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Instructions for Use

25-OH-Vitamin D direct ELISA


Enzyme immunoassay for the quantitative direct determination of 25-OH-Vitamin D in human serum and plasma.

UK51081
12x8
2-8C

I B L

I N T E R N A T I O N A L
Phone: +49 (0)40-53 28 91-0 Fax: +49 (0)40-53 28 91-11

G M B H

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25-Hydroxy Vitamin D EIA


Enzymeimmunoassay for the quantitative determination of 25-hydroxyvitamin D and other hydroxylated metabolites in serum or plasma Technique immuno-enzymatique pour le dosage de la 25-hydroxyvitamine D et d'autres mtabolites hydroxyls dans le srum ou le plasma Enzymimmunassay zur quantitativen Bestimmung von 25-Hydroxy-Vitamin D und anderer hydroxylierter Metaboliten in Serum oder Plasma Dosaggio immunoenzimatico per la determinazione quantitativa della 25-idrossivitamina D e altri metaboliti idrossilati nel siero o plasma Inmunoensayo enzimtico para la determinacin cuantitativa de 25-hidroxivitamina D y otros metabolitos hidroxilados en suero o plasma

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Utilisation Pour usage diagnostique in vitro La trousse 25-Hydroxy Vitamin D EIA dIDS est une technique immuno-enzymatique destine au dosage de la 25-hydroxyvitamine D (25-OH D) et dautres mtabolites hydroxyls prsents dans le srum ou le plasma humain. Les rsultats des dosages doivent tre utiliss en conjonction avec d'autres donnes cliniques et de laboratoire pour aider le mdecin l'valuation de la suffisance en vitamine D chez ladulte. Rsum et explication La vitamine D est un terme utilis communment pour dsigner une famille de sco-strodes apparents. A la suite de lexposition au soleil, le 7-dihydrocholestrol, localis au fond des couches de lpiderme croissance active, subit un clivage protolytique de lanneau B rsultant dans la libration de pr-vitamine D3 qui est ensuite transforme par isomrisation en vitamine D3 (cholcalcifrol). La vitamine D3 et la vitamine D2 (ergocalcifrol) peuvent aussi tre obtenues par apport dittique ou par un nombre limit de produits alimentaires. La vitamine D2 est mtabolise de la mme faon que la vitamine D3. La vitamine D est stocke dans le tissu adipeux et libre dans la circulation lie une protine porteuse, la VDBP ou Vitamin D Binding Protein, et lalbumine. Dans le foie, la vitamine D est hydroxyle pour donner la 25-hydroxyvitamine D, qui circule aussi sous forme de complexe avec la VDBP. Une petite partie de la 25-OH D est hydroxyle ultrieurement dans les reins, un processus directement rgul par l'hormone parathyrode et le niveau de calcium ionis, pour former lhormone calciotrope biologiquement active 1,25-dihydroxyvitamine D. Les phases suivantes dhydroxylation et de mtabolisation de la vitamine D produisent des composs hydrosolubles et aisment excrts. Lactivit hpatique de la 25-hydroxylase de la vitamine D nest pas prcisment rgule et des variations dans la production cutane de vitamine D3 ou lingestion de vitamine D (D3 ou D2) entranent des variations du taux de 25-OH D dans la circulation(1). On considre que la mesure de la concentration srique en 25-OH D est la mthode la plus fiable afin de mesurer le taux de vitamine D et peut donc tre utilise pour dterminer si un patient souffre ou non dune insuffisance en vitamine D(2). Lvaluation du taux de vitamine D peut tre requise pour

dterminer la cause dune concentration en calcium srique anormale chez les patients. Description de la mthode La trousse 25-Hydroxy Vitamin D EIA dIDS est une technique immuno-enzymatique pour le dosage de la 25-OH D et dautres mtabolites hydroxyls prsents dans le srum ou le plasma. Les standards, contrles et chantillons sont dilus avec de la 25-OH D marque avec de la biotine. Les chantillons dilus sont incubs dans des puits de microtitrage recouverts dun anticorps de mouton anti-25-OH D hautement spcifique, pendant 2 heures temprature ambiante, avant aspiration et lavage. De lavidine marque par une enzyme (peroxydase de raifort) est ajoute et se fixe de faon slective au complexe de biotine et, aprs une tape supplmentaire de lavage, une raction de coloration est obtenue en ajoutant un substrat chromogne (TMB). Aprs arrt de la raction, la densit optique des mlanges est mesure par un lecteur de plaques de microtitrage. Lintensit de la coloration est inversement proportionnelle la concentration de la 25-OH D. Mises en garde et prcautions La trousse 25-Hydroxy Vitamin D EIA dIDS est prvu uniquement pour l'usage diagnostique in vitro et n'est pas pour l'usage interne chez les humains ou les animaux. Ce produit doit tre employ strictement selon les instructions prsentes dans la notice. IDS Limited ne pourra tre tenue responsable d'aucune perte ou dommage (except selon les exigences du statut) quelle quen soit la cause, provenant du manque de conformit aux instructions fournies. PRECAUTION : Cette trousse contient des matriaux dorigine humaine et/ou animale. Manipuler les ractifs comme si ils pouvaient de transmettre un agent infectieux. Des prcautions appropries et les bonnes pratiques de laboratoire doivent tre utilises dans le stockage, la manipulation et la disposition des ractifs de trousse. II faut se dbarrasser des ractifs inutiliss en suivant les recommandations des autorits comptentes locales et la rglementation en vigueur. Srum humain : Standards CAL et contrles CTRL Le srum humain utilis pour la fabrication des composantes de cette trousse a t analys selon les recommandations du FDA et sest avr ngatif en anticorps anti-VIH 1/2, en Ag HBs, et en anticorps antiVHC. Toutefois, puisqu'il n'existe aucune mthode garantissant l'absence totale d'agents pathognes, on doit considrer tout matriau d'origine humaine comme
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tant potentiellement infectieux. C'est pourquoi il faudra le manipuler en accord avec les rgles de Bioscurit de groupe de risque 2. Azide de sodium Xn. Nocif: Les Contrles CTRL contiennent l'azide de sodium (NaN3) >0,1% (p/p) (<1%). R22 Nocif en cas d'ingestion. R52/53 Nocif pour les organismes aquatiques, peut entraner des effets nfastes long terme pour l'environnement aquatique. S46 En cas d'ingestion consulter immdiatement un mdecin et lui montrer l'emballage ou l'tiquette. S36/37 Porter un vtement de protection et des gants appropris. S60 liminer le produit et son rcipient comme un dchet dangereux. Certains ractifs contenus dans cette trousse renferment de l'azide de sodium. Ce sel peut ragir avec les installations sanitaires en plomb ou cuivre et former des azides mtalliques extrmement explosives. Pour vacuer ces ractifs, rincer grande eau afin d'viter les accumulations d'azide. Acide chlorhydrique 0,5 M La solution darrt HCL contient de lacide chlorhydrique 0,5 M. R36/38 Irritant pour les yeux et la peau. S26 En cas de contact avec les yeux, immdiatement rincer grande eau et contacter un mdecin. S36/37 Porter un vtement de protection et des gants appropris. Ttramthylbenzidine Le substrat TMB SUBS contient de la 3,3,5,5ttramthylbenzidine. R21/22 Nocif par contact avec la peau et par ingestion. S36/37 Porter un vtement de protection et des gants appropris. Prparation des ractifs Contrles CTRL : Les contrles CTRL sont fournis lyophiliss. Reconstituer avec 1 ml deau distille ou dsionise, reboucher les flacons et laisser reposer pendant 10 15 minutes temprature ambiante. Retourner plusieurs fois les flacons pour que leur contenu soit compltement reconstitu. Conserver entre 2 et 8 C. Solution de 25-D biotine 25-D BIOTIN SOLN : Le concentr de 25-D biotine 25-D BIOTIN 50x est fourni lyophilis. Ajouter 3 ml de tampon BUF dans

le flacon de concentr lyophilis de 25-D biotine 25-D BIOTIN 50x (bleu). Reboucher le flacon et le laisser reposer pendant 10 15 minutes temprature ambiante. Retourner plusieurs fois le flacon pour que le contenu soit compltement reconstitu. Ajouter le concentr reconstitu de 25-D biotine 25-D BIOTIN 50x (3 ml) dans le flacon contenant le reste du tampon BUF . Bien mlanger en retournant le flacon. La solution de 25-D biotine (50 ml) est verte. Marquer Solution de 25-D biotine sur le flacon. Conserver entre 2 et 8 C. Solution de lavage WASHBUF SOLN : Ajouter le contenu de chaque flacon de solution concentre de lavage WASHBUF 20x 950 ml deau distille ou dsionise et homogniser. Conserver temprature ambiante. Tous les autres ractifs sont fournis prts lemploi. Amener les ractifs temprature ambiante avant utilisation. Les ractifs doivent tre homogniss en retournant plusieurs fois le flacon avant usage. Conservation des ractifs Cette trousse est stable jusqu' la date de premption indique si conserve comme indiqu. Conserver la trousse entre 2 et 8 C aprs rception. Les contrles CTRL et la solution de 25-D biotine 25-D BIOTIN SOLN reconstitus peuvent tre conservs entre 2 et 8 C pendant 8 semaines maximum. Les barrettes des plaques recouvertes danticorps MICROPLAT non utilises doivent tre remises dans leur pochette en papier daluminium avec le sachet dessiccatif. Replier le bord de la pochette et la ranger dans un des sacs en plastique auto-scellants fournis. Conserver entre 2 et 8 C pendant 8 semaines maximum. La solution de lavage WASHBUF SOLN peut tre conserve temprature ambiante pendant 8 semaines maximum. Indices dune dtrioration des ractifs Prsence anormale de particules en suspension dans lun des ractifs. Diminution de la densit optique du standard zro. Pente ou courbe dtalonnage diffrente de celles obtenue rgulirement. Prlvement et conservation des chantillons On doit doser la 25-hydroxyvitamine D sur des chantillons de srum ou de plasma (EDTA ou hparine). On doit effectuer la sparation aussitt aprs le prlvement. Pour un stockage prolong, les chantillons devront tre conservs -20C minimum. viter les conglations et dconglations rptes.
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Procdure Matriel fourni 1. CAL 0 - 6 - Standards ( REF AC-5701A - AC-5701G): Srum humain tamponn contenant de la 25-hydroxyvitamine D et de lazide de sodium <0,09 %. La valeur exacte de chaque standard est imprime sur le rapport du contrle de qualit, 1 ml par flacon, 7 flacons par trousse. 2. MICROPLAT - Plaque recouverte danticorps ( REF AC-5702W): Microplaque contenant un anticorps polyclonal de mouton anti-25-hydroxyvitamine D fix sur la surface intrieure des puits en polystyrne, 12 x 8 barrettes de puits dans une pochette en papier daluminium avec un sachet dessiccatif. 3. 25-D BIOTIN 50x - Concentr de 25-D biotine ( REF AC-5703) : Tampon lyophilis contenant de la 25-hydroxyvitamine D marque par de la biotine et des stabilisants spciaux, 1 ml par flacon. 1 (F1) ou 2 (F2) flacons par trousse. 4. BUF - Tampon ( REF AC-5703B) : Ractif spcialis pour la dissociation de la 25-hydroxyvitamine D des protines liantes, 50 ml par flacon. 1 (F1) ou 2 (F2) flacons par trousse. 5. ENZYMCONJ - Conjugu enzymatique ( REF AC-5704) : Solution saline dans un tampon phosphate contenant de lavidine fixe sur de la peroxydase de raifort, une protine, des stabilisants enzymatiques et un agent de conservation. 22 ml par flacon. 1 (F1) ou 2 (F2) flacons par trousse. 6. CTRL 1 - 2 - Contrles ( REF AC-5705A - AC-5705B): Srum humain lyophilis contenant de la 25-hydroxyvitamine D et de lazide de sodium <1% (0,09% reconstitu), 1 ml par flacon, 2 flacons par trousse. 7. SUBS - Substrat TMB ( REF AC-SUBS) : Solution aqueuse spciale contenant de la ttramthylbenzidine (TMB) et de la peroxyde

dhydrogne, 28 ml par flacon. 1 (F1) ou 2 (F2) flacons par trousse. 8. HCL - Solution darrt ( REF AC-STOP) : Acide chlorhydrique 0,5 M, 13 ml par flacon. 1 (F1) ou 2 (F2) flacons par trousse. 9. WASHBUF 20x Solution concentre de lavage ( REF AC-WASHL): Solution saline dans un tampon phosphate contenant du Tween, 50 ml par flacon. 10. Adhsif pour plaques 8 par trousse. 11. Documentation technique Notice et contrle qualit. Matriel ncessaire mais non fourni 1. Tubes en verre borosilicat ou polypropylne, usage unique, 12 x 75 mm. Remarque : Ne pas utiliser de tubes en polystyrne. Ne pas rutiliser les tubes. 2. Pipettes de prcision : 25 l et 200 l. 3. Distributeur automatique : 1 ml, par ex. Eppendorf Multipipette 4780 ou similaire. 4. Pipettes de prcision canaux multiples : 100 l and 200 l. 5. Agitateur type Vortex. 6. Laveur automatique de microplaques (facultatif). 7. Lecteur photomtrique de microplaques et matriel danalyse des donnes.

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Procdure de dosage Reconstituer ou prparer les ractifs comme dcrit dans la section Prparation des ractifs . 1. Prparer et marquer des tubes en verre borosilicat ou polypropylne, un pour chaque standard CAL , contrle CTRL et chantillon SPE . 2. Ajouter 25 l de chaque standard CAL , contrle CTRL ou chantillon dans le tube correspondant. 3. Ajouter 1 ml de solution de 25-D biotine 25-D BIOTIN SOLN dans chaque tube. Bien homogniser (vortexer) pendant 10 secondes. 4. Ajouter 200 L de chaque standard, contrle ou chantillon dilu dans les puits appropris de la plaque enduite danticorps MICROPLAT en doublet. Couvrir la plaque avec la fermeture adhsive. Incuber entre 18 et 25 C pendant 2 heures. 5. Laver chaque puit trois fois avec de la solution de lavage WASHBUF SOLN : a) Lavage automatique de la plaque : Rgler le laveur de plaques pour quil distribue un minimum de 300 l de solution de lavage WASHBUF SOLN par puit. Effectuer trois cycles de remplissage-aspiration. b) Lavage manuel : Dcanter le contenu des puits en retournant dun seul coup la plaque. Distribuer 250 l de solution de lavage WASHBUF SOLN dans chaque puit. Dcanter et rpter deux fois ces oprations. Tapoter fermement la plaque retourne sur du papier absorbant afin de retirer lexcs de solution de lavage WASHBUF SOLN avant de passer ltape suivante. 6. Ajouter 200 l de conjugu enzymatique ENZYMCONJ dans chaque puit laide dune pipette canaux multiples. Couvrir la plaque avec la fermeture adhsive. Incuber entre 18 et 25 C pendant 30 minutes. 7. Rpter ltape 5 de lavage. 8. Ajouter 200 l de substrat TMB SUBS dans chaque puit laide dune pipette canaux multiples. Couvrir la plaque avec la fermeture adhsive. Incuber entre 18 et 25 C pendant 30 minutes. Remarque : Le substrat TMB est facilement contamin. Ne prlever du flacon que la quantit requise pour le dosage. Jeter le

substrat TMB non utilis. Ne pas le remettre dans le flacon. 9. Ajouter 100 l de solution darrt HCL dans chaque puit laide dune pipette canaux multiples. 10. Mesurer labsorbance de chaque puits 450 nm (rfrence de 650 nm) laide du lecteur de microplaques, dans les 30 minutes suivant lajout de la solution darrt. Calibration Les standards de 25-OH D sont standardiss par quantification UV. Contrle de qualit L'utilisation rgulire des chantillons de contrle plusieurs niveaux d'analyte est conseille pour assurer la validit des rsultats. Deux contrles de trousse sont fournis. Les contrles doivent tre tests comme inconnus. Des tableaux de contrle de qualit doivent tre maintenus pour suivre la performance de dosage. Calcul des rsultats Calculer le pourcentage de fixation (B/Bo%) de chaque standard, contrle et chantillon inconnu de la faon suivante : B/Bo% = (moyenne de la densit optique) x 100 (moyenne de la densit optique Std '0')

Tracer la courbe talon sur du papier semi-logarithmique en reportant les B/Bo% correspondant chaque standard sur laxe des ordonnes et leur concentration en 25-hydroxyvitamine D sur laxe des abscisses. Calculer le B/Bo% correspondant chaque chantillon inconnu et lire la concentration en nmol/l (nM) sur la courbe. Dautres techniques de traitement des donnes peuvent tre employes, mais les utilisateurs devront sassurer que la forme de la courbe slectionne est approprie et offre des rsultats acceptables. Il est recommand de calculer les courbes en utilisant la fonction spline ou 4PL . Conversion des units : X nmol/l x 0,40 x 2,5 Y ng/ml

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Donnes de dosage - Exemple Ces informations sont uniquement donnes titre dexemple et ne doivent pas tre utilises pour calculer des rsultats dchantillons. Puits A1, A2 B1, B2 C1, C2 D1, D2 E1, E2 F1, F2 G1, G2 H1, H2 A3, A4 B3, B4 Description Standard 0 0 nmol/l Standard 1 6.8 nmol/l Standard 2 14 nmol/l Standard 3 27 nmol/l Standard 4 67 nmol/l Standard 5 179 nmol/l Standard 6 380 nmol/l Echantillon 1 Echantillon 2 Echantillon 3 DO. 2,476 2,530 2,313 2,288 1,912 1,908 1,495 1,499 0,919 0,905 0,521 0,522 0,372 0,368 1,237 1,257 0,951 0,969 0,591 0,612 Moyenne de la DO 2,503 2,301 1,910 1,497 0,912 0,522 0,370 1,247 0,960 0,602 91,9 76,3 59,8 36,4 20,8 14,8 49,8 38,4 24,0 39 62 138 B/Bo% Rsultats nmol/l

Exemple de courbe standard Cette courbe standard ne doit tre utilise qu titre dexemple.
100

75

B/B0 %

50

25

0 1

10

100

1000

25-hydroxyvitamine D (nmol/L)

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Limites du dosage 1. Les chantillons de srum dont les concentrations en analyte sont suprieures celle du standard le plus concentr seront dilus, extraits et redoss. 2. Comme pour n'importe quelle procdure de diagnostic, les rsultats doivent tre interprts en mme temps que le contexte clinique et toute autre information du patient la disposition du mdecin. 3. Les caractristiques de performances du dosage nont pas t tablies chez les enfants. 4. Dans de rares cas, des titres trs levs danticorps anti-avidine peuvent conduire des interfrences. 5. Les substances suivantes ont t testes. Elles ninterfrent pas dans ce dosage 25-Hydroxy Vitamin D : Hmoglobine teste jusqu une concentration de 1470 mg/dl Bilirubine teste jusqu une concentration de 513 mol/l Lipides tests jusqu une concentration de 5,6 mmol/l de triglycrides Valeurs attendues Chaque laboratoire devra dterminer les intervalles adquats pour sa propre population locale. Il nexiste pas de convention universelle quant la concentration optimale de 25-OH D. Les plages devront tre bases sur les valeurs de dcision clinique applicables aux deux sexes de tous les ges plutt que sur des plages de rfrence de 25-OH D bases sur la population. Cest dans ce but quune tude tendue a examin le rapport entre les niveaux de vitamine D sriques et la PTH intacte. Un plateau de liPTH a t observ ~30 ng/ml3. De la mme manire, on notait une augmentation de labsorption de calcium (Ca) avec laugmentation du niveau de 25-OH D jusqu un niveau denviron ~30 ng/ml de 25-OH D. Pour une absorption optimale de Ca, des niveaux de 25-OH D suprieurs 30 ng/ml4sont ncessaires. Dans le cas de la 25-OH D, de nombreux autres facteurs sont galement susceptibles dinfluencer les valeurs : rgime alimentaire, heure de la journe, exposition au soleil, saison de l'anne5, situation gographique6, ge7, utilisation dcran solaire et /ou de vtements de protection8,9 et pigmentation de la peau10. Par consquent, prendre des chantillons sur un groupe dindividus apparemment

sains n'est pas le moyen idal d'tablir la plage de rfrence. Selon la US National Osteoporosis Foundation (Association amricaine consacre lostoporose) , un niveau >30 ng/ml est ncessaire pour protger la sant osseuse11. De la mme manire, la US National Kidney Foundation (Association amricaine consacre aux maladies rnales) considre comme des insuffisances ou dficiences des niveaux <30 ng/ml12. A partir dune tude des publications disponibles, les recommandations des statuts en 25-OH D sont: Plage Niveau Carence Insuffisant Suffisant Toxicit nmol/L <25 25-74 75-250 >250 ng/mL <10 10-29 30-100 >100

Les valeurs suivantes ont t dtermines avec la trousse 25-Hydroxy Vitamin D EIA dIDS et ne sont fournies ici qu titre indicatif. Il est recommand que chaque laboratoire tablisse ses propres normales. Adultes normaux 47,7 - 144 nmol/L (n = 36)

Caractristiques du dosage Exactitude La trousse 25-Hydroxy Vitamin D EIA dIDS a t compar un dosage radioimmunologique identifi pour la dtermination quantitative de la 25-hydroxyvitamine D et d'autres mtabolites hydroxyls. On a analys 180 chantillons, censs reprsenter un ventail de la 25-hydroxyvitamine D [9,3 - 151,2 nmol/l], par chaque mthode. Les rsultats ont t analyss par rgression linaire: IDS = 1,01(x) + 0,7; coefficient de corrlation (r) = 0,91 Sensibilit La sensibilit, dfinie comme tant la concentration correspondant la moyenne moins deux dviations standards sur 10 dosages du standard zro, est de 5 nmol/l.

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Prcision Intra-essai moyenne (nmol/l) 39,0 67,1 165

n=10 % CV 5,3 5,6 6,7

Inter-essais moyenne (nmol/l) 40,3 72,0 132

n=11 % CV 4,6 6,4 8,7

Test de surcharge Le pourcentage de rcupration a t tudi en ajoutant 25-OH D des chantillons avant de faire le dosage. Echantillon Mesur Attendu Rcupration nmol/l nmol/l % A 122 126 97 A 95,6 98,4 97 B 147 141 104 B 123 118 105 Moyenne 101 Test de paralllisme Le paralllisme a t tudi en diluant des chantillons avec le tampon (solution tampon saline contenant de la BSA 9%) avant de faire le dosage. Mesur Attendu Echantillon % M/A (nmol/l) (nmol/l) A 83,9 A/2 41,0 42,0 98 A/4 20,8 21,0 99 A/8 13,1 10,5 125 B 83,9 B/2 43,5 42,0 104 B/4 23,1 21,0 110 B/8 10,7 10,5 102 C 104 C/2 45,9 52,0 88 C/4 22,5 26,0 87 C/8 14,1 13,0 108 Moyenne 102 Spcificit La spcificit de lantisrum a t tudie en ajoutant au srum des quantits connues de la substance analyser et en mesurant la raction croise pour 50 % de B/Bo. Substance analyser Raction croise 25-Hydroxyvitamine D3 100 % 25-Hydroxyvitamine D2 75 % 24,25-Dihydroxyvitamine D3 > 100 % Cholcalcifrol (D3) < 0,01 % Ergocalcifrol (D2) < 0,3 %

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References Bibliographie Literatur Riferimenti bibliografici Bibliografa 1. Reichel, H., Koeffler, H.P., Norman, A.W. The role of the vitamin D endocrine system in health and disease. N. Engl. J. Med. 320: 981-991. (1989) 2. Holick, M.F., Vitamin D: Photobiology, Metabolism, etc., In Primer on the Metabolic Bone Diseases and Disorders of Mineral Metabolism, American Society for Bone and Mineral Research., 3rd Ed. Lippincott-Raven, Philadelphia, 74-81. (1996). 3. Chapuy M-C, Preziosi P, Maamer M, et al. Prevalence of vitamin D insufficiency in an adult normal population. Osteoporos Int 1997;7: 439443. 4. Heaney, RP. Functional indices of vitamin D status and ramifications of vitamin D deficiency. Am J Clin Nutr 2004;80 (suppl):1706S-1709S. 5. Holick MF. Sunlight and vitamin D for bone health and prevention of autoimmune diseases, cancers, and cardiovascular disease. Am J Clin Nutr 2004; 80: 1678S - 1688S. 6. Webb AR, Kline L, Holick MF. Influence of season and latitude on the cutaneous synthesis of vitamin D3: exposure to winter sunlight in Boston and Edmonton will not promote vitamin D3 synthesis in human skin. J Clin Endocrinol Metab 1988;67: 373-378. 7. Holick MF, Matsuoka LY, Wortsman J. Age, vitamin D and solar ultraviolet. Lancet 1989;ii:1104-1105. 8. Matsuoka LY, Ide L, Wortsman J et al. Sunscreens suppress cutaneous vitamin D3 synthesis. J Clin Endocrinol Metab 1987;64: 1165-1168. 9. Salih FM. Effect of clothing varieties on solar photosynthesis of previtamin D3: an in vitro study. Photodermatol Photoimmunol Photomed 2004;20: 53-58. 10. Clemens TL, Henderson SL, Adams JS, Holick MF. Increased skin pigment reduces the capacity of skin to synthesize vitamin D3. Lancet 1982;9: 74-76. 11. National Osteoporosis Foundation. Prevention Vitamin D. http://www.nof.org/prevention/vitaminD.htm 12. KDOQI Clinical Practice Guidelines for Bone Metabolism and Disease in Children With Chronic Kidney Disease. http://www.kidney.org/PROFESSIONALS/kdoqi/ guidelines_pedbone/guide8.htm

Doc: AC-57PL-A Issue: 8 04 August 2009

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EXP

GB DE ES IT FR NL DK CZ SK GR PT HU SE PL GB DE ES IT FR NL DK CZ SK GR PT HU SE PL GB DE ES IT FR NL DK CZ SK GR PT HU SE PL

Use By Verwendbar bis Fecha de caducidad Utilizzare entro Utiliser jusque Houdbaar tot Holdbar til Pouiteln do Pouiten do Prazo de validade Felhasznlhat Anvnd fre Uy przed Catalogue number Bestellnummer Nmero de catlogo Numero di catalogo Rfrence du catalogue Catalogus nummer Katalognummer Katalogov slo Katalgov slo Referncia de catlogo Katalgusszm Katalognummer Numer katalogowy Contains sufficient for <n> tests Inhalt ausreichend fr <n> Prfungen Contenido suficiente para <n> ensayos Contenuto sufficiente per n saggi Contenu suffisant pour ntests Inhoud voldoende voor n testen Indeholder tilsttrkkeligt til n test Lze pout pro <n> test Obsah postauje na <n> stanoven Contedo suficiente para n ensaios A doboz tartalma <n> vizsglat elvgzshez elegend Rcker till n antal tester Wystarczy na wykonanie <n> testw

GB DE ES IT FR NL DK CZ SK GR PT HU SE PL GB DE ES IT FR NL DK CZ SK GR PT HU SE PL GB DE ES IT FR NL DK CZ SK GR PT HU SE PL

Batch code Chargenbezeichnung Cdigo de lote Codice del lotto Code du lot Lot nummer Lotnummer slo are slo are Cdigo do lote Sarzsszm Lot nummer Kod partii Manufacturer Hersteller Fabricante Fabbricante Fabricant Fabrikant Producent Vrobce Vrobca Fabricante Gyrt Tillverkare Producent In Vitro Diagnostic Medical Device In-Vitro-Diagnostikum Producto sanitario para diagnstico in vitro Dispositivo medico-diagnostico in vitro Dispositif mdical de diagnostic in vitro Medisch hulpmiddel voor in-vitro diagnostiek Medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik In Vitro diagnostick zdravotnick prostedek Zdravotncka pomocka in vitro In Vitro Dispositivo mdico para diagnstico in vitro In vitro diagnosztikum Medicintekniska produkter fr in vitro diagnostik Wyrb do diagnistyki In Vitro Consult Instructions for Use Gebrauchsanweisung beachten Consulte las instrucciones de uso Consultare le istruzioni per luso Consulter les instructions dutilisation Raadpleeg de gebruiksaanwijzing Se brugsanvisning Viz nvod k pouit Vi nvod na puitie Consulte as instrues de utilizao Nzze meg a Hasznlati utastst Se handhavandebeskrivningen Sprawd w instrukcji obsugi

REF

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Temperature limitation Temperaturbegrenzung Lmite de temperatura Limiti di temperatura Limites de temprature Temperatuurlimiet Temperaturbegrnsning Teplotn rozmez od do Teplotn rozmedzie od do Limites de temperatura Hmrsklettartomny Temperaturbegrnsning Przestrzega zakresu temperatury

GB DE ES IT FR NL DK CZ SK GR PT HU SE PL

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Procedure Summary Rsum du procd Zusammenfassung des Testablaufes Procedura Resumen del procedimiento

25 L CAL / CTRL / SPE + 1 mL 25-D BIOTIN SOLN 200 L MICROPLAT 02:00 @ 18-25C + 300 L WASHBUF SOLN X 3 + 200 L ENZYMCONJ 00:30 @ 18-25C + 300 L WASHBUF SOLN X 3 + 200 L SUBS 00:30 @ 18-25C + 100 L HCL 450nm
Immunodiagnostic Systems Ltd (IDS Ltd). UK Immunodiagnostic Systems Ltd (IDS Ltd), 10 Didcot Way, Boldon Business Park, Boldon, Tyne & Wear, NE35 9PD Tel: +44 (0) 191 519 0660 Fax: +44 (0) 191 519 0760 e-mail: info.uk@idsplc.com www.idsplc.com USA Immunodiagnostic Systems Inc (IDS Inc.), P.O. Box 17063, Fountain Hills, AZ 85269-7063 Tel: 480-836-7435 Fax: 480-836-7437 e-mail: info.us@idsplc.com www.idsplc.com Germany Immunodiagnostic Systems GmbH (IDS GmbH), Mainzer Landstrasse 49, 60329 Frankfurt am Main Tel: +49 (0) 69 3085-5025 Fax: +49 (0) 69 3085-5125 e-mail: info.de@idsplc.com www.idsplc.com France Immunodiagnostic Systems EURL (IDS EURL), 55 rue Sainte Anne, 75002 PARIS Tel: +33 (0)1 42 44 12 63 Fax: +33 (0)1 42 44 40 76 e-mail: info.fr@idsplc.com www.idsplc.com Scandinavia Immunodiagnostic Systems Nordic a/s (IDS Nordic a/s), Marielundvej 30, 2. Sal, 2730 Herlev, Denmark Tel:+45 44 84 0091 Fax:+45 44 84 0092 email: info.nordic@idsplc.com www.idsplc.com