Brucella (Brucella melitensis, abortus y suis) Rosa de Bengala (Antgeno Brcela Amortiguado) para el diagnostico de Brucelosis

Prueba de aglutinacin rpida en placa para la deteccin temprana de aglutininas especficas de Brucella (Brucella melitensis, abortus y suis). PRINCIPIO: Se utiliza un antgeno de Brucella abortus biotipo 1 (cepa 99S o cepa 1119-3) acidificado regulado y teido con Rosa de Bengala a un pH de 3.65 +/- 0.05 para la deteccin de aglutininas especficas de Brucella. Esta prueba puede ser utilizada para el diagnostico temprano.

PROCEDIMIENTO 1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo, controles y muestra de suero. 2. Coloque con ayuda del gotero (aproximadamente 30 l) una gota del antgeno Rosa de Bengala en cada uno de los circulitos. 3. Utilizando una pipeta automtica adicione 30 l de la muestra del paciente y mezcle ambas con la ayuda de su punta hasta que se encuentre totalmente homogneo (Usar una punta diferente para cada muestra). Repetir para c/ muestra y controles.

4. Agitar la placa con movimientos rotatorios por 4 minutos a 140 rpm.

5. Con ayuda del microscopio lea el resultado (observacin 5 x, 10 x).

RESULTADOS Leer exactamente a los 4 minutos tomados a partir de que se comenz a mezclar. Este es un tiempo lmite ptimo en el que se da un espacio para la observacin de ciertas aglutininas que se revelan lentamente y que de otra manera se pueden omitir. NO AGLUTINACIN Suero Negativo CUALQUIER CANTIDAD DE AGLUTINACIN- Presencia de anticuerpos especficos. Suero positivo

Resultado positivo de Brucella Se prosigue hacer las siguientes diluciones Muestra 40 30 20 10 5 R 40 30 30 30 30 Dilucin 1/80 1/160 1/320 1/640

SYPHILIS EIA II TOTAL ANTIBODY DETECCION DE ANTICUERPOS ANTI T. PALLIDUM EN SUERO O PLASMA HUMANOS. Los Kits de prueba de Syphilis EIA II Total Antibody usan tres antgenos recombinantes en una prueba sndwich para producir un ensayo que es de alta especificidad y sensibilidad. Los antgenos detectan IgG, IgM e IgA especficos del T. Pallidum, lo que permite detectar anticuerpos durante todas las etapas de la infeccin.

PRINCIPIO DEL TEST Los pocillos plsticos estn recubiertos con una mezcla de antgenos recombinantes 15kd, 17Kd, 47Kd del T.pallidum. Los anticuerpos especficos en muestra de suero o plasma se combinan con estos antgenos y con los mismos antgenos conjugados de la peroxidasa del rbano picante, cuando el conjugado se aade a un pocillo en el cual se ha incubado una muestra.

Una vez que el material no reaccionado ha sido retirado por medio de un lavado, la presencia de enzima unida que indica la presencia en la muestra de anticuerpos especficos se revela al cambiar el color de la mezcla sustrato/cromgeno. La intensidad del color se compara con la de los pocillos de control para determinar la presencia o ausencia de anticuerpos especficos.

CONTENIDO DEL KIT

R1 Microplaca: 12 tiras de 8
pocillos recubiertos con T. Pallidum rAg

R2 Solucin concentrada de trabajo (20X) R5 Conjugado listo para usarse

Azul rAg conjugado a la peroxidasa de rbano picante.

R6 Substrato Rosa

R3 Control negativo (humano) Amarillo R4 Control positivo (humano) Rojo R7 Solucin Stop H2SO4 - 0.5M

PROTOCOLO DE PRUEBA (Manual) Diluir solucin tampn de lavado en 1 a 20 con agua destilada o desionizada antes de usar

1/d = Vm/Vt
Despejando Vm = Vt/ (1/d) Vm = (1000ml)(1/20) Vd= 1000ml -50ml con Vd= 950 ml agua destilada.

Vm= 50 ml de solucion de lavado ; 1.- Deberan incluirse:

3 controles negativos y 2 positivos con cada lote de muestras a ensayarse. Trate los controles como si fuesen muestra del paciente. Aadir 50 l de muestra sin diluir, control negativo (3 veces) o control positivo (2 veces) a cada pocillo. Llenar los pocillos restantes con muestras de pacientes para c/d paciente una punta limpia y esteril.

2.- Incubacin del conjugado y muestra: Aadir 50 l de conjugado a cada pocillo. El conjugado se suple a la concentracin de trabajo. Incubar (tapado) a 37 C durante 30 minutos.

3.- Lavado: Lavar 5 veces con solucin amortiguadora a la concentracin de trabajo. Se recomienda un tiempo corto de remojo de unos 30 segundos para cada ciclo de lavado. Elimine el lquido excedente con ligeros golpecitos.

4.- Incubacin del sustrato: Aadir 50 l de sustrato/cromgeno a cada pocillo. Incubar a temperatura ambiente (TA) durante 30 minutos. Ya que el sustrato es sensible a la luz, se recomienda que se proteja de la luz durante dicha incubacin. En presencia de una muestra positiva la coloracin vira a azul.

5.- Paro del desarrollo del color. Aadir 50 l de la solucin de stop (H2SO4- 0.5 M) a cada pocillo. El color azul virar a amarillo.

6.- Lectura: Limpie cuidadosamente ela placa. Determine la densidad ptica a 450/(620-690nm) usando un lector de placas dentro de los 30 minutos posteriores al paro de la reaccin.

RESULTADOS

Construido a partir de la experiencia histrica virolgica de Bio-Rad, New Lav Blot I y New Lav Blot II son el estndar de oro para confirmar la seropositividad antiVIH y para identificar posibles reacciones no especficas por inmunotransferencia (Western Blot )