REAES DE CARACTERIZAO DE AMINOCIDOS E PROTENAS E DESNATURAO PROTICA

OBJETIVOS: identificao de aminocidos e ligao peptdica pelos mtodos da Ninhidrina e Biureto assim como observar a desnaturao e precipitao protica por diversos tipos de situaes. MATERIAIS: LEIA TODOS OS PROTOCOLOS E VERIFIQUE OS MATERIAIS NECESSRIOS E RETIRE NA BANCADA DA PROFa. Por exemplos: 1 pipeta de vidro de 1 ou 5 ml somente para albumina, mais uma pipeta de vidro para gelatina. AVISOS: OS REAGENTES SERO DIVIDIDOS POR TODOS OS GRUPOS, APS O USO, COLOQUE NA BANCADA DA PROFa. CASO NO HAJA TUBOS PARA TODOS OS GRUPOS, OS TUBOS USADOS DEVEM SER LAVADOS COM DETERGENTE. O MATERIAL DEVE SER DESCARTADO EM BEQUER DE DESCARTE.

TOME CUIDADO PARA NO CONTAMINAR OS REAGENTES E OS MATERIAIS.

PROCEDIMENTOS DE CARACTERIZAO EXPERIMENTO 1- TESTE DO NINHIDRINA esta reao dada pela presena do amino grupo livre e possibilita inclusive a determinao quantitativa do aminocido formao de composto colorido. Montar os tubos seguindo os dados da tabela abaixo Aquecer em banho-maria 37C por 10 min, observar e anotar os resultados TUBO 1 2 3 4 5 AMOSTRA (3 mL) Ovoalbumina 1% Gelatina 2% Aminocido de sua escolha Glicose 1% Agua destilada NINHIDRINA RESULTADO (cor) 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL

EXPERIMENTO 2 TESTE DE BIURETO - (a reao de biureto dada por substncias que contm no mnimo duas ligaes peptdicas (tripeptdeo). Sendo assim, essa reao positiva para todas as protenas, graas s suas ligaes peptdicas. O on cobre fornecido por uma soluo diluda e alcalina de CuSO 4 se complexa com os grupos aminos das ligaes peptdicas desenvolvendo uma colorao violeta).

As aulas prticas sero matria para as provas tericas

Montar os tubos seguindo os dados da tabela abaixo, adicionar primeiro o NaOH 1N e agitar com cuidado e depois o reativo de Benedict. TUBO AMOSTRA (3 mL) 6 7 8 9 10 Ovoalbumina 1% Gelatina 2% Aminocido de sua escolha Glicose 1% Agua destilada NaOH 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL Reagente de RESULTADO Cor) Benedict 3 gotas 3 gotas 3 gotas 3 gotas 3 gotas

PROCEDIMENTOS DE DESNATURAO (experimentos de A a D) Experimento A) Desnaturar pelo calor: TUBO Ovoalbumina Aminocido Resultados (precipitado ou alterao de cor) ou gelatina de sua escolha 2 mL --2 mL

11 12

Iincubar todos os tubos por 10 min em banho-maria a 100C e anotar os resultados. Experimento B) Desnaturar por adio de cido e base forte: TUBO Ovoalbumina Aminocido HNO3 NaOH Resultados (precipitado ou ou gelatina de sua alterao de cor) escolha 13 1 mL -1 mL -14 1 mL --1 mL 15 -1 mL 1 mL - 16 -1 mL - 1 mL Experimento C) Desnaturar por metais pesados: TUBO Ovoalbumina Aminocido AgNO3 ZnSO4 ou gelatina de sua escolha 17 1 mL -1 mL -18 1 mL --1 mL 19 -1 mL 1 mL -20 -1 mL -1 mL

Resultados (precipitado ou alterao de cor)

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Experimento D) Desnaturar por solventes orgnicos: TUBO Ovoalbumina Aminocido ou gelatina de sua escolha 1 mL -1 mL --1 mL -1 mL Etanol Acetona Resultados (precipitado ou alterao de cor) -1 mL -1 mL

11 12 13 14

1 mL -1 mL --

ANLISE DOS RESULTADOS 1) Quais so as amostras que podem ser classificadas como protenas? Justifique a sua resposta 2) Classifique as substncias utilizadas como bons, mdios pssimos desnaturantes. Justifique a sua resposta.

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