PROJETO DE LEI No215, DE 15/02/07 - O Deputado Federal Ricardo Tripoli apresenta PL que institui o Cdigo Federal de Bem-Estar Animal. A proposta estabelece normas para as atividades de controle populacional e de zoonoses, experimentao cientfica e criao. PROJETO DE LEI N700, DE 2007 - Do Deputado Estadual Feliciano Filho, alterando o PL 666/2007 Dispe sobre o controle populacional de ces e gatos e d outras providncias. 1 - Fica proibido matar os animais como forma de controle populacional. 2 - A eutansia ser permitida, exclusivamente, em casos irreversveis para aliviar um sofrimento que no tenha cura e dever ser justificada por um laudo emitido e assinado por 02 (dois) veterinrios, sendo 01 (um) do centro de controle de zoonoses ou servio congnere locais e 01 (um) representando as entidades protetoras dos animais. Artigo 2 - As despesas decorrentes da execuo desta lei correro conta de dotaes oramentrias prprias. Artigo 3 - Esta lei entra em vigor na data de sua publicao. PARECER TCNICO - Maria de Lourdes Aguiar Bonadia Reichmann, Assistente Tcnico de Sade I, Instituto Pasteur da Secretaria de Estado da Sade de So Paulo. Diante do exposto, entendo, s.m.j., que as instncias da Secretaria de Estado da Sade de So Paulo devem recomendar ao Excelentssimo Senhor Governador do Estado de So Paulo o VETO TOTAL ao Projeto de Lei 700/07, caso venha a ser aprovado pela Assemblia Legislativa do Estado de So Paulo. CARACTERSTICAS COMPORTAMENTAIS DAS ESPCIES CONVENCIONAIS DE LABORATRIO

As espcies mais utilizadas em pesquisa so: Camundongo, Rato, Cobaia, Coelho e Hamster; Por este fato tambm so chamadas de espcies convencionais de laboratrio.

Nome Cientfico Taxonomia Taxonomia a cincia que classifica os organismos vivos em grupos de acordo com suas similaridades genticas. O objetivo criar uma linguagem comum para que saibamos de que animal estamos falando.

Classificao taxonmica das espcies convencionais de laboratrio

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Caractersticas anatmicas e comportamentais de cada espcie definem o mtodo de contenso e o sistema de criao a serem utilizados.

DOCILIDADE Quando freqentemente manuseadas as cinco espcies convencionais de laboratrio tornamse muito dceis; A agressividade (mordeduras e arranhes) surge somente como mecanismo de defesa contra condies de desconforto e/ou dor; Devemos lembrar que eles so muito geis e podem ocorrer fugas (camundongos, hamsters).

SOCIABILIDADE Sociveis com o homem e com os indivduos da mesma espcie. Desde que obedecida a densidade populacional permitida pelo tamanho da gaiola para cada espcie, os animais de laboratrio podem ser agrupados em: Casais ou em Grupos de mesmo sexo Casais Monogmicos = 1 macho: 1 fmea Poligmicos = 1 macho: 1 fmea - A fmea do hamster considerada solitria e tem comportamento agressivo caracterstico (s aceita os filhotes durante a amamentao, e o macho, somente na fase de receptividade sexual). -Coelho macho canibaliza a ninhada. Grupos de mesmo sexo Fmeas: camundongo, rato, cobaia e hamster*. Filhotes fmeas de diferentes parentais devem ser agrupadas na ocasio do desmame. Se forem agrupadas quando adultas, podem ocorrer brigas (*hamsters). Machos: camundongo, rato, cobaia e hamster. Filhotes machos de diferentes parentais devem ser agrupados no desmame. Se forem agrupados quando adultos, certamente ocorrero brigas. f: filhote fmea; m: filhote macho HIERARQUIA SOCIAL Roedores de mesmo sexo, quando alojados em uma mesma gaiola, definem entre si uma hierarquia social: Macho ALFA > Macho BETA > Macho GAMA Fmea ALFA > Fmea BETA > Fmea GAMA

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Camundongos machos s podem ser mantidos na mesma gaiola at aproximadamente 3 a 4 meses de idade. Aps este perodo as brigas ocorrem com mais frequncia e com mais intensidade. Coelhos machos s podem ser mantidos na mesma gaiola at atingirem a maturidade sexual (6 meses de idade). Aps este perodo so muito agressivos.

PROLIFICIDADE So animais prolficos (= grande nmero de filhotes/parto) e as ninhadas so desmamadas em poucos dias. Somente a cobaia produz um nmero reduzido de filhotes/parto (1-3 em mdia), mas estes so muito precoces, pois j nascem com os olhos abertos, com pelos e comem alimento slido.

NOTVAGOS So animais de hbitos noturnos, ou seja, suas atividades ocorrem mais intensamente na fase final de luminosidade ambiental, que corresponde fase do final da tarde, quando ento passam a se alimentar, brincar, acasalar, etc.. O coelho considerado um animal de hbitos crepusculares.

TERRITORIALIDADE Tanto machos quanto fmeas fazem demarcao territorial com a urina. A exceo cabe ao hamster macho, que realiza demarcao territorial com a secreo produzida pelas glndulas dos flancos. Tal fenmeno ocorre na natureza e tambm na gaiola em que so mantidos.

VOCALIZAO A cobaia e o hamster frequentemente vocalizam muito. Camundongos e ratos vocalizam em situaes de medo ou de dor. O coelho ronca quando est irritado e somente vocaliza quando h intensa sensao dolorosa.

LONGEVIDADE So animais que apresentam curto ciclo de vida; Na natureza, camundongos, ratos e hamsters podem chegar a 3 anos de idade; No biotrio de produo, em funo do decrscimo de sua capacidade reprodutiva, estas 3 espcies so mantidas por aproximadamente 1 ano.

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LIMPEZA (GROOMING) Estes animais apresentam comportamentos tpicos de limpeza: A auto-limpeza indicativo de bem-estar; A limpeza inter-indivduos indicativo de boa convivncia; A limpeza realizada pela matriz em seus filhotes indicativo de bom instinto maternal.

ANATOMIA O hamster o nico dentre os animais convencionais de laboratrio que apresenta a bolsa cervical ou bolsa da bochecha ESTRESSE Quaisquer modificaes so facilmente detectadas pelas espcies de laboratrio, devido ao fato de apresentarem grande acuidade auditiva (ultrassons) e grande acuidade olfativa Qualquer alterao ambiental pode resultar em estresse e desencadear variaes fisiolgicas indesejveis no organismo animal. Ex.: limitao espacial, alteraes de luminosidade, de ventilao, troca de tcnico da rea e de rao, odores estranhos, produtos de higienizao, produtos de higiene pessoal utilizados por tcnicos ou por pesquisadores, etc.; O estresse, mesmo sem sinais clnicos, pode interferir nos resultados experimentais. Quadros clnicos devidos a condies estressantes Apatia, pelos arrepiados e sem brilho, arqueamento de dorso, etc. (Enriquecimento ambiental recomendado para animais de estimao). Secreo ocular (e nasal) de cor avinhada (Glndula de Harder > secreo porfirinmica) Hemorragia oro-nasal, hemorragia em vrios rgos (= Choque neurognico) BIOTRIOS, EQUIPAMENTOS E MATERIAIS Biotrio a rea destinada ao alojamento de animais de laboratrio, sob condies ambientais e sanitrias controladas. Biotrio de criao ou de produo: visa produzir animais de laboratrio para serem fornecidos aos usurios (ensino, pesquisa, testes, desenvolvimento de insumos biolgicos, exames toxicolgicos ou de controle de qualidade de alimentos, medicamentos, vacinas, etc.) Biotrio de experimentao: rea onde so mantidos animais de laboratrio durante o desenvolvimento das pesquisas.

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EDIFICAO DE BIOTRIOS Planejamento prvio, delineamento e construo (Edificao, Insumos, Tcnicos, Pesquisadores, etc.) + Condies ambientais e sanitrias controladas Bem-estar animal Confiana no resultado das pesquisas

BEM-ESTAR ANIMAL Animais apresentam caractersticas anatmicas, comportamentais, fisiolgicas e reprodutivas prprias; indispensvel o treinamento prvio de tcnicos e pesquisadores para que se tornem aptos para trabalhar com as diferentes espcies de laboratrio; Para produo de animais de laboratrio devem ser obedecidos rigorosos padro sanitrio e gentico para assegurar ausncia de parmetros indesejveis e garantir resultados experimentais confiveis; Com animais geneticamente modificados (AGMs) so adotados procedimentos especficos, os quais esto discriminados nas instrues normativas definidas pelo Ministrio da Cincia e Tecnologia.

EQUIPAMENTOS E MATERIAIS CAMA Material que tem como finalidade revestir o fundo da gaiola, evitando o contato direto dos animais, e absorver excretas. No Brasil: nas regies sul e sudeste utiliza-se a maravalha de madeira (Pinnus sp). Em outras regies do pas podem ser identificados como cama, o sabugo de milho triturado e a casca de arroz. Pases desenvolvidos: camas industrializadas. GAIOLAS Gaiolas simples = caixa + tampa. Gaiolas especiais = caixa + tampa + sobretampa + membrana filtrante + trava

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So disponibilizadas em estantes que promovem ventilao microambiental (intracage ventilation) e a membrana filtrante (top filter) evita a contaminao dos animais. Utilizadas para animais de padro sanitrio definido. ESTANTE VENTILADA Estante para gaiolas especiais (Exemplos Alesco Indstria e Comrcio, Intelplast, etc).

BEBEDOUROS Confeccionados em vidro ou em plstico autoclavvel. RAO Deve ser do tipo peletizada (em pellets), pois suas formulao e confeco so as mais adequadas s necessidades nutricionais dos AL.

IDENTIFICAO
No biotrio todos os animais devem ser identificados individualmente por meio de marcaes, que podem ser de dois tipos: - marcao temporria: para numerao de animais participantes de uma pesquisa. Ex.: corantes: cido pcrico em soluo aquosa, verde de metila, etc. - marcao definitiva: para numerao de animais reprodutores. Ex: perfuraes, chanfraduras, brincos (animais de grande porte) e tatuagem (cobaias e coelhos). REGISTROS No biotrio todos as ocorrncias com os animais devem ser registradas em: Fichas de identificao de gaiolas; Livros de registro; Computador. DEMAIS EQUIPAMENTOS E MATERIAIS Carrinhos para transporte de materiais Autoclaves de dupla porta (duplicata) Pedilvio Mquina de lavar gaiolas Mquina de lavar bebedouros Mquina de lavar e secar roupas Balana de pesagem de animais Filtro de gua Filtros de ar Motor de insuflao de ar

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Motor de exausto de ar Dutos de ar Timer e reostato Portas automticas,etc. NAS SALAS DE ANIMAIS NO PODE HAVER Ralos Torneiras Janelas ou frestas Pessoas estranhas Animais de outra espcie Alimentos, etc. ROTINA DE TRABALHO EM BIOTRIOS Trocas de cama (gaiola): 2-3 vezes/semana Trocas de bebedouros: 1-2 vezes/semana Rao e gua so fornecidas ad libitum (exceo para alguns protocolos experimentais)

CONDIES AMBIENTAIS

Para a realizao de pesquisas confiveis necessria a utilizao de modelos animais padronizados. Para tanto, as condies ambientais devem ser controladas. A padronizao do animal de laboratrio depende de procedimentos rigorosos durante suas produo e utilizao, que envolvem: Edificao previamente planejada Controle ambiental Controle sanitrio Controle gentico TEMPERATURA (ToC) . Depende de: metabolismo e comportamento animal, e dos equipamentos existentes na rea. . Literatura internacional: 222oC p/roedores e 202oC p/ coelhos . Merusse e col. (1994-2005): camundongos e ratos demonstraram estar confortveis na faixa de temperatura de 25oC a 28oC, com alguma variao, a qual demostrou-se ser dependente do n o de trocas de ar/h (ventilao). UMIDADE RELATIVA DO AR (URar) . Depende dos metabolismo e comportamento animal.

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. Faixa de URar para animais e o homem: 45% a 75% Obs.: ToC e URar so controladas por aparelhos de ar condicionado, que devem ser dimensionados em funo de: cada espcie, nmero de animais e equipamentos que a rea permitir. VENTILAO (= nmero de trocas de 100% do ar) . Literatura internacional: 18 a 20 trocas de ar/hora; . De fato depende das: rea, ToC ambiente e espcie que ser mantida na sala; . Insuflao e exausto de ar nas salas de animais so realizadas por dutos; . Deve obedecer a um gradiente de presso; . O ar deve ser filtrado. FILTRAO DO AR Filtro grosseiro > Filtro-bolsa > Filtro absoluto (HEPA) HEPA (High Efficiency Protection Air Filter) > Retm 99,97% das partculas de 0,3m (micrmetros) de dimetro. ILUMINAO . Fotoperodo: 12h de claro: 12h de escuro controlado por timer . Lmpadas fluorescentes ou incandescentes (reostato) A luz visvel estimula fotorreceptores e responsvel pela fotoperiodicidade que regula os ritmos circadianos, ciclos reprodutivos, locomoo, temperatura corprea, ao de drogas, etc.

RUDOS . Origem: vocalizao de animais e de pessoas, operaes de limpeza e fornecimento de rao e gua, equipamentos, etc. . So avaliados por intensidade (dB) e frequncia (Hertz) . Frequncias inaudveis pelo homem: Infra-sons (graves) e Ultrassons (agudos) (AL) PROCEDIMENTOS OPERACIONAIS PADRO (POPs) . Cada biotrio define seus POPs em funo do PADRO SANITRIO dos animais . Barreiras sanitrias . Rotina de trabalho: banho, uniforme, fluxo de pessoal, manejo dos animais, etc. . Equipamentos EXAMES LABORATORIAIS . Finalidade controlar o padro sanitrio dos animais; . Controles (Exames) realizados: parasitolgico (ecto e endoparasitas), micolgico, bacteriolgico e virolgico

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EQUIPAMENTOS DE PROTEO INDVIDUAL (EPIs) . Para garantir a sade de tcnicos e pesquisadores: avental, luvas, mscara, etc.; . Como conseqncia, tambm evitam a contaminao dos animais. REAS E EQUIPAMENTOS . rea de higienizao, desinfeco e esterilizao de materiais Autoclaves de dupla porta (duplicata) Estantes ventiladas > microventilao . Fluxo Laminar . Isoladores Seqncia correta de procedimentos LIMPEZA > LAVAGEM > DESINFECO > ESTERILIZAO 1. HIGIENIZAO/LIMPEZA - indispensvel para a aplicao de processos de descontaminao posteriores; - Deve eliminar matrias orgnica e inorgnica: restos de matria orgnica e p atuam como escudo que protege os microorganismos da ao de desinfetantes e de processos de esterilizao; . Estantes, paredes, teto e cho: vassoura mida com soluo desifetante . Caixas, tampas, bebedouros, bicos, etc. . Raspagem/suco de caixas para posterior lavagem manual ou em mquina; . Meios qumicos e mecnicos: so aplicados para superar as foras que se opem ao desprendimento da sujeira; . Detergentes: compostos qumicos que diminuem a tenso superficial das solues aquosas e emulsionam os compostos lipdicos permitindo sua suspenso na gua. rea de higienizao do Biotrio do Departamento de Patologia da FMVZ-USP 2. DESINFECO . Procedimentos fsicos ou qumicos empregados para destruir microorganismos que apresentam capacidade patognica. . Hipoclorito de sdio a 0,9% (NaClO): preo mais acessvel e tem capacidade microbicida de nvel intermedirio 3. ESTERILIZAO . Mtodos fsicos ou qumicos que eliminam totalmente a carga microbiana, inclusive as formas esporuladas (bactrias e fungos).

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3a. Mtodos fsicos CALOR SECO (estufas ou fornos) . Exposio a temperaturas elevadas . Maravalha: 160 a 200C durante 1-2 h VAPOR DGUA (autoclave de vapor) . Mais eficiente forma de esterilizao . Alto poder de penetrao . Grande ao microbicida em curtos perodos de tempo . Ausncia de resduos txicos . Fcil controle de ciclos e baixo custo . Indicado para maravalha, algumas raes, etc. IRRADIAO IONIZANTE (Raios gama) . Esterilizao de materiais que no toleram altas temperaturas nem produtos qumicos; . Materiais plsticos de uso frequente em laboratrios; . Materiais, insumos (rao e maravalha) de biotrio, e algumas raes. 3b. Mtodos qumicos Substncias volteis extremamente txicas e devem ser aplicadas em ambientes vedados ou materais isolados. . XIDO DE ETILENO - Gs txico que tem grande ao penetrante; - Eficiente contra todos os microorganismos, inclusive vrus e esporos bacterianos; - Na autoclave, os ciclos duram de 1 a 18 h: seringas, sondas, pipetas de plstico, etc. . FORMALDEDO: ambientes (12-24 h) . GLUTARALDEDO a 2%: equipamentos (8-10h) . c. PERACTICO a 2%: isoladores (24 h)

CONDIES SANITRIAS DE BIOTRIOS DE ANIMAIS DE PADRO SANITRIO DEFINIDO

Ar: pr-filtro > filtro tipo bolsa > filtro de alta eficincia (HEPA) Desinfeco de salas de animais: formaldedo (formol a 10% ou em pastilhas 24h) Materiais inertes: raios gama ou autoclavagem Materiais termolbeis: raios g ou xido de etileno

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gua: filtragem acidificao (pH> 2,8 a 3,0) autoclavagem Rao: fabricante conhecido e idneo . CUIDADO na aquisio: - autoclavvel: 120C durante 10 a 20 - irradivel: Raios gama (Cobalto 60) CONTROLE SANITRIO DE ANIMAIS DE PADRO SANITRIO DEFINIDO Exames Microbiolgicos . Exames laboratoriais devem ser realizados periodicamente; . Finalidade: o controle sanitrio investigar a existncia de possveis parasitas, fungos, bactrias e vrus patognicos nos animais e ambientes; . Material biolgico para anlises: fezes, soro e rgos. . Detecta possvel deficincia nas barreiras sanitrias, o que deve ser prontamente corrigido para preservar o padro sanitrio dos animais ou reverter o quadro de contaminao. . Para desinfeco da colnia devemos: - Restabelecer barreiras sanitrias - DERIVAO CESARIANA

PADRO PADRO SANITRIO DO ANIMAL DE LABORATRIO -1 SANITRIO

CARACTERSTICAS

ALOJAMENTO

Specific pathogen free (SPF) ou Definido Convencional controlado (*Brasil) ou Indefinido Convencional (CV) ou Indefinido

Quanto maior o nmero, tipo e eficincia das barreiras sanitrias de um biotrio, melhor o padro ou status sanitrio dos animais nele mantidos. Germ free ou axnico Isolador Isento de microbiota e de (sistema de barreiras sanitrias (GF) anticorpos virais detectveis absolutas) ou Definido Distribuio de reas e equipamentos Isolador Biotrio de criao de animais SPF Fluxo unidirecional de pessoas e materiais nas reas (sistema de barreiras sanitrias Microbiota limpas. associada Gnotobitico (GN) absolutas) intencionalmente Distribuio de reas e equipamentos ou Definido Biotrio de experimentao Fluxo bidirecional de pessoas e materiais.
Isento de microbiota patognica Isolador ou Estante ventilada ou Sala c/sistema rigoroso de barreiras Biotrios com poucas barreiras ou c/ sistema de barreiras pouco rigoroso) Biotrios desprovidos de barreiras

Com microbiota indefinida, mas isento de ectoparasitas e agentes zoonticos Com microbiota indefinida, inclusive agentes zoonticos

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GNOTOBIOLOGIA Status Sanitrio ANIMAIS GNOTOBITICOS - Gnotos = bem conhecido, biota = vida - Gnotobitico = Gnotobiota, Gnotobionte, Gnotoxnico (Xenos =estranho) - Derivam de animais germ-free (axnicos)

CLASSIFICAO DOS ANIMAIS GNOTOBITICOS Monoxnico: animal inoculado com 1 microorganismo Dixnico: animal inoculado com 2 microorganismos Trixnico: animal inoculado com 3 microorganismos Polixnico: animal inoculado com vrios microorganismos

LOUIS PASTEUR (1822-1895) 1861: Derrubou a Teoria da Gerao Espontnea 1862: Teoria de doenas causadas por germes 1885: Primeira vacinao anti-rbica Seria possvel a existncia de seres humanos isentos de microorganismos?

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NO TERO!!! ISOLADORES 1897 Nuttal e Thierfelder: Cobaia sem germes por 2 semanas 1915 Kuster: Cabra sem germes por 34 dias 1954 Reynolds: Isolador de ao inoxidvel 1957 Trexler: Isolador de plstico autoclavvel Quanto a estrutura: - Isolador Flexvel (Polivinil cloridoPVC): mamferos Vantagem: acomodao da presso - Isolador Rgido (PVC, acrlico, fibra de vidro): aves Vantagem: previne perfuraes Quanto a presso interna: - Isolador de presso positiva = P interna > P externa Animais de padro sanitrio definido - Isolador de presso negativa = P interna < P externa Microorganismos de alta periculosidade COMPONENTES DE UM ISOLADOR Porto de passagem e chapus Luvas de manuseio Filtros de ar (revestimento com manta HEPA) Cilindros de esterilizao Luvas de transferncia Manmetro diferencial Motor (Insuflao do ar) Gerador, etc. OBTENO OU DESCONTAMINAO DE ANIMAIS DE PADRO SANITRIO DEFINIDO Aves - Matrizes SPF, ovos embrionados; - Ovos em soluo germicida; - Incubao em isolador; - Manuteno em isolador. Mamferos de grande porte - Histerotomia ou Cesariana; - Implica na remoo dos fetos. Mamferos de pequeno porte (AL) - Histerectomia

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- Implica na remoo do tero com os fetos - Conhecida como Derivao cesariana

DERIVAO CESARIANA 1. Eutansia da matriz com prenhez a termo (deslocamento cervical) - em fluxo laminar (SPF) - em isolador cirrgico (GF, GN > SPF) 2. Imerso em sol. germicida (c. peractico 2%) 3. Inciso abdominal 4. Remoo do tero grvido 5. Imerso em soluo germicida 6. Inciso do tero para retirada dos fetos 7. Estimulao respiratria nos fetos 8. Seguem para sala de animais (SPF) ou para isolador definitivo (GF, GN > SPF) 9. Amamentao: ama (de mesmo padro sanitrio) ou amamentao artificial (a cada 30 min.) OUTRAS UTILIZAES DE ISOLADORES - Cuidados perinatais - Biossegurana: para internao de pessoas ou para manipulao de materiais suspeitos de contaminao de alta periculosidade (Vrus Hanta, vrus Ebola, etc.) - Pacientes imunodeficientes