COLESTEROL 250

FINALIDADE Sistema para determinao enzimtica do colesterol total no soro, plasma e outros lquidos biolgicos. Somente para uso diagnstico in vitro.

BIOQUMICA CLNICA

Protocolos de automao encontram-se disponveis no site Doles ou atravs do Servio de Atendimento ao Consumidor.

EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESSRIOS NO FORNECIDOS Espectrofotmetro ou fotocolormetro capaz de PRINCPIO medir a absorvncia em 510nm ou filtro verde. O colesterol no soro quantificado atravs das Tubos de ensaio. seguintes reaes enzimticas: Pipetas graduadas. 1. steres de colesterol col. esterase colesterol livre + cidos graxos Pipeta semiautomtica 10mL. Ponteiras descartveis. gua deionizada ou destilada. 2. Colesterol + O2 col. oxidase colesterona + H2O2 livre Banho maria (370C). Cronmetro. Peroxidase Frasco mbar com capacidade volumtrica 3. 2H2O2 + 4 Aminoantipirina + p-Hidroxibenzoato para 65mL. Proveta com capacidade de 65mL. 4-Antipirilquinonimina + 4 H O
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O produto formado pela oxidao da 4-Aminoantipirina (4-Antipirilquinonimina) de colorao avermelhada e sua intensidade, diretamente proporcional concentrao de colesterol no soro. A cor vermelha, formada pela reao, medida em espectrofotmetro ou fotocolormetro, com absoro mxima em 510nm.

PARTICULARIDADES DO SISTEMA Os mtodos de eleio para dosagem do colesterol so os enzimticos nos quais as interferncias so praticamente nulas. O reagente Doles para dosagem enzimtica do colesterol apresenta-se em p e sua reconstituio feita pela adio do contedo de um frasco a 65mL de gua. Ausncia de CUIDADOS E PRECAUES COM O USO DOS fenol (custico) no reagente estende a sua REAGENTES estabilidade. Todos os reagentes so somente para uso diagnstico in vitro. Seu manuseio deve ser cuidadoso, evitando-se contato com pele e REAGENTES Tampo/enzima: cada frasco contm 1,12g de mucosas. Em caso de contaminao acidental, lavar a rea afetada em gua corrente. O tampo enzima em p. descarte do material utilizado dever ser feito Surfactante: soluo de Triton X-100. Soluo padro 200mg/dL: soluo aquosa obedecendo-se aos critrios de biossegurana estabelecidos pelo laboratrio, de acordo com estabilizada de colesterol. as normas locais, estaduais ou federais. APRESENTAO Tampo / enzimas Surfactante Soluo padro 200mg/dL NMERO DE TESTES Manual - 260 testes Automtico - 700 testes 4 x 1,12g Irritante 1 x 3 mL 1 x 3 mL AMOSTRA Soro ou plasma (heparina) isentos de hemlise. Aps jejum de 12 a 16 horas, o sangue colhido com o mnimo de estase possvel. O soro ou plasma devem ser separados, no mximo, duas horas aps a coleta. Quando refrigerada
Observar a simbologia constante nos rtulos do produto:

ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Tampo/enzima: armazenar temperatura de 2-8oC. Estvel na forma liofilizada at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. Surfactante: armazenar temperatura de 2-30 oC. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. Soluo padro 200mg/dL: armazenar temperatura de 2-8 oC. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. Reagente de uso: armazenar temperatura de 2-8oC. Estvel por 45 dias aps a reconstituio, obedecidas as condies de uso.

SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)

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(2-8oC), a amostra se conserva por 7 dias. Se mantida a 10oC negativos, conserva-se por 3 meses. O uso de anticoagulantes como: citrato, EDTA e oxalato, provoca resultados ligeiramente diminudos. Todas as amostras biolgicas devem ser consideradas como potencialmente infectantes. PROCEDIMENTO TCNICO Preparo do reagente para uso: Em um frasco limpo, cor mbar, adicionar 65mL de gua destilada e todo p de um frasco tampo/enzimas. Agitar levemente por inverso at dissolver o p e em seguida acrescentar 5 gotas do surfactante. O reagente de uso, aps o preparo, permanece estvel por cerca de 45 dias sob refrigerao. Identificar 3 tubos de ensaio com B (branco), T (teste) e P (padro). Proceder como segue: B
Reagente de cor Soluo padro Amostra 1,0mL - -

A curva de calibrao demonstra a linearidade da reao at uma determinada concentrao, na qual pode ser determinado um fator de calibrao (F), de acordo com a Lei de Beer. A reao linear entre 0 e 500mg/dL (ver curva acima). Obtendo-se valores mais elevados, dilui-se a amostra com soluo fisiolgica e procede-se nova dosagem. Multiplicar o valor encontrado pelo fator de diluio. O kit de Colesterol 250 Doles possui padro no intervalo de linearidade da metodologia adotada. O laboratrio deve realizar o ensaio com o padro que acompanha o kit e calcular seu fator de calibrao (F), de acordo com o exemplo abaixo. O fator dever ser refeito periodicamente e a cada lote do produto. Os padres utilizados na montagem da curva de calibrao foram rastreados contra Cholesterol Calibrator, cat. No C 7921 de Sigma Chemical Company e certificado por CDC e NCEP. CLCULOS absorvncia teste Colesterol (mg/dL) = x 200 absorvncia padro Exemplo: Padro:0,360 Teste: 0,280

T
1,0mL - 10mL

P
1,0mL 10mL -

Misturar por agitao e incubar por 10 minutos, em banho maria, a 37oC. Retirar do banho maria e ler as absorvncias em espectrofotmetro ou fotocolormetro, entre 490 a 510nm, zerando o aparelho com o branco. A cor desenvolvida permanece estvel por 60 minutos. CURVA DE CALIBRAO
Padro Absorvncia Conc. (mg/dL)

0,280 Colesterol (mg/dL) = x 200 = 155,5mg/dL 0,360 Como a reao corada segue estritamente a lei de Beer, basta que se determine um fator (F) para clculo dos resultados. 200 Fator (F) = absorvncia padro Colesterol (mg/dL) = absorvncia teste x F

1 2 3 4 5 6 7

0.000 0.180 0.360 0.452 0.722 0.895 0.930

0 100 200 250 400 500 600

Para a determinao do fator, recomenda-se dosar em triplicata o padro, ler as absorvncias e tirar a mdia aritmtica das mesmas. Exemplo: Padro: 0,360, 0,359, 0,361 0,360 + 0,359 + 0,361 Mdia aritmtica = = 0,360 3 200 Fator (F) = = 555,55 0,360 Leitura do teste: 0,280 Colesterol (mg/dL) = 0,280 x 555,55 = 155,55

Obs.: No utilizar esta curva para determinar o resultado de seu ensaio. A curva de calibrao a representao grfica da relao entre os valores das absorvncias com os valores das concentraes de um conjunto de solues padro.

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EXPRESSO DOS RESULTADOS EM UNIDADE S.I. Colesterol mmol/L = colesterol mg/dL x 0,02586 LIMITAES DO SISTEMA Para se obter timo desempenho do sistema, necessrio que o procedimento tcnico seja seguido conforme instrues de uso. CONTROLE DE QUALIDADE DO SISTEMA 1.A limpeza e a secagem adequada do material a ser utilizado so de fundamental importncia para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. 2.A gua utilizada na limpeza do material, no preparo dos reagentes e na dosagem, deve ser de boa qualidade. 3.Colunas deionizadoras saturadas liberam ons diversos, aminas e agentes oxidantes, que deterioram os reagentes. 4.As pipetagens devem ser precisas. 5.O nvel da gua do banho maria deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio e a temperatura (37oC), rigorosamente observada. 6.O uso de soro controle de referncia deve ser uma prtica rotineira do laboratrio. Recomenda-se utilizar um soro controle com valor na faixa de normalidade (soro controle N - Doles) e outro soro controle de valor elevado (soro controle P - Doles). VALORES DE REFERNCIA recomendado que cada laboratrio estabelea sua prpria faixa de valores de referncia na populao atendida. Em termos estatsticos, na populao brasileira adulta, em ambos os sexos, os nveis de colesterol situam-se na faixa de 150-240mg/dL. O colesterol e suas fraes so componentes lipdicos de maior importncia na evoluo do quadro de aterognese. Estudos mostram relao entre o aumento da incidncia de doena coronria isqumica (DCI) e o aumento da taxa de colesterol sanguneo, determinando ento os grupos de risco. Como referncia, d-se valor no ao dado estatstico, mas sim aos nveis de colesterol srico que definam prognsticos:

Desejvel Limtrofe Alto risco (DCI)

Colesterol mg/dL < 200 200 - 239 > 240

SIGNIFICADO CLNICO Aterosclerose um fenmeno degenerativo que compromete as artrias de grande e mdio calibre de nosso organismo. Inicia-se precocemente, tendo papel importante na sua evoluo, determinados fatores raciais e principalmente, alimentares. Sua expresso anatmica a diminuio da luz vascular com srias consequncias quando as leses se localizam nas artrias cerebrais ou coronarianas. Grande quantidade de lipdeos, com predominncia de colesterol, esto presentes nas leses. Estudos de Framinghan mostram uma correlao direta entre os nveis sanguneos de colesterol e as leses aterosclerticas. O colesterol tem papel importante na patognese da doena coronariana isqumica (DCI). O National Cholesterol Education Program(NCEP) advoga os seguintes valores referenciais para o colesterol sanguneo em adultos com mais de 20 anos: Colesterol (mg/dL) Desejvel Limtrofe Alto risco/DCI < 200 200-239 > 240

Aumentos secundrios do colesterol so encontrados em: hipotiroidismo, diabete no controlada, sndrome nefrtica (glomerulonefrite crnica membranosa) e cirrose biliar. Por vezes, ocorrem aumentos discretos na gravidez. Hipocolesterolemia pode ser detectada nos estados de desnutrio, hipertiroidismo, anemia perniciosa e doenas hepticas que evoluam com quadro de insuficincia funcional do rgo. CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO Foram realizados 42 testes em amostras cujos teores de colesterol situavam-se no intervalo de 115 a 418mg/dL. Esses ensaios foram realizados em paralelo com uma metodologia de referncia. A comparao do kit de Colesterol 250 Doles (Y) com a metodologia mencionada (X) deu origem seguinte equao de regresso linear: Y= 7,36 + 0,979X, sendo o coeficiente de correlao 0,98. Testes mostram uma recuperao de 99 2,5%. O erro da mdia foi de 1,08%.

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Repetitividade: foram realizadas 20 dosagens sucessivas, com 3 amostras, obtendo-se os seguintes resultados:

Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3 Concentrao (mg/dL) 110,39

concentraes anormalmente elevadas, no interferem na determinao do colesterol total pelo mtodo enzimtico. BIBLIOGRAFIA CONSULTADA Trinder. P.: Ann: Clin.biochem., 6,24; l969. D.Braham e P. Trinder: Analyst 97; 1972. Allain,C.C.; Poon, L.S.: Clin. chem. 20:470; 1974. Pesce, A.J.; Kaplan, L.A.: Methods clinical chemistry, 1156-1178, 1987. Pagana K.D.: Mosbys diagnostic and laboratory test reference, 190-192, 1992. Cockayne, S; Anderson S.C.: Clinical chemistry: concepts and applications, 173 174, 1993. Tibrcio, H.M.: Controle interno da qualidade analtica, 1aed. maro/1995. Henry, J.B.: Clinical diagnosis and management by laboratory methods, 19a ed, 214-215, 1996. Doles: dados de arquivo. TERMOS E CONDIES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO As garantias do fabricante ao consumidor seguem estritamente as relacionadas na Lei n o 8.078, de 11 de setembro de 1.990 - Cdigo de Defesa do Consumidor. Os reagentes que compem este sistema para diagnstico so garantidos na sua performance, reprodutibilidade e qualidade at a data de vencimento. Os produtos que apresentarem problemas tcnicos comprovados sero substitudos, sem nus para o consumidor. Doles Reag. Equip. para Laboratrios Ltda. CNPJ: 01.085.513/0001-05 Rodovia BR 153, Km 493, Lt.07 Chcara Retiro, Conjunto Palmares. CEP: 74775-027 Goinia - GO Brasil e-mail: doles@doles.com.br M.S.: no 10231810004 Reviso: 19 (06/2010)

210,35 2,02 0,96

381,32 4,37 1,15

Desvio padro Coeficiente de Variao (%)

1,52 1,38

Reprodutibilidade : foram realizadas 20 dosagens, durante 20 dias consecutivos, obtendo-se os seguintes resultados:

Amostra 1 Amostra 2 Amostra 3 Concentrao (mg/dL) 112,24

223,56 2,48 1,11

360,36 4,06 1,13

Desvio padro Coeficiente de Variao (%)

1,81 1,61

Especificidade: a presente metodologia mais especfica que os mtodos qumicos, estando sujeita a raras substncias interferentes, pois a colesterol oxidase pode reagir com outros esteris. Os mtodos enzimticos so mtodos de referncia e de primeira escolha para determinao do colesterol total, com boa preciso e coeficientes de variao entre 1% e 2%. Sensibilidade: a absorvncia encontrada, de 0,002, corresponde a 1,0mg/dL de concentrao de colesterol, quando medida em espectrofotmetro, em 510nm. A sensibilidade do sistema est diretamente relacionada com a do aparelho utilizado no laboratrio. Diluio da matriz: estudos sucessivos de diluio da matriz mostraram que no h interferncia na sensibilidade diagnstica da presente metodologia enzimtica. Substncias interferentes: substncias redutoras, como cido Ascrbico e Bilirrubina, podem interferir na determinao do colesterol, pois os mesmos consomem o perxido de hidrognio, produzindo resultados falsos. Amostras turvas, que contenham triglicrides elevados, podem interferir com a presente metodologia. A presena de cido rico em

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