PRCTICA 1

1. En el inicio de callo embriognico de zanahoria la desinfeccin del material resulta especialmente importante por qu motivo? Porque la zanahoria es un rgano subterrneo. Esto supone una mayor carga microbiana que el resto de rganos lo que se traduce en un mayor empeo en su desinfeccin. Por eso, adems del etanol, se emplea una concentracin de hipoclorito mayor (al 20%). 2. En qu consiste la preparacin del explanto antes de la siembra? Por qu se hace? En esta preparacin se eliminan los extremos basal y apical de la raz as como los tejidos daados. Primero se desinfecta con algodn empapado en etanol al 96%. Posteriormente se corta transversalmente en varios trozos de una longitud entre 2 y 3 cm y se trata con una solucin de hipoclorito sdico al 20%. 3. Qu reguladores de crecimiento tiene el medio empleado para iniciar un callo de zanahoria? Auxinas y citoquinas en cantidad equivalente de modo que se induzca el crecimiento tanto de races como de tallo. (Normalmente hay una proporcin de 100 veces ms auxinas que citoquininas) 4. Principales fases en el desarrollo de embriones somticos A partir de una clula, sta se multiplica y se forma un agregado celular que dar lugar a un embrin globular, ste a su vez sufre un proceso de polarizacin en el que se dice que est en fase de corazn por la forma que tiene. Posteriormente el embrin sigue desarrollndose y la parte que est debajo de los cotiledones se alarga llegando as a la fase de torpedo. Finalmente se formar una planta. 5. Importancia de las auxinas en la obtencin de embriones somticos Las auxinas suponen el choque inductor necesario para que la clula produzca masas proembrinicas, es decir, agregados celulares en cuyo interior comienzan a desarrollarse los embriones. No obstante, dichas masas se degradan si la presencia de auxinas se prolonga en el tiempo, puesto que stas son inductoras del etileno, producto que produce enzimas que degradan el material vegetal. Por tanto y a fin de obtener el desarrollo completo, las auxinas deben ser retiradas del medio de cultivo a su debido tiempo. 6. Describa brevemente en qu estado de desarrollo se encontraban los embriones que observ al microscopio y qu tipos de clulas se vean Callos (grandes y transparentes) y embriones (pequeas) en fase de torpedo y corazn. 7. Qu condiciones ambientales se controlan en la cmara de cultivo in vitro? La temperatura y la luz son los dos factores que se controlan. La temperatura de la habitacin debe estar entorno a 22C (25C en el interior debido al efecto de la luz). Esta temperatura puede variar a lo largo del da mediante

termoperiodos (mtodo ms natural: diferentes temperaturas por el da que por la noche). La luz comprende tres subfactores: la intensidad, la calidad y el fotoperiodo. La intensidad invitro debe ser ms baja debido a la falta de desarrollo del aparato fotosinttico. La radiacin que es fotosintticamente activa se corresponde con el rango de longitudes de onda que est entre 400-460 (azul) y 620-680 (roja).

8. Qu mtodos de esterilizacin se emplean habitualmente en un laboratorio de cultivo de tejidos vegetales? Los ms importantes son el autoclave o calor hmedo (121C durante 15 minutos) y la estufa o calor seco (180C durante 2 horas).

PRCTICA 2
1. Qu se conoce como rgano adventicio? Es aquel rgano que se desarrolla en un lugar diferente al que se desarrollara de forma natural. 2. En la micropropagacin de la violeta africana por qu es tan importante realizar cortes limpios en la preparacin del explanto de hojas? Porque si el corte no es limpio se forman microcallos y se pierde la fidelidad genotpica de la que tanto presume este mtodo de micropropagacin. 3. Cules son las principales diferencias entre los medios de cultivo empleados en la micropropagacin de violeta? Razonar La primera diferencia es el objetivo de cada medio. En un medio se desea la obtencin de tallos adventicios, y en el otro el enraizamiento de los tallos. Para eso se debe establecer un balance determinado entre las auxinas y las citoquininas. En el primero medio, para obtener tallos, debe haber una mayor carga de citoquininas, y por eso encontramos 10mg de kinetina ms 1 mL de auxinas. En el segundo medio, para promover el enraizamiento de los tallos, hay presencia nicamente de 1mL de auxinas. 4. En la tcnica de cultivo de segmentos nodales, Cmo se manipula el explanto? En qu posicin se siembra? Con cuidado y en condiciones aspticas. Se corta por encima y por debajo del nudo. Se elimina el libo y se siembra en posicin vertical natural. 5. Todo tipo de planta es apta para ser propagada mediante la tcnica del aislamiento de segmentos nodales? No. Determinadas especies son aptas para esta tcnica como las caulescentes. En las acaules la proximidad de los nudos impiden o dificultan el proceso de obtencin del segmento internodal. 6. Se conserva la fidelidad genotpica en las plantas propagadas mediante la tcnica de cultivo de segmentos nodales? Razonar S puesto que no partimos de un callo sino de un rgano preformado. 7. Qu reguladores de conocimiento tiene el medio empleado para el cultivo de segmentos nodales y porqu? En este mtodo de micropropagacin no es necesario la presencia de reguladores del crecimiento ya que la yema est formada y muchas de las sustancias estn presentes en el explanto. 8. En la preparacin del medio de cultivo por qu se ajusta el pH ligeramente por encima del valor deseado? Porque el proceso de autoclavado acidifica el agar.

9. Indique la diferencia entre aclimatacin y aclimatizacin La aclimatacin es la adaptacin de una planta a un nuevo ambiente (no hay intervencin humana). La aclimatizacin es el proceso por el cual el hombre favorece o acelera la adaptacin al nuevo ambiente de forma gradual para que el cambio no sea brusco y la planta no muera en el proceso. 10. Describa las principales caractersticas del ambiente in vitro y qu procesos fisiolgicos se encuentran limitados en dicho ambiente La planta in vitro se encuentra en un determinado ambiente: el intercambio gaseoso es mnimo, la humedad relativa es muy elevada (100%), el potencial osmtico es muy negativo debido a la cantidad de solutos que contiene, etc. Los procesos fisiolgicos de fotosntesis, el tirn respiratorio y la funcionalidad estomtica estn limitados. 1 El tirn respiratorio est limitado puesto que la diferencia de potencial hdrico entre el suelo y la atmsfera es muy bajo y el agua no circula por el interior de la planta al estar fuertemente retenida en el medio debido a la elevada cantidad de sales minerales. 2 Por otro lado, la baja funcionalidad estomtica es debida a que no responden a estmulos externos ni internos para que los estomas se abran 3 La fotosntesis se ve disminuida por la presencia de sacarosa, la baja concentracin de CO2 y la baja intensidad de luz presente en el cultivo invitro. 11. Qu le sucedera a una planta cultivada in vitro si fuera trasplantada al ambiente ex vitro sin aclimatizacin previa? sta sufrira una rpida deshidratacin debida a la apertura indefinida de estomas y a la falta de cera epicuticular sobre la epidermis que impide que el agua salga al exterior. Adems, al ser la intensidad de luz muchsimo mayor en las condiciones ex vitro que en las condiciones in vitro, la planta sufrira fotoinhibicin y no tendra lugar la fotosntesis.