ELETROFORESE EM GEL DE AGAROSE INTRODUO A eletroforese em gel consiste na tcnica de separao das molculas lineares de DNA de acordo com

o seu tamanho quando submetidas a um campo eltrico, atravs de uma matriz de gel, um material poroso e inerte, semelhante a uma gelatina. A eletroforese tambm utilizada para separar molculas de RNA. Os segmentos de DNA de fita dupla lineares apresentam uma estrutura secundria uniforme e suas velocidades de migrao durante a eletroforese so proporcionais a seu tamanho molecular. A separao eletrofortica de protenas geralmente realizada usando eletroforese em gel de poliacrilamida, em que as protenas so conduzidas por uma corrente aplicada atravs de uma matriz de gel. Como o gel de poliacrilamida possui poros muito pequenos, eles no permitem a passagem de molculas de DNA muito grandes, portanto, para separ-las por tamanho, utilizase o gel de agarose (um polissacardeo isolado de algas marinhas vermelhas). Essa tcnica amplamente utilizada tanto para propsitos analticos, como para propsitos preparativos.
A agarose um polmero da parede celular de algas, composto de subunidades de galactose. Quando dissolvida em gua quente e em seguida resfriada, a agarose toma uma consistncia gelatinosa. A agarose muito usada em biologia molecular como matriz na eletroforese em gel. A eletroforese em gel de agarose tem sido uma das ferramentas mais empregadas na verificao da qualidade, relacionada pureza e quantidade, de DNA ou RNA de uma amostra e tambm para a purificao de cidos nucleicos. Nesta, o DNA de trabalhado separado dos demais contaminantes (como outras molculas de DNA de diferente tamanho), posteriormente cortado do gel e separado da agarose. MATERIAIS

Amostra de DNA; Papel alumnio; Cuba de eletroforese; Microondas; Erlenmeyer; Fonte de eletroforese; Fita adesiva; Pente;

Gel de agarose; Marcador de alto peso molecular; Tampo de carregamento (GelRed); Pipeta automtica; Suporte com filme de PVC; Transluminador.

PROCEDIMENTOS
1. Pesou-se em papel alumnio 0,8g de agarose que foi posteriormente colocado em um erlenmeyer juntamente com 10mL de TAE 10X, que foi diludo 10 vezes ao se adicionar 90mL de gua. 2. Agitou-se a soluo que foi colocada no microondas na potncia mxima at homogeneizar, aproximadamente 1 min e 30 segundo, com pausas de 30 a 30 segundos para agitao, evitando sempre que a soluo fervesse. 3. Deixou-se a soluo de gel esfriar. 4. Preparou-se o suporte de gel, selando as laterais com fita adesiva. 5. Despejou-se a soluo de gel no suporte tomando-se o cuidado de no fazer bolhas. 6. Colocou-se o pente no suporte. 7. Esperou-se a soluo solidificar. 8. Retirou-se o pente. 9. Adicionou-se o marcador molecular no primeiro poo. 10. Adicionaram-se as amostras extradas nos demais poos. 11. O suporte foi colocado na cuba de eletroforese. 12. Completou-se at a marca indicada na cuba com soluo de TAE 1X. 13. O gel foi colocado para correr, ligando-o na corrente

DISCUSSO O DNA por apresentar caractersticas de carga negativa, quando submetido a um campo eltrico, tende a migrar atravs do gel em direo ao plo positivo. As molculas de DNA so maleveis e tendem a ocupar um volume efetivo.