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XI CONGRESO NACIONAL DE BIOTECNOLOGA Y BIOINGENIERA

CARACTERIZACIN DE LA BACTERIOCINA PRODUCIDA POR LACTOCOCCUS LACTIS UQ2 Y SU EFECTO SOBRE BIOPELCULAS DE LISTERIA MONOCYTOGENES
Blanca E. Garca Almendrez1, Isaac K.O. Cann2, Scott E. Martin2 Carlos Regalado1, Isabel Guerrero Legarreta3. 1 DIPA, PROPAC, Univ. Aut. de Quertaro, C.U., Cerro de las Campanas S/N Quertaro, 76010, Qro. Fax (442) 1921304. 2University of Illinois at Urbana-Champaign, 1207 West Gregory Drive, Urbana, IL 61801, EUA. 3UAMIztapalapa, Av. San Rafael Atlixco 186, Col. Vicentina, Iztapalapa, Mxico, 09340 D.F. Fax: (55)58044712 blancag@uaq.mx; meat@xanum.uam.mx
Palabras clave: bacteriocinas, biopelculas, Listeria monocytogenes Introduccin. La presencia de biopelculas en el ambiente del procesamiento de alimentos puede incrementar el riesgo de contaminacin microbiana de los alimentos procesados, reduciendo su vida de anaquel y posiblemente ser la causa de enfermedades transmitidas por alimentos (1). Listeria monocytogenes en biopelculas ha mostrado mayor resistencia a los agentes sanitizantes que las clulas libres. Varios reportes muestran la eficiencia de las bacterias cido lcticas o sus metabolitos para controlar la formacin de biopelculas (2). El objetivo del presente trabajo fue caracterizar la bacteriocina producida por Lactococcus lactis UQ2 mediante mtodos moleculares y estudiar su efecto sobre biopelculas de L. monocytogenes. Metodologa. Se utiliz el modelo reportado por Moltz y Martin (3) para el desarrollo de las biopelculas de L. monocytogenes en placas de acero inoxidable. Se estudi el efecto de L. lactis UQ2 y del extracto libre de clulas con actividad antimicrobiana en diversas concentraciones y temperaturas. Se disearon oligonucletidos con base en bacteriocinas conocidas y se efectuaron reacciones de PCR. Los productos de esta reaccin fueron clonados en un vector, el cual fue posteriormente secuenciado. Resultados y discusin. Placas de acero inoxidable (No.4) de 6.5 cm2 de rea se utilizaron en el desarrollo de las biopelculas de L. monocytogenes Scott A (serotipo 4b) y fueron inoculadas con 100 L de una suspensin (A600~ 1.0). Se utiliz frotamiento para remover las clulas adheridas a las placas. Rplicas por cuadriplicado, en cuatro grupos de biopelculas desarrolladas en las placas, se compararon para determinar la eficiencia de Lactococcus lactis UQ2 o su

Fig. 1. Gel de agarosa (1%), DNA plasmdico de transformantes con inserto, despus de digestin con enzimas de restriccin.

bacteriocina a 20 y 37C. Los productos de PCR obtenidos se clonaron en el vector pGEM-T usando clulas competentes de E. coli JM109. El escrutinio de transformantes se realiz por digestin con las enzimas de restriccin Nde 1 y Xho 1. La secuencia obtenida se compar usando el programa BLAST del Centro Nacional de Informacin en Biotecnologa (NCBI).
Cuadro 1. Efecto del extracto libre de clulas en la reduccin de las biopelculas de L. monocytogenes Scott A, a diferentes temperaturas Concentracin 1.4 g/L 0.5g/L Control 3x107 1.5x107 20 C 2x103 3x105 37 C 1x103 2x105

Conclusiones. El efecto de la bacteriocina sobre las biopelculas de L. monocytogenes fue dependiente de la concentracin obtenindose un mximo de reduccin de 4 log determinado por cuenta en placa de las clulas adheridas. Sin embargo, cuando se inocul L. lactis se observ una inhibicion completa (<10 ufc/mL) del patgeno posiblemente debido al efecto combinado de los otros agentes antimicrobianos producidos por esta cepa. La reaccin en cadena de la polimerasa indic la amplificacin de un producto que fue clonado y secuenciado. Sin embargo, la caracterizacin molecular de la bacteriocina producida por L. lactis UQ2 debe complementarse con la caracterizacin bioqumica mediante purificacin a homogeneidad del agente antimicrobiano natural. Agradecimiento. Al Programa TIES financiado por USAID por estancia para BEGA. Bibliografa