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1.-Definicin:
Biorremediacin.
La biorremediacin puede ser definida como el uso de organismos vivos, componentes celulares y enzimas libres, con el fin de realizar una mineralizacin (compuesto blanco CO2 + H2O), una transformacin parcial, la humificacin de los residuos o de agentes contaminantes y una alteracin del estado redox de metales. Histricamente el compostaje fue una primitiva forma de biorremediacin en donde los residuos por ej. derivados de la recoleccin domiciliaria (restos orgnicos, inorgnicos, residuos industriales, etc.) son incluidos en container permitiendo que puedan ser biodegradados por microorganismos (Senior and Balba, 1990). Los factores que gobiernan la biorremediacin son complejos y pueden variar enormemente dependiendo de la aplicacin. En muchos casos puede llegar a ser difcil distinguir entre los factores biticos y abiticos que contribuyen con la biorremediacin. La biorremediacin es un fenmeno comn en la naturaleza cuando en un ambiente o ecosistema se produce una alteracin del equilibrio como es el caso de una gran tala de rboles, esto origina un aumento considerable de materia orgnica en el suelo.
En este caso los factores fsicos y biticos tratan de reponer el dao, se produce entonces un aumento de organismos saprfitos los cuales ocasionan una gran mineralizacin de la materia cada, adems el resto de esa materia puede ser reciclada o humificada. Cabe remarcar que cuanto ms diversidad biolgica exista en un ecosistema con mayor eficiencia podr autodepurarse. Las tcnicas de biorremediacin pueden ser clasificadas segn el tratamiento y a la fase usada. Se denomina biorremediacin in situ cuando el suelo contaminado se trata en el lugar, el sitio permanece prcticamente inalterado durante el tratamiento y la biorremediacin ex situ el suelo es retirado y trasladado hasta una unidad de tratamiento. El tratamiento es efectuado en fase slida si el suelo es tratado sobre un lecho especialmente preparado y no hay lquido libre. Por el contrario se denomina fase barro cuando se lleva en un reactor y se forma barro entre el suelo y agua (Ferrari, 1996). En general existen dos estrategias para ayudar a un ecosistema a remediarse: La primera es agregar nutrientes de forma de estimular las poblaciones naturales y as aumentando su actividad y la segunda es introduciendo microorganismos remediacin. En este ltimo caso con las nuevas tcnicas de la ingeniera gentica se pueden emplear microorganismos genticamente modificados hacindolos ms eficientes en la biorremediacin. exgenos dentro del ecosistema como forma de
2. Tipos de Biorremedacin.
2.1Biorremediacin de hidrocarburos.
La descomposicin microbiana de hidrocarburos es de considerable importancia econmica y ambiental por los perjuicios que ocasiona. Una de las principales causas de contaminacin del ambiente son los derrames de petrleo, tal como ocurri en marzo de 1989 cuando el superpetrleo Exxon Valdez choc con varios iceberg en el estrecho del Prncipe Guillermo en Alaska, derramando 11 millones de galones de petrleo en el agua ocasionando un impacto ecolgico inimaginable cuyo gasto de limpieza se estim en (U$ 1500 millones). Los hidrocarburos varan en su habilidad de ser degradados, los derrames de estos en el agua tienden a formar lminas en la superficie en donde el viento y el oleaje crean microscpicas emulsiones. Esto permite que los microorganismos predominantemente bacterias (pseudomonas,
corinebacterias y micobacterias), algunas levaduras y hasta algas verdes tengan una mayor superficie de contacto con la partcula, facilitando el acceso a la misma y permitiendo su degradacin. Pero la biorremediacin en el agua se ve afectada por la disponibilidad de nutrientes debido a que estos generalmente se encuentran en bajas
concentraciones, por lo que generalmente tras un derrame se adiciona fsforo y nitrgeno como forma de estimular el crecimiento de los microorganismos que potencialmente degradarn el hidrocarburo.
En el caso de que el derrame sea en el suelo el proceso es diferente, la oxidacin es llevada a cabo por hongos y bacterias y el movimiento del hidrocarburo es ms vertical, adems el proceso de humificacin tiende a atrapar el residuo hacindolo ms persistente. En este caso el factor limitante no est en la disponibilidad de nutrientes sino que la disponibilidad de oxigeno es baja, por lo que se debe aerear el suelo o agregar perxido de hidrogeno (H2O2) para mejora el proceso. En los derrames, la fraccin de hidrocarburo ms voltil es evaporada con facilidad dejando a los componentes alifticos y aromticos para ser oxidado por diversos grupos de microorganismos. En experimentos llevados a cabo tras los derrames de petrleo se demuestra que el nmero de bacterias oxidantes aumenta de 10 3 a 106 veces poco despus del mismo y en condiciones favorables ms del 80 % de los componentes no voltiles son oxidados entre 6 meses y un ao del derrame. Algunas fracciones, como los hidrocarburos de cadena ramificada y los policclicos, permanecen mucho ms tiempo en el ambiente principalmente si llegan a zonas anaerobias ocasionando perjuicios a largo plazo.
1981) not que la biodegradacin del naftaleno (2 anillos) era ms de 1000 veces superior que la del benzopireno (5 anillos), en general estructuras conteniendo 4 o ms anillos son difciles de degradar. Los estudios de degradacin de los HAPs comenzaron hace ms de 80 aos cuando Sohgen and Stormer aislaron bacterias capaces de degradar compuestos aromticos usndolos como fuente de carbono (Atlas, 1981). En ambientes acuticos los principales gneros de bacterias y hongos hallados son los siguientes, Pseudomonas, Achromobacter, Arthrobacter, Micrococcus, Nocardia, Vibrio, Acinetobacter, Brevibacterium,
Corynebacterium, Flabobacterium, Candida, Rhodotorula y Sporobolomyces. En investigaciones realizadas en el suelo mostraron que 11 gneros de hongos entre los que se destaca Phanerochaetes chrysosporium que es considerado un microorganismo prometedor debido a la produccin de lignasa con alto potencial de degradar compuestos insolubles de alto peso molecular y 6 de bacterias fueron los grupos dominantes en la degradacin de HAPs. La degradacin bacteriana de estos compuestos normalmente envuelve la formacin cis,dihydrodiol observado por la formacin de un dicido como el cido cis,cis-mucnico mientras que en eucariotas como los hongos la oxidacin da la formacin de trans,dihydrodiol, en ambos casos un diol es un intermediario indispensable (Alexander, 1977). Cerniglia y Heitkamp (1989) han sugerido los siguientes principios aplicados a la degradacin de los HAPs. 1) Una gran variedad de bacterias, hongos y algas tienen la habilidad de degradarlos.
2) La hidroxilacin de los HAPs envuelve la incorporacin de oxigeno molecular. 3) Los microorganismos procariotas metabolizan los HAPs con un ataque inicial de una dioxigenasa para dar cis, dihidrodiol que adems es oxidado para formar dihidroxidos. 4) HAPs con ms de 3 anillos de benceno no sirven como sustrato para el crecimiento bacteriano lo que hace que deba estar sujeto a una transformacin co-metablica. 5) Muchos de los genes son codificados por plsmidos. 6) HAPs de bajos pesos moleculares como el naftaleno son degradados rpidamente mientras que aquellos de alto peso como el antraceno o el benzopyreno son ms resistentes. 7) La biodegradacin ocurre con mayor eficiencia en la interfase sedimento/agua. 8) La adaptacin microbiana puede ocurrir por continuas exposiciones a los HAPs.
Dado que si los microorganismos son capaces de degradar compuestos txicos en la naturaleza es de esperar que estos hagan lo mismo en un laboratorio bajo condiciones optimas. Este tratamiento consiste en la formacin de un barro con el material contaminado y agua.
Tabla 1.- Parmetros fsicos de los 16 HAPs de mayor prioridad segn USEPA. (PM=peso molecular, PF=punto fusin (C), PE=punto ebullicin (C), S=solubilidad en agua a 25 C)
Nombre
Sinnimo
PM
PF
PE
Naftaleno Acenaftileno
128.17 80
218 31.7
152.20 80- 280 83 154.21 93- 279 3.8 96 166.22 115 293 1.685 178.23 100- 340 1.00 101 178.23 216 340 0.044 6
Acenafteno
1,8-Etilennafteno
C12H10
Fluoreno Fenantreno
2,3-Bencindeno
3 3
C13H10 C14H10
Antraceno
C14H10
Fluoranteno
Benzo(jk)fluoreno 1,2-Benzacenafteno 4 C16H10 202.2 107- 384 0.206 6 110 202.2 156 393- 0.123 6 404
Pireno
Benzo(def)fenantre 4 no
C16H10
1,2-Benzantraceno
C18H12
1,2-Benzofenantreno 4
C18H12
Benzo(b) fluoranteno 3,4 Benzofluoranteno Benceno(e) acefenantrileno 5 C20H12 252.3 163- 2 165 0.0014
Benzo(k)
8,9 Benzofluoranteno 11,12Benzofluoranteno 5 C20H12 252.3 217 480 2 252.3 179 495 0.003 2 8
fluoranteno
C20H12
C22H14
C22H12
pireno
o-fenilenpireno
C22H12
El tratamiento se efecta en un biorreactor donde se realiza el proceso en forma controlada, es decir se suministra nutrientes, se inocula con los microorganismos deseados, se mantiene en aereacin continua, as como el mantenimiento del pH y la temperatura. En experimentos en la Universidad de Helsinski con compostaje de suelos contaminados con clorofenol se observ una decontaminacin de los mismos. La concentracin de clorofenol fue reducida de 212 mg Kg -1 a 30 mg Kg
-1
durante 4 meses de compostaje (Valo and Salkijona-Salonene, 1986), adems se observ que el proceso de descomposicin se aceleraba si se inoculaba con Rhodococcus chlorophenolicus. El ambiente que se genera en el compostaje est caracterizado por elevadas temperaturas (>50C), alta concentracin de nutrientes, suficiente oxigeno y un pH neutro. La Shell Research Ltd. deline diferentes factores que limitan la degradacin de hidrocarburos en el suelo (Morgan and Watkinson, 1989). La optimizacin de esos factores puede ser llevada a cabo por un a buen compostaje. Williams and Keehan (1993) indicaron que los microorganismos que degradan contaminantes no difieren significativamente entre el suelo y el compostaje. Sin embargo la potencial transformacin vara por diferentes razones. Primero, la elevada temperatura que se genera en el compostaje incrementa la cintica enzimtica que envuelve el proceso. Segundo, la oportunidad para
la cooxidacin puede ser aumentada debido a la variedad de sustratos presentados. Tercero, las modificaciones en el microambiente fsico y qumico del compostaje pueden servir para aumentar la diversidad microbiolgica. Finalmente, las altas temperaturas aumenta la solubilidad y la transferencia de masa, esto hace que sea ms metabolizado por los microorganismos. Las altas temperaturas son el factor ms determinante en el ambiente del compostaje, esto se debe a que la presin de seleccin sobre las bacterias se ve intensificada por el aumento de temperatura. Finstein, report que en compostajes con temperaturas superiores a 61C .las especies bacterianas decaen drsticamente (Racke and Frink, 1989). Bajas poblaciones a altas temperaturas en compostaje de suelo con petrleo han sido demostradas por estudios en la Mankato State University (Goetz, no publicado). Tanto las bacterias termfilas gram positivas como negativas son capaces de degradar hidrocarburos tal como el gnero Thermomicrobium y muchos de los termfilos estn obligados a metabolizar hidrocarburos. Se ha descubierto una bacteria termfila Bacillus licheniformis HA1, el cual es muy efectivo para iniciar el compostaje. Su rol sera de prevenir la cada del pH en estadios tempranos del compostaje y permitira el desarrollo de otros termfilos contribuyendo entonces con la descomposicin de la materia orgnica en fase termfila del compostaje. (Kiyohiko et al., 1994)
naturaleza. As, los organismos capaces de metabolizarlos no podran existir en la naturaleza. Algunos de los xenobiticos ms conocidos son los plaguicidas entre los que se incluyen herbicidas, insecticidas, nematicidas, funguicidas, etc. Dentro de los plaguicidas se encuentran los cidos clorofenoxialquil carboxlicos, ureas sustituidas, nitrofenoles, triacinas, fenilcarbamato, organoclorados, organofosforados. Algunas de estas sustancias pueden actuar como donadores de electrones o como fuente de carbono para ciertos microorganismos. Estos compuestos tienen diferencias en la persistencia en el ambiente (ver tabla 2) pero esa persistencia es aproximada dado que depende de varios factores ambientales como la temperatura, el pH, la aereacin y el contenido de sustancias orgnicas del suelo. Algunos de los insecticidas clorados pueden persistir por ms de 10 aos. Hay que remarcar que en la degradacin de un plaguicida no solo intervienen los microorganismos, sino que tambin puede sufrir volatilizacin, filtracin o degradacin qumica.
Plaguicidas en el suelo.
Cuando un plaguicida llega al suelo ste queda sometido a diversos factores que van a afectar su persistencia. El lavado de los suelos, la degradacin biolgica y qumica, la adsorcin por coloides, la volatilizacin y la absorcin por los cultivos son algunos de stos factores. El perodo en que un pesticida persiste en el suelo es de gran importancia ya que refleja el tiempo en que la plaga estar sometida al control, afectando la polucin del medio ambiente, su acumulacin en plantas, etc.. Tabla 2) Persistencia de herbicidas e insecticidas en los suelos
Sustancia
Insecticidas clorados DDT Aldrn Clordano Heptacloro Lindano Insecticidas organofosforados Diazinn Malatin Paratin Herbicidas 2,4-D(cido 2,4-diclorofenoxiactico) 2,4,5T(cido2,4,5,triclorofenoxiactico) Dalapn Atrazina Simazina 4 semanas 20 semanas 8 semanas 40 semanas 48 semanas 12 semanas 1 semana 1 semana 4 aos 3 aos 5 aos 2 aos 3 aos
Propazina
1.5 aos
Degradacin microbiana.
Durante muchos aos se crea que los mecanismos de degradacin de los plaguicidas eran similares en animales y en microorganismos. Pero con el avance de las investigaciones se apreciaron las diferencias, en animales se da una conversin de stos compuestos de forma que puedan ser excretables, ste proceso se da principalmente en el higado. En microorganismos su utilizacin es por el contrario una forma de obtencin de energa o fuente de carbono. Las vas metablicas son muy variadas, fermentaciones, respiraciones anaerbicas, accin de exoenzimas y procesos quimiolittrofos pueden ser encontrados (Matsumura, 1982). Existen dos formas por la que la cual la microflora puede degradar el plaguicida. I) La sustancia favorece el crecimiento microbiano y es empleada como fuente de carbono, energa y raras veces como fuente de nitrgeno, azufre, etc. II) El nmero de microorganismos aumenta y el aislamiento se realiza utilizando el plaguicida como nica fuente de nutrientes. Luego de que el compuesto fue degradado las poblaciones decrecen. III) Por cometabolismo, el compuesto no acta directamente como fuente de nutrientes sino que se debe emplear otras como la glucosa, que al disminuir en el medio inducen las enzimas
necesarias
para
la
degradacin
del
plaguicida.
Las reacciones catablicas ocurren principalmente cuando las dosis de pesticidas son altas y la estructura qumica permite su degradacin. (Alexander, 1977) indica una serie de reacciones que pueden ser realizadas plaguicidas: Detoxificacin- Conversin de una molcula txica en otra no txica (Arthrobacter spp). Degradacin- Transformacin de una sustancia compleja en productos ms simples ej. La mineralizacin que da como resultado la aparicin de CO2, H2O, NH3, etc. (Pseudomonas spp) Conjugacin- Formacin de compuestos por reacciones de adicin, en donde el microorganismo combina el plaguicida con metabolitos celulares (adicin de aminocidos, cidos orgnicos, etc.) El estudio de la biodegradacin de los plaguicidas no es sencillo en el suelo, ya que las concentraciones son muy bajas. Se deben emplear cromatografias de fase gaseosa o lquida, espectrofotometra ultravioleta, para poder detectar trazas de pesticidas o sus intermediarios de la degradacin. por microorganismos hetertrofos sobre los
Este cambio en el estado de oxidacin permite seguir varias estrategias de biorremediacin: a) El metal se vuelve menos soluble y precipita lo que hace que sea menos utilizado por los organismos del ambiente. b) Hace que se vuelva por el contrario ms soluble por lo que puede ser removido por permeabilidad. c) Permite que pueda haber una volatilizacin del tomo. d) Hacerlo en si menos txico para los organismos del medio.
Este Hg2+ es muy txico pero los microorganismos convierten el Hg 2+ en mercurio elemental Hg0 detoxificandolo. Una reductasa NADP (codificada por plsmidos) asociada al Hg2+ cataliza la siguiente reaccin.
Hg0 +CH3-B12
CH3-Hg0
Metilmercurio
3. Tratamiento De Efluentes.
Las aguas residuales son materiales derivados de la actividad industrial y de los residuos domsticos, los cuales por razones de salud pblica no pueden ser vertidos a los cursos de aguas corrientes o lagos. A pesar de las recomendaciones y ordenanzas en los ltimos aos los ambientes naturales han recibido un creciente aporte de efluentes industriales y domsticos que han llevado al deterioro de muchos cursos de agua hacindolos incompatibles con la vida. Aquellos materiales txicos o indeseables deben ser tratados para hacerlos inocuos, los materiales inorgnicos como sedimentos u otros residuos pueden ser tratados por procesos fisico-qumicos, pero los residuos con una carga orgnica importante deben sufrir un tratamiento microbiolgico para su oxidacin. El tratamiento de desechos generalmente involucra etapas mltiples de tratamiento fsico y biolgico.
Tratamiento primario:
Consiste en separaciones fsicas, en la que el agua se hace pasar por una serie de mayas para eliminar residuos mayores y luego el efluente se deja asentar para permitir que los slidos suspendidos sedimenten.
Tratamiento secundario:
Estos son procesos que reducen la demanda bioqumica de oxigeno (DBO) de los desechos originales antes de verterlos a los cursos de aguas, consta de los siguientes procesos.
Proceso anaerbico: Este proceso comprende procesos de digestin y fermentacin bsicamente realizada por bacterias. El resultado final es la produccin de CO2 y CH4 con lo que se logra una disminucin del contenido de sustancia orgnica. La descomposicin anaerbica se suele usar para el tratamiento de materiales con mucha sustancia orgnica insoluble como celulosa, fibra, etc. El proceso puede ser resumido de la siguiente forma, (ver figura 1).
1) Digestin inicial de las macromolculas por proteasas, polisacaridasas y lipasas extracelulares hasta sustancias solubles. 2) Fermentacin de los materiales solubles hasta cidos grasos 3) Fermentacin de los mismos a acetato, CO2 y H2. 4) Formacin de CH4 a partir de H2, CO2 y acetato.
La formacin de metano es llevada a cabo un grupo de microorganismos anaerbicos obligados muy especializados, las bacterias metanognicas, (en la tabla 3, se muestran los distintos grupos que pueden ser encontradas). Los procesos de descomposicin operan en forma semicontinua en tanques cerrados llamados digestores de lodo, dentro de los cuales se introduce el material no tratado y del cual se retira el material ya tratado a intervalos. El tiempo de retencin en el tanque puede ser de 2 semanas a un mes. Posteriormente el residuo slido el cual est formado por material
indigerible y masa bacteriana, se elimina peridicamente, se seca y luego se quema o se entierra. Proceso aerbico: El sistema aerbico de tratamiento ms comn es el llamado de lodos activados. Aqu, las aguas de desecho se mezclan y aerean en un gran tanque con el fin de acelerar el proceso de degradacin. En estos ambientes se desarrollan hongos, bacterias formadoras de limo principalmente Zoogloea ramigera tpica de este proceso y bacterias filamentosas. El tiempo de permanencia del residuo en los tanques de lodos activados es de 5 a 10 horas el cual es demasiado corto para la oxidacin total del mismo. El proceso principal es la adsorcin de los materiales solubles al material celular microbiano. Esto permite una reduccin de la DBO del lquido (de 75 a 90%), pero la DBO general (lquido + slido) se reduce muy poco. La gran reduccin de la DBO se produce en el digestor anaerbico, al cual se transfiere el agregado.
Tratamiento terciario:
Es un proceso de elevado costo econmico que involucra un tratamiento fisico-qumico que incluye filtracin, precipitacin y cloracin lo que permite reducir los niveles de fosfatos y nitratos del efluente final.
La calidad final de las aguas residuales es tal que no llega a sostener un desarrollo microbiano extensivo y en muchos casos se llega a bombear al suministro de agua algunas ciudades.
Orden
Familia
Gnero Methanobacterium
Forma Bastn
Metanobacteriales Methanobacteriaceae
Metanococales
Methanococcaceae
Methanococcus
Coco irregular
Metanomicrobiales Methanomicrobiaceae
Methanomicrobium Methanolacina
Methanosarcinae
Methanosarcina
Coco irregular Coco irregular Coco irregular Coco irregular Bastn Bastn Coco irregular
4. Importancia de la biorremediacin.
La biorremediacin es una prctica que est tomando importancia a nivel mundial dado que el aumento de la actividad industrial est degradando cada vez ms los ecosistemas naturales. El empleo de microorganismos conocidos para el tratamiento de desechos potencialmente txicos ya es una prctica habitual en pases desarrollados.
UNIVERSIDAD NACIONAL
TRABAJO DE INVESTIGACION
LA BIORREMEDIACIN
ASIGNATURA: Biotecnologa.
INTEGRANTES: