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TIPOS DE MICROSCPIOS

Microscpio ptico (Luz): um instrumento usado para ampliar, com uma srie de lentes, estruturas pequenas impossveis de visualizar a olho nu. constitudo por um componente mecnico que suporta e permite controlar um componente ptico que amplia as imagens. No microscpio tico, a luz que chega aos nossos olhos para formar a imagem, atravessa primeiro o objeto em estudo. Por isto, o material a ser observado no pode ser opaco. Muitas vezes, para se obter material biolgico translcido o suficiente para ser bem observado ao microscpio, preciso preparar

convenientemente o material que quer estudar. Para isto so feitos cortes muitos finos, de preferncia com uma mquina semelhante a um fatiador de presunto, chamada micrtomo. O material a ser cortado recebe um tratamento de desidratao e incluso em parafina que facilita o manuseio e permite que sejam cortadas fatias muito finas. Microscpio de Fluorescncia Comum: Certas substncias gozam da propriedade de emitir luz quando excitadas por radiaes de certos comprimentos de ondas (normalmente ultravioleta), podendo combinar-se a certas substancias presentes nas clulas permitindo a localizao de determinadas estruturas. A aplicao destas substncias como corantes esto hoje, esto fortemente ligados com mtodos imunocitoqumicos, os quais permitem localizar e quantificar o caminho percorrido de molculas especficas dentro do tecido em questo. Exemplo quando se injeta no tecido animal antgeno com colorao inflorescente, este se ligar no rgo em questo ao seu anticorpo especfico, assim o local de ao de onde se encontra o anticorpo d para ser encontrado. A tcnica usa agentes qumicos que emitem luz visvel que pode ser verde, laranjada ou vermelho. Uma vantagem da microscopia de fluorescncia que podem ser aplicados a clulas vivas para se determinar a concentrao intracelular de ons de Ca+ e H+ podendo ser utilizado como forma de monitoria do pH de clulas vivas. Microscpio de Fluorescncia Confocal: No microscpio confocal, a iluminao feita por um feixe delgado de raios laser, que varre o corte iluminado, ponto por ponto, em determinado ponto da clula,

realizando um verdadeiro corte ptico. A imagem formada exclusivamente pelas estruturas que esto no plano de varredura, sem que os componentes celulares situados em outros planos contribuam para a formao da imagem.

Geralmente, as clulas so submetidas a um composto fluorescente e a luz emitida processada num computador, que envia sinais para formao da imagem na tela de um monitor de vdeo. As imagens dos cortes pticos assim obtidas podem ser armazenadas em computador e utilizadas para construir uma imagem tridimensional, ou para clculos de comprimento, rea, volume e ouras anlises de acordo com a finalidade do estudo. Microscpio de Contraste de Fase e Interferncia de Nomarski: O mtodo do contraste de fase muito bem aplicado na visualizao de caractersticas estruturais muito sutis e clulas nicas contidas em espcimes muito finos (< 5 m) e no coloridos, que so muito pobres em contraste. Requerimentos: objetivas especiais, condensadores especiais. Microscpio de Polarizao: utilizado na observao de materiais que sejam birrefringentes (estruturas anisotrpicas, com ndices diferentes de refrao como msculo, ossos, celulose, fibras, cabelos, cristais, etc.). O microscpio de polarizao possui dois prismas: um polarizador e outro analisador. A luz ao penetrar em estruturas como as citadas se desdobra em duas. O prisma deixa passar uma das vibraes luminosas, mas no a outra, de modo que as estruturas que forem isotrpicas sero canceladas e no seu lugar ficar escuro. As estruturas birrefringentes (anisotrpicas) produziro um tipo de vibrao luminosa que passar, ficando brilhante. Somente as estruturas birrefringentes aparecero brilhantes, ficando o restante do material escuro. Microscpio Confocal Laser: Possui uma srie de peculiaridades que prime observar material espesso, sem corar, vivo ou no, pois focaliza diferentes planos focais, obtendo-se cortes pticos. Ele trabalha, geralmente, com o mesmo tipo de sistema ptico usado pela florescncia convencional, com a diferena que neste, todo o campo fica iluminado enquanto que no LSM, o sistema ptico focaliza somente um ponto em determinada profundidade no espcimen. Uma fonte luminosa bastante forte e brilhante requerida e desse modo usa-se o laser. A luz do laser passa por um pequeno orifcio e ilumina um nico ponto do espcimen. A fluorescncia emitida pelo material

coletada e conduzida para um detector, que possui um segundo orifcio pequeno. Dessa forma a imagem final que teremos aquela captada pelo segundo orifcio. Microscpio Eletrnico de Transmisso: Por sua vez emprega feixes de eltrons. Estes aps atravessarem a clula chegam a uma tela fluorescente onde formam uma imagem visvel sobre uma chapa fotogrfica que depois sero reveladas podendo ser ampliadas 2 a 4 vezes, sendo chamadas de micrografias. Os eltrons desviados por certas estruturas da clula no contribuiro para formar a imagem e aparecem escuras e so chamadas de eltron-densas. Os componentes celulares que desviam uma pequena percentagem de eltrons aparecero em diversas tonalidades de cinza. As tcnicas de colorao empregadas para observao nestes tipos de microscpio so metais pesados como o ouro, o smio, uranio e chumbo. Hoje limite de resoluo de um microscpio eletrnico de transmisso 40.000 vezes melhor do que a resoluo do microscpio ptico e 2 milhes de vezes melhor que a resoluo do olho humano. No entanto no se possvel ainda aproveitar inteiramente a capacidade resolutiva dos melhores microscpios eletrnicos assim ele passa somente a ter 2.000 vezes melhor resoluo dos microscpios ticos. O Microscpio Eletrnico de Varredura (MEV): Tornou-se um instrumento imprescindvel nas mais diversas reas: eletrnica, geologia, cincia e engenharia dos materiais, cincias da vida, etc. Em particular, o desenvolvimento de novos materiais tm exigido um nmero de informaes bastante detalhado das caractersticas microestruturais s possvel de ser observado no MEV. Podemos afirmar que onde haja um grupo de desenvolvimento de materiais, h a necessidade de um MEV para as observaes microestruturais. O MEV tem seu potencial ainda mais desenvolvido com a adaptao na cmara da amostra de detectores de raios-X permitindo a realizao de anlise qumica na amostra em observao. Atravs da captao pelos detectores e da anlise dos raios-X caractersticos emitidos pela amostra, resultado da interao dos eltrons primrios com a superfcie, possvel obter informaes qualitativas e quantitativas da composio da amostra na regio submicrometrica de incidncia do feixe de eltrons. Este procedimento facilita a identificao a de precipitados e mesmo de variaes de composio qumica dentro de um gro. Atualmente quase todos os MEV so equipados com detectores de raios-X, sendo que devido a confiabilidade e principalmente devido a facilidade de operao, a

grande

maioria

faz

uso

do

detector

de

energia

dispersiva

(EDX).

Microscopia Crioeletrnica: Permite o exame de espcimes biolgicos hidratados, no fixados e no corados diretamente no microscpio eletrnico de transmisso, fato que no ocorre em microscopia eletrnica convencional que em particular pela ausncia de gua faz com que macromolculas fiquem desnaturadas e no funcionantes. Para se preservar essa estrutura, no entanto o material congelado em nitrognio lquido a uma temperatura de (-196C) impedindo assim evaporao.

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