Clase 4 y 5 Enzimas 2012

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ESTRUCTURA DE LA TRIOSAFOSFATO ISOMERASA esta protena es una eficiente enzima involucrada en la va glucoltica.
Caractersticas generales Cintica qumica Nomenclatura Centro activo Cofactores Factores que modifican la actividad enzimtica Cintica enzimtica Inhibidores enzimticos Las enzimas sricas en el diagnostico clnico
Ctedra de Bioqumica - FOUBA
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CARACTERSTICAS GENERALES
Estructura qumica: la mayora son protenas,
una minora son molculas de ARN.

Una enzima puede estar formada por: - una sola cadena polipeptdica, - por varias subunidades - o formar parte de un complejo multienzimtico. Son indispensables para la vida. Son eficaces catalizadores.
Reacciones bioqumicas
temperatura, pH, eficacia cataltica, control?

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Aceleran la velocidad de la reaccin qumica Disminuyen la energa de activacin No modifican el cambio neto de energa No forman parte de los productos finales No se desgastan en el proceso, son reutilizables Aceleran la llegada al equilibrio, pero no vara su posicin
La buena salud exige no slo que se produzcan reacciones qumicas sino que sucedan a velocidades adecuadas, compatibles con la vida.
=> Las enzimas aceleran la velocidad de la reaccin qumica

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Estudia: mecanismo y la velocidad con que interaccionan las molculas en condiciones determinadas
CINETICA QUIMICA:
Velocidad de una reaccin qumica se puede
medir como:
a) Velocidad de formacin de sus productos b) Velocidad de consumo de sus reactivos
Vr = k
Reactantes n
Nmero de orden
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Vr = k
Reactantes n
(velocidad de reaccin) = (constante) x (cc de reactivos)n
donde n es el orden de la reaccin
si n = 1 --- reaccin de primer orden: Vr = k. [A] si n = 2 --- reaccin de segundo orden: Vr = k. [A] [B] Vr = k [A]2 si n = 0 --- reaccin de orden cero. independiente de la concentracin de rvos
VELOCIDAD DE REACCIN Y EQUILIBRIO

Reaccin de 1 orden y en el estado de Eq Qco
k1 [A] = k
-1
[B]
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FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD DE UNA REACCIN
Concentracin de los reactivos Temperatura de reaccin Concentracin y/o rea de superficie de un catalizador
ENERGA DE ACTIVACIN
Es el valor mnimo de energa de colisin necesaria para que ocurra la reaccin

Estado activado
Ea
sustrato
Producto = CO2 + H2O

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Para que una reaccin tenga lugar superar la energa de activacin.

Estado activado
Ea
sustrato
Producto = CO2 + H2O
(1)aumentando la T de reaccin o (2)disminuyendo la energa de activacin.
MECANISMO DE ACCIN ENZIMTICO: Ea
Las enzimas se combinan con los Rvos para producir un estado de transicin de <E
Las enzimas disminuyen la energa de activacin

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COMPARACIN DE LAS Ea DE LAS REACCIONES CON Y SIN CATALIZADOR: CON y SIN

Ea
Ea
Las enzimas no modifican el cambio neto de energa

DIAGRAMA DE ENERGA PARA UNA REACCIN QUMICA

CATALIZADA Y NO CATALIZADA
EN SENTIDOS
DIRECTO INVERSO
La variacin de energa libre de la reaccin ( G= Gf-Gi) no se modifica en presencia del catalizador.
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LA ENZIMA SE RECUPERA INALTERADA AL FINAL DE UN CICLO CATALTICO
Las enzimas no forman parte de los productos finales ni se desgastan en el proceso. Son reutilizables.
... Entonces hasta ahora podemos decir que las enzimas se caracterizan por:
Alta especificidad.
Elevado poder cataltico.

Alta eficiencia. No sufren modificaciones qumicas durante la catlisis.
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NOMENCLATURA:
NOMENCLATURA:
Sistematizacin de la nomenclatura (International enzime comission) Clasificacin: Oxidorreductasas Transferasas Hidrolasas Liasas Isomerasas Ligasas
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CENTRO ACTIVO
Unin dbil
GRUPOS CATALTICOS
Siete residuos del centro cataltico del sitio activo de la fructosa 2,6 bifosfatasa
es indispensable mantener la estructura terciaria de la enzima para que sea catalitcamente activa.
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Enzima
CENTRO ACTIVO
CENTRO CATALTICO
GRUPOS
CATALTICOS
ESPECIFICIDAD ENZIMTICA
Fischer (1890)
Koshland (1958)
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SIMPLES:
ENZIMAS
CONJUGADAS:
Estructura proteica
Estructura proteica + cofactor
(protena inactiva) INORGNICO= In metlico Levemente unido
Firmemente unido
( metaloprotenas)
COSUSTRATO
ORGNICO = Coenzima (Levemente unido, unin no covalente)
(activa)
GRUPO PROSTTICO
Firmemente unido (Unin covalente)
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Ejemplo de enzima conjugada
Piruvato carboxilasa
Algunas vitaminas funcionan como coenzimas en distintas rutas metablicas

VITAMINAS C (cido ascrbico) B1 (tiamina) B2 (riboflavina) B3 (cido pantotnico) B5 (niacina) B6 ( piridoxina) B12 (cobalamina) Biotina FUNCIONES Coenzima de algunas peptidasas. Interviene en la sntesis de colgeno Coenzima de las descarboxilasas y de las enzima que transfieren grupos aldehidos Constituyente de los coenzimas FAD y FMN Constituyente de la CoA Constituyente de las coenzimas NAD y NADP Interviene en las reacciones de transferencia de grupos aminos. Coenzima en la transferencia de grupos metilo. Coenzima de las enzimas que transfieren grupos carboxilo, en metabolismo de aminocidos.
Enfermedades carenciales Escorbuto Beriberi Dermatitis y lesiones en las mucosas Fatiga y trastornos del sueo Pelagra Depresin, anemia Anemia perniciosa Fatiga, dermatitis
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FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA:
Temperatura pH (ionizacin) Concentracin de sustrato
INFLUENCIA DEL pH y LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
Desnaturalizacin o prdida del estado inico de la enzima
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CURVAS DE ACTIVIDAD ENZIMTICA EN FUNCIN DEL pH
ESQUEMA DE UNA REACCIN ENZIMTICA
Influencia de la concentracin de SUSTRATO en la reaccin enzimtica

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FENMENO DE SATURACIN de la enzima por el sustrato
Leonor Michaelis
Maud Menten
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L. Michaelis y M. L. Menten (1913)
Teora general acerca de accin y cintica enzimtica
ECUACIN DE MICHAELIS - MENTEN

Ecuacin de velocidad para las reacciones catalizadas por enzimas que actan slo sobre un sustrato
hiprbola
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Unidad de concentracin (Molar)
A < Km
> Afinidad de la Ez por el S

Representacin de Vr en funcin de la [S] para una reaccin dada:

Michaelis Menten-
hiprbola
Lineweaver Burk-
lnea recta
y = m. x + b
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Representacin grfica de ecuacin de Michaelis Menten segn

LINEWEAVER BURK (doble recproca)
y
y = m. x + b
- b/m
Proteasa del virus del SIDA +

el inhibidor ritonavir
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TIPOS DE INHIBIDORES
IRREVERSIBLES:
- el I se une en a la E en forma covalente - provoca un cambio permanente en su molcula - prdida definitiva de la actividad
REVERSIBLES:
- Competitiva: I y S tienen estructura similar Compiten por le sitio activo Se desplaza por aumento de [S] - No competitiva: I puede unirse a E libre o al Complejo E-S Interfiere la accin de ambos No se desplaza por aumento de [S]
INHIBIDORES IRREVERSIBLES
No puede ser tratada por Michaelis - Menten

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INHIBIDORES REVERSIBLES: competitivos
EFECTO DE UN INHIBIDOR COMPETITIVO
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Representacin de Vr en funcin de la para una reaccin enzimtica en presencia de
Inhibidor COMPETITIVO
Km/ Vmax
Km Vmax cte
INHIBIDORES REVERSIBLES: no competitivos
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Representacin de Vr en funcin de la para una reaccin enzimtica en presencia de
Inhibidor NO COMPETITIVO
Km cte Vmax
Km/ Vmax
INHIBICIN COMPETITIVA Y NO COMPETITIVA: grfico comparativo
= Km < Vmax
> Km = Vmax
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Mltiples procesos metablicos celulares
relacionados entre s
estn controlados en forma precisa
MECANISMOS DE CONTROL ESTRICTOS Y ADECUADOS

MECANISMOS REGULATORIOS DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

REGULACIN A CORTO PLAZO: se modifica la actividad enzimtica
1. 2. 3. 4. Regulacin alostrica Inhibicin por producto final Regulacin por modificacin covalente Regulacin por zimgenos
REGULACIN A LARGO PLAZO: se modifica la cantidad de molculas enzimticas

5. Regulacin gentica
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Regulacin alostrica
Modificadores o efectores: positivos o negativos No son modificados por la reaccin

La enzima oscila entre dos estados: activo e inactivo
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La actividad enzimtica se regula 1 por accin de efectores o moduladores alostricos
Efecto opuesto de un activador y un inhibidor sobre las cuatro subunidades de la enzima

1
1.0
Inhibidores y activadores alostricos
(+ Activador)
V+0.8
V0 0.6
0.4
(sin efectores)
(+ Inhibidor)
V-0.2
s
8 10 12
0.0 0 2 4 6
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COOPERATIVIDAD: de las enzimas oligomricas

INFLUENCIA de la fijacin de un ligando a un protmero
sobre la fijacin de un ligando a un segundo protmero de una protena oligomrica

EL CAMBIO CONFORMACIONAL PUEDE SER INDUCIDO POR: UN EFECTOR ALOSTRICO POR EL MISMO SUSTRATO
La cooperatividad (positiva) consiste en que la fijacin de una molcula de substrato favorece la fijacin del siguiente, y as hasta ocuparse toda la molcula
+
1
s s
2
s s s
+
3
s s s s
Existe tambin cooperatividad negativa, cuando la fijacin de una molcula de substrato dificulta la fijacin del siguiente.
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CAMBIO CONFORMACIONAL INDUCIDO POR: UN EFECTOR ALOSTRICO POR EL MISMO SUSTRATO
Interaccin homotrpica
Interaccin heterotrpica
efecto de la entrada de un ligando sobre la entrada de otro igual interacciones casi siempre positivas
efecto de un ligando sobre la fijacin de un ligando diferente interacciones positivas o negativas pueden tener lugar en enzimas alostricos monomricos
INHIBICIN POR PRODUCTO FINAL (retroalimentacin negativa o feedback negativo)
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REGULACIN POR MODIFICACIN COVALENTE

algn AMINOCIDO de la enzima Unin covalente a algn grupo qumico
ACTIVACIN O INACTIVACIN DE LA ENZIMA

grupo qumico ms frecuente:
grupo fosfato (P)

aa enzimticos intervientes:
Ser y Trh
Ejemplo de modificacin covalente, 1

Fosforilacin: Protein kinasas
R CH N O C Ser H C H N C R' CH N
H CH2OH O H
ATP
ADP
R CH N O C Ser HC H N C H R' C N
H O CH2O P OOO H
Sobre residuos de Ser, Thr y Tyr

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Ejemplo de modificacin covalente, 2

Defosforilacin: Protein fosfatasas
R CH N O C Ser HC H N C R' C H N
H O CH2O P OOO H
H 2O
Pi
R CH N O C Ser H C H N C R' CH N
H CH2OH O H
Sobre residuos previamente fosforilados: Ser-P, Thr-P, Tyr-P Ctedra de Bioqumica - FOUBA
Algunas enzimas se activan al unirse al grupo PO 43 y se inactivan si lo pierden

Enzima A (inactiva) + Enzima A ~ P (Activa)
Otras se activan al perder el grupo P y se inactivan al ganarlo

Enzima B (activa) +
Enzima B ~ P (inactiva)
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REGULACION POR ZIMGENOS

Activacin proteoltica del tripsingeno
N Pepsingeno C N pH < 5 4
Activacin del pepsingeno

C
Pepsina
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Regulacin gentica
control a nivel del ADN
ADN
ARN
Protenas (enzimas)
Un metabolito impide la transcripcin de una enzima disminuye la sntesis de la enzima no se catalizar la reaccin
VALOR DIAGNSTICO DE LAS ENZIMAS SRICAS
Enzimas presentes en el plasma
ENZIMAS PLASMTICAS FUNCIONALES o ESPECIFICAS
ENZIMAS NO FUNCIONALES
Ej. lipoproteinlipasa, seudocolinesterasa proenzimas de la coagulacin sangunea, etc
Ej. amilasa pancretica, fosfatasa alcalina biliar, fosfatasa cida prosttica, etc
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una minora son molculas de ARN.

temperatura, pH, eficacia cataltica, control?

=> Las enzimas aceleran la velocidad de la reaccin qumica

(velocidad de reaccin) = (constante) x (cc de reactivos)n

donde n es el orden de la reaccin

VELOCIDAD DE REACCIN Y EQUILIBRIO

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FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD DE UNA REACCIN

Es el valor mnimo de energa de colisin necesaria para que ocurra la reaccin

Producto = CO2 + H2O

Para que una reaccin tenga lugar superar la energa de activacin.

Producto = CO2 + H2O

(1)aumentando la T de reaccin o (2)disminuyendo la energa de activacin.

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MECANISMO DE ACCIN ENZIMTICO: Ea

Las enzimas disminuyen la energa de activacin

COMPARACIN DE LAS Ea DE LAS REACCIONES CON Y SIN CATALIZADOR: CON y SIN

Las enzimas no modifican el cambio neto de energa

DIAGRAMA DE ENERGA PARA UNA REACCIN QUMICA

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La variacin de energa libre de la reaccin ( G= Gf-Gi) no se modifica en presencia del catalizador.

LA ENZIMA SE RECUPERA INALTERADA AL FINAL DE UN CICLO CATALTICO

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Elevado poder cataltico.

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Estructura proteica + cofactor

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(protena inactiva) INORGNICO= In metlico Levemente unido

Firmemente unido (Unin covalente)

Ejemplo de enzima conjugada

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Algunas vitaminas funcionan como coenzimas en distintas rutas metablicas

FACTORES QUE MODIFICAN LA ACTIVIDAD ENZIMTICA:

Temperatura pH (ionizacin) Concentracin de sustrato

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INFLUENCIA DEL pH y LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Desnaturalizacin o prdida del estado inico de la enzima

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CURVAS DE ACTIVIDAD ENZIMTICA EN FUNCIN DEL pH

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ESQUEMA DE UNA REACCIN ENZIMTICA

Influencia de la concentracin de SUSTRATO en la reaccin enzimtica

FENMENO DE SATURACIN de la enzima por el sustrato

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L. Michaelis y M. L. Menten (1913)

Teora general acerca de accin y cintica enzimtica

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ECUACIN DE MICHAELIS - MENTEN

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Unidad de concentracin (Molar)

> Afinidad de la Ez por el S

Representacin de Vr en funcin de la [S] para una reaccin dada:

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Representacin grfica de ecuacin de Michaelis Menten segn

Proteasa del virus del SIDA +

No puede ser tratada por Michaelis - Menten

INHIBIDORES REVERSIBLES: competitivos

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EFECTO DE UN INHIBIDOR COMPETITIVO