MICROORGANISMOS UTILIZADOS EN LA

PRODUCCIN DE BIOPOLMEROS

POLIMEROS BACTERIANOS: BIOSINTESIS, MODIFICACIONES Y APLICACIONES

INTRODUCCION

Nuevos productos con aplicaciones industriales y mdicas. Louis Pasteur descubre el dextran como producto microbiano del vino

HISTORICAMENTE:

Van Tieghem identifica Leuconostoc mesenteriodes: formacin del dextran

En 1886: la celulosa es producida por bacterias (exopolisacridos) Primer polmero de reserva en cianobacterias: poliamida cianoficina Alrededor de 1920 se identifica la produccin de polyester polihuidroxibutirato por Bacillus megaterium Entre 1970 y 2000 las tecnicas de clonacin de genes y secuenciacin de ADN hacen posible la identificacin de los genes involucrados en al biosntesis. Ej: cyanophycin synthetase gene (cphA)58 Clusters de genes como el genoma de Pseudomonas aeruginosa Estos avances aun no han evidenciado por completo el papel funcional de algunos genes, los mecanismos de accin de enzimas claves (sintasas sintetasas y polimerasas) y sus funciones de copolimerizacin

INTRODUCCION

Las bacterias sintetizan solo unos cuantos polmeros intracelulares sin embargo las posibilidades de sntesis extracelular es extensa Existen cuatro clases principales de polmeros producidos por bacterias:

POLISACARIDOS POLIESTERES POLIAMIDAS POLIANHIDROS INORGANICOS (POLIFOSFATOS)

FUNCIONES:
RESERVA

ESTRUCTURAS DE PROTECCIN

Estos polmeros se producen como consecuencia de un estmulo externo de lo cul depende la composicin , propiedades y el control de la biosntesis

PRODUCCION INDUSTRIAL

Producidos por fermentacin, a nivel comercial van de media a gran escala:

2,000 Ton Dextran

100,000 Ton Xantano

100,000 Polister

Estos biopolmeros, cuando se exponen a la presencia de flora microbiana, son completamente degradados y mineralizados a H2O y CO2 por medio de enzimas depolimerasas e hidrolasas

Debido a su composicin natural no txica, son considerados inertemente-biocompatibles

ESTRUCTURAS QUIMICAS REPRESENTATIVAS DE

POLIMEROS BACTERIANOS

CLASES DE POLIMEROS BACTERIANOS Y SUS CARACTERISTICAS

CLASES DE POLIMEROS BACTERIANOS Y SUS CARACTERISTICAS

CLASES DE POLIMEROS BACTERIANOS Y SUS CARACTERISTICAS

VIA DE BIOSINTESIS DE POLIMEROS BACTERIANOS

ORGANIZACIN GENTICA DE GENES Y OPERONES

CLAVE DE LA BIOSNTESIS

ESTRATEGIAS DE PRODUCCIN
DE BIOPOLIMEROS MODIFICADOS PARA MEJORAR SUS

PROPIEDADES

In Vivo: Cepas de produccin con rendimiento mejorado

In vitro: a) Sintesis in vitro usando enzimas o enzimas modificadas expuestas para seleccionar sustrato b) Biopolmeros aislados pueden ser enriquecidos por exposicin a enzimas o modificaciones qumias

MODIFICACION DE BIOPOLIMEROS Y SU IMPACTO EN LAS PROPIEDADES INDUSTRIALES

BIOPOLIMEROS HECHOS A LA MEDIDA

La secuenciacin del genoma, la genmica funcional, la clonacin y la caracterizacin de genes de la biosntesis han llevado al descubrimiento de nuevos polmeros bacterianos. La produccin recombinante de polmeros menos complejos como PHA, CGP , HA y PGA en hospederos heterlogos no productores con mayor poder de desarrollo constituyen la innovacin en la industria Ejemplo: Produccin a gran escala de PHA por fermentacin de E. coli recombinante E. coli produce el Polihidroxibutirato (PHB) a $0.0025 dlares gramo que es 5 a 10 veces menos costoso que la produccin derivada de petrleo

RALSONIA EUTROPHA

Utilizada en la produccin de PHA compuesta de:

(R)-3-hydroxybutyrate (R)-3-hydroxyvalerate y/o (R)-3-hydroxyhexanoate Estos polmeros muestran propiedades de elasticidad y brillo que se buscan en las producciones industriales

E. COLI
Utilizada en la produccin de polmeros no-naturales: Politioesteres y polisteres basados en lactato Produccin directa de cido polilctico mediante fermentacin de cido lctico y la polimerizacin qumica

La sntesis in vitro del bioplstico PHB requiere de un precursor, (R)-3-hydroxybutyryl-CoA y ser purificado por PHB sintasa: Costo = 286,000 por gramo Produccin de PHB bacteriano en grandes escalas se estima en $0.0025 por gramo, costo que es 5 a 10 veces menor que la va de petrleo.

GRANULOS DE PHA
Formados al interior de las clulas recombinantes como micro o nano gotas a las cules se pegan protenas Aplicaciones en bioseparacines de alta afinidad, inmobilizacin de enzimas, liberacin de antgenos

LOS CUELLOS DE BOTELLA EN LA PRODUCCIN

INDUSTRIAL

El rendimiento es proporcional a la fuente de carbono requerida y por lo tanto de ello depende el costo, as como del uso al que este destinado En el caso de los polmeros intracelulares como PHA se requiere lisis y consecuentemente numerosos procesos de separacin Costo beneficio si el uso es mdico Dependiendo de la escala de produccin, la inversin es: 1 milln USD / kg a 10-100 millones por tonelada

El capital de equipamiento esta determinado por:

Volumen de cultivo requerido (dimensiones del biorreactor) Procesos de transformacin

Separacin de biomasa y sobrenadante generalmente por filtracin Procesos de separacin especfica (3micro o nanofiltracin, extraccin por solventes, precipitacin, cromatografa o cristalizacin)

Proceso biotecnolgico contra vas qumicas:

Reduccin en capital de equipamiento Reduccin en costos de operacin Resduos de menor impacto y costo No se utilizan catalizadores metlicos txicos

MODELING AND OPTIMIZATION OF BIOPOLYMER (POLYHYDROXYALKANOATES) PRODUCTION FROM ICE CREAM RESIDUE BY NOVEL STATISTICAL EXPERIMENTAL DESIGN (APPLIED BIOCHEMISTRY AND BIOTECHNOLOGY VOL. 133, 2006). Bacterial Strain and Stock Culture: Ralstonia eutropha (Gram negativa) Fuente de carbono: Helado pretratado por centrifugacin para eliminar particulado Mtodo gravimtrico para medir PHA

BIOSNTESIS MICROBIANA DE ACIDO POLI GLUTMICO Y APLICACIONES EN INDUSTRIA FARMACUTICA, BIOMEDICA Y

ALIMENTOS

EL cido Poliglutmico (PGA) es usado en su forma libre, hidrogel o nanopartculas Generalmente se utilizan cepas de Bacillus subtilis que utilizan como substrato Acido glutmico D o L en la sntesis de -PGA

Bacillus anthracis produce poli--D-PGA en altas concentraciones de CO2 para formar una cpsula alrededor de la clula PGA es secretado al medio como un polmero libre en la fase logartmica tarda y estacionaria temprana.

Limitantes de esta produccin?

SINTESIS DE PGA EN BACILLUS

RECUPERACION Y ANALISIS DE PGA

1. 2. 3.

PRECIPITACION: Por formacin de complejos PRECIPITACION: Reduccin de actividad de agua (Adicin de Etanol) FILTRACION En todos los casos primero se remueve la biomasa por centrifugacin o filtracin

Forma complejos con: Cu+2, Al+3, Cr +3 y Fe+3

Para aplicaciones industriales es deseable un peso molecular mayor a 106 kDa Se utiliza como suplemento, fertilizante, jugos y otras bebidas, ingrediente de panes y pastas Conservador de enzimas, microorganismos y alimentos debido a sus ropiedades anticongelantes Se utiliza como hidrogel para biosensores, diagnstico, bioseparaciones, liberacin de frmacos

OTROS USOS
Terapia gnica: Como vectores para transportar el ADN y protegerlo de Dnasas Vacunas: Anticuerpos anti -D-PGA como vacuna contra el ntraz Ingeniera de tejidos: Bloques de construccin como soporte para el crecimiento celular Sustituto de heparina en clulas de mamfero Adhesivo mdico

PGA es utilizado en la liberacin de paclitaxel (Taxol) como droga conjugada

 Cepa: E. coli K4 serotype O5:K4:H4 Polisacrido capsular idntico a la condroitina obtenida de tejidos animales

La concentracin de carbono afecta la produccin del polisacrido

La concentracin de nitrgeno es limitante en la produccin del polisacrido

La estrategia de lote alimentado genera un mximo rendimiento de 1.4

g/L del polisacrido

Nueva cepa de Enterobacter produce por excrecin un biopolimero de poliglucosamina Cultivo por lote alimentado determinado por los cambios de pH Alimentado por soluciones de acetato para mantener el cultivo a pH 8 Rendimiento de 1.15 g/L de poliglucosamina

Produccin biotecnolgica de protenas recombinantes de seda de araa La informacin de la protena recombinante es insertada en una bacteria hospedera, La estrategia de produccin es utilizada por la empresa AMSilk GmbH (Martinsried, Germany) Producida por fermentacin y las protenas de seda son sometidas a extrusin para darle la forma comercial.

Exopolisacrido floculante producido por Azotobacter indicus ATCC 9540 strain Estabilidad a alta temperatura Alta eficiencia en la floculacin de efluentes contaminados Reduccin en la DBO(3880%), DQO(3779%) y slidos suspendidos (4168%).