INFORME DE PRCTICAS

VIROLOGIA

AISLAMIENTO DE BACTERIFAGOS

I.

INTRODUCCION: Un bacterifago o fago es, ante todo, un parsito bacteriano. Un fago

puede persistir por si mismo pero no es capaz de crecer ni de reproducirse excepto dentro de una clula bacteriana.

La mayora de los fagos poseen genes que codifican para una variedad de protenas, sin embargo todos los fagos conocidos usan de la clula husped los ribosomas, factores para sntesis de protenas aminocidos y sistemas generadores de energa. El hecho de que utilice el sistema generador de energa del husped indica que un fago slo puede crecer en una bacteria metablicamente activa.

Estos problemas se resuelven de una variedad de formas, de acuerdo a las diferentes especies de fagos. Todos estas especies tienen ciertas caractersticas en comn pero tambin diferencias en detalle muestran los varios caminos en los cuales las funciones biolgicas especficas pueden llevarse a cabo.

Una observacin importante es el grado en el cual una partcula fgica individual usa una parte de la maquinaria de la clula. Algunas especies fgicas tienen menos de 10 genes y usan casi todas las funciones celulares, mientras que otras tienen de 30 a 50 genes y son menos dependientes de la clula husped.

El ciclo de vida de un fago puede ser ltico o lisognico: Un fago en el ciclo ltico convierte una clula infectada en una fbrica de fagos y se producen muchos fagos. Un fago capaz de producir solamente el ciclo ltico se denomina virulento. En el ciclo lisognico no se producen partculas fgicas, el DNA

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fgico normalmente llega a formar parte del cromosoma bacteriano (profgo). A este tipo de fago se le llama temperado.

La primera purificacin de un virus fue lograda por Max Schlesinger en 1933 utilizando una tcnica conocida como centrifugacin diferencial, la cual se basa en el hecho de que en un tubo de ensayo sometido a la accin de una fuerza centrfuga las partculas ms pesadas sedimentan a menor velocidad que las partculas ligeras. De esta manera es posible separar los fagos de los restos de las clulas bacterianas.

II.

OBJETIVO Aislar bacterifagos de una cepa de P. auriginosa Aprender la tcnica de aislamiento de bacterifagos

III.

MATERIAL: a. Material biolgico Cepa bacteriana (E. coli, Pseudomona auriginosa) para la cual nuestro grupo utilizo Pseudomanas auriginosa. Agua residual o servida (en nuestro caso se us agua servida del Dren 4000 de Santa Rosa). b. Material de laboratorio Medio de cultivo : CDC ( caldo doble concentrado) Caldo Triptosa Agar Triptosa papel filtro Filtro bacteriolgico (membrana)

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Viales, placas, pipetas, tubos, tubos para centrifuga, Asas bacteriolgicas. Mechero Hisopo Centrfuga Bomba al vacio IV. PROCEDIMIENTO: 1. En un frasco o matraz estril colocamos 50 ml de caldo doble concentrado (CDC). 2. Luego sombramos la cepa de P. auriginosa, y se dejamos 4 horas en la estufa a 35-37C. 3. Agregar 50 ml de agua servidas (previamente pasadas por un papel filtro). 4. Incubar durante 18 horas a 37C. 5. Centrifugamos a 4.500 durante 20 minutos. 6. El sobrenadante lo filtramos a travs de un filtro bacteriolgico (el resultado se recibe en un frasco estril). 7. Para evitar la contaminacin se reparti en varios viales estriles conteniendo cada uno 1ml del filtrado.

Para la comprobacin de fagos 1. En una placa con Agar Triptosa sembramos con la ayuda de un hisopo estril, la cepa de Pseudomonas auriginosa previamente sembrado unas 4 horas antes. 2. Despus se coloco en la placa, 2 gotas del filtrado sin hacer estriado alguno. 3. Dejar incubar 18 a 24 horas a 35-37C.

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Se siembra la cepa

Incubar por 8 horas a 0 35-37 C.

Medio CDC

50 ml de agua servidas (previamente pasadas por un papel filtro) Incubar por 18 horas a 0 35-37 C.

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V.

RESULTADOS: Se puede observar la calva de gran amplitud (la cual abarca casi toda la placa) con lo que se demuestra la presencia del bacterifago, lisando a las bacterias En crecimiento.

VI.

CONCLUSIN: Se logro cumplir el objetivo de la prctica, ya que segn el resultado obtenido, se muestra claramente que se logro aislar bacterifago de P. auriginosa, ya que en la placa se pueden observar claramente las calvas (zonas claras por la lisis de la clula bacteriana), prueba de la presencia de los bacteriofagos.

VII.

RECOMENDACIONES Para tener xito en este tipo de prcticas se recomienda trabajar con mucha asepsia, orden y exactitud. Evitar al mximo los contaminantes durante todo el trabajo, especialmente en el filtrado.

VIII.

REFERENCIAS

ACTON, J. (1967). Virologa. Editorial Interamericana. Mxico D.F. MADIGAN M. y J. PARKER (1997) Brock biologa de los

microorganismos. 10ma Edicin. Editorial Mc Graw Hill. Mexico D.F. http://www.scribd.com/doc/6850630/Virologia-Practica-02-Aislamientode-bacteriofagos