ENZIMAS 22. El sabor dulce del maz recin cosechado se debe al elevado nivel de azcar en los granos.

Los granos almacenados por vario das no son tan dulces, debido al que el 50% del azucare del maz es convertido en almidn al da siguiente de la cosecha. Para preservar la dulzura y la frescura del maz. Los granos son inmersos en agua hirviendo durante unos cuantos minutos (blanqueado) y luego enfriados en agua fra. El maz procesado de esta forma se almacena en congeladores manteniendo su sabor dulce. Cual es la base bioqumica de este procedimiento? 23. Para calcular la concentracin real de enzimas en una clula bacteriana, asuma que la clula contiene 100 enzimas diferentes en solucin en su citosol, que cada protena tiene un peso molecular de 100.000 y que todas las 1000 enzimas estn presentes en concentraciones iguales. Si se supone que la clula bacteriana es un cilindro (dimetro 1 m, altura 2 m). Si el cistosol (gravedad especfica= 1.20) es 20% protena soluble por peso, y la protena soluble consiste completamente de enzimas diferentes, calcule la concentracin molar promedio de cada enzima en esta clula hipottica. 24. La enzima ureasa incrementa la tasa de hidrlisis de urea a pH 8.0 y 20C por un factor de 10 14. Si una cantidad dada de ureasa puede hidrolizar completamente una cantidad de urea en 5 minutos y 20C a pH 8.0, que tiempo tomar esta cantidad de urea para ser hidrolizada bajo las mismas condiciones en ausencia de ureasa. 25. El sitio activo de un enzima usualmente consiste en un bolsillo sobre la superficie enzimtica alineado con las cadenas laterales de aminocidos necesarias para unir el sustrato y catalizar su transformacin qumica. La carboxipeptidasa, que remueve secuencialmente el aminocido carboxilo terminal consiste de una sola cadena de 307 aminocidos. Los dos grupos esencialmente catalticos en el centro activo estn proporcionados por Arg145 y Glu270. a) Si la carboxipetidasa fuera una a hlice perfecta que tan lejos deberan estar (en nanmetros) los residuos Arg145 y Glu270? b) Explique como es que esos dos aminocidos ubicados tan separadamente en la secuencia, pueden catalizar una reaccin que ocurre en un espacio de unas pocas dcimas de nanmetro? c) Si solo esos dos grupos catalticos estn involucrados en el mecanismos e hidrlisis, porqu es necesario para la enzima contener tan grande nmero de residuos de aminocidos? 26. La enzima muscular lactato deshidrogenasa cataliza la reaccin:
OH | + CH3 C COO + NADH + H CH3 C COO- + NAD+ | H Piruvato Lactato

NADH Y NAD+ son las formas reducida y oxidada de la coenzima NAD respectivamente. Las soluciones de NADH pero no NAD+, absorben luz a 340 nm. Esta propiedad se usa para determinar la concentracin de NADH en solucin midiendo espectrofotometricamente la cantidad de luz absorbida a 340 nm por la solucin. Explique como esas propiedades del ANADH se pueden usar para disear un ensayo cuantitativo para la lactato deshidrogenasa. [S] (M) 2.5x10-6 4x10-6 1x10-5 2x10-5 4x10-5 1x10-4 2x10-3 V (mo/min) 28 40 70 95 112 128 139 1x10-2 140

27. Aunque existe mtodos grficos para la determinacin precisa de los valores de KM y Vmax para una reaccin enzimtica, esos valores pueden estimarse rpidamente inspeccionando valores de V y de S. Calcule el valor aproximado de KM y Vmax para los datos obtenidos en una reaccin enzimtica.

28. Ecuacin de Michaelis-Menten

a) A que concentracin de sustrato una enzima que tiene una Kcat de 30s -1 y una K de 0.005M trabajar a un cuarto de su velocidad mxima. b) Determine la fraccin de Vmax que reencontrara en cada caso cuando S = 1/KM, 2KM y 10KM. S (mM) 1.5 2.0 3.0 4.0 8.0 16.0 Producto formado (mol/min) 0.21 0.24 0.28 0.33 0.40 0.45 29. Los siguientes datos experimentales se recogieron durante un estudio de la actividad cataltica de una peptidasa intestinal capaz de hidrolizar el pptido glicilglicina: glicilglicina + H2O 2 glicina Con estos datos, determine grficamente los valores de K M y Vmax para esta preparacin enzimtica y su sustrato.

30. La anhidrasa carbnica de los eritrocitos (M=30.000) se encuentra entre las enzimas mas activas conocidas. Ella cataliza la reaccin reversible de hidratacin de CO2: H2O+ CO2 H2CO3, La cual es importante en el transporte de CO2 desde los tejidos hacia los pulmones. a) Si 10 g de anhidrasa carbnica pura catalizan la hidratacin de 0.30 g de CO 2 en 1 min a 37C bajo condiciones ptimas, cual es el nmero de recambio (Kcat) de la anhidrasa carbnica (en unidades de min-1?) b) A partir de la respuesta anterior calcule la energa de activacin de la rehacan cabalizada en kJ/mol? c) Si la anhidrasa carbnica provee una tasa de realce de de la reaccin de 10 7, cual es la energa de activacin de la reaccin no catalizada? 31. Muchas enzimas son inhibidas irreversiblemente por iones metlicos pesados Tales como Hg 2+, Cu2+, o Ag+, que pueden reaccionar con grupos sulfhidrilo esenciales para formar mercptidos: Enz-SH + Ag+ Enz-S-Ag + H+ La afinidad de la plata por los grupos sulfhidrilo es tan grande que ese metal puede ser utilizado para titular cuantitativamente grupos SH. A 10 ml de una solucin que contiene 1 mg/ml de una enzima pura, se le aadi suficiente AgNO 3 para inactivar completamente la enzima. Se requiri un total de 0.342 mol de AgNO3. Calcule el peso molecular mnimo de la enzima. Porqu el valor obtenido mediante este clculo solo da el peso molecular mnimo? 32. Cuando soluciones enzimticas son calentadas, hay una perdida progresiva de la actividad cataltica con el tiempo. Esta prdida es el resultado del desplegamiento de la molcula de enzima nativa hacia una conformacin aleatoriamente plegada, debido al incremento en la energa trmica. Una solucin de l enzima hexocinasa incubada a 45C perdi el 50% de su actividad en 12 min, pero cuando la hexocinasa se incub a 45C en presencia de una gran concentracin de uno de sus sustratos, solo perdi en 3% de su actividad. Explique porqu la desnaturalizacin trmica de la hexocinasa se ve retardada en presencia de uno de sus sustratos. 33. El suero sanguneo humano contiene una clase de enzimas conocidas como fosfatasas cidas, las cuales hidrolizan steres de fosfatos biolgicos bajo condiciones cidas (pH 5.0):
OO| | R O P O - + H2O R OH + HO P O -

Las fosfatasas cidas son producidas por los eritrocitos, hgado, rin, bazo, y glndula prottica. La enzima de la glndula prosttica es clnicamente importante porque un incremento en su actividad en la sangre es un indicador de cncer de prstata. La fosfatasa de la glndula prosttica es inhibida fuertemente por el in tartrato, pero la fosfatasa de otros tejidos no lo son. Como esta informacin puede ser utilizada para desarrollar un procedimiento especfico para medir la actividad de la fosfatasa cida prosttica en le suero sanguneo humano? 34. La anhidrasa carbnica es fuertemente inhibida por el medicamento acetazolamida, que se usa como diurtico (incrementa la produccin de orina) y para tratar el glaucoma (reduce la presin intraocular excesivamente alta). La anhidrasa carbnica

=
O

juega un papel importante en esos y otros procesos secretorios, porque participa regulando el pH y el contenido de bicarbonato de varios fluidos biolgicos. La curva experimental de velocidad de reaccin (dada aqu como porcentaje de Vmax) contra [S] para la reaccin de la anhidrasa carbnica se ilustra en la curva superior de la siguiente grfica:
100

Sin inhibidor V(% de Vmax)

50

Cuando el experimento se repite en presencia de acetazolamida, se obtiene la curva inferior. Inspeccionando las dos curvas y nuestro conocimiento de las propiedades cinticas de los inhibidores enzimticos competitivos y no competitivos, determine la naturaleza de la inhibicin por acetazolamida. Explique.

Acetazolamida

10

100

[S]
100

35. La actividad enzimtica de la lisozima es ptima a pH 5.2 El sitio centro activo de la lisozima contiene do residuos de aminocidos esenciales para la catlisis: Glu35 y Asp52. Los valores de pK para las cadenas laterales de esos residuos son 5.9 y 4.5 respectivamente. Cual es el estado de ionizacin (protonado o desprotonado) para cada residuo al pH ptimo para la lisozima?. Como pueden explicar estos estados de ionizacin el perfil de actividad mostrado en la grfica para esta enzima?

Actividad (%de la m xima )

50

0 2 4 pH 6 8 10