AFORO Y MUESTREO Introduccin El aforo de un efluente consiste en determinar el volumen que pasa por una seccin transversal al flujo

en la unidad de tiempo. Su medicin es determinante para estimar la carga de contaminantes que un efluente arroja a un cuerpo de agua natural o red de drenaje. Dependiendo del tipo de estructura hidrulica es el mtodo por utilizar, los mtodos para aforar un canal son diferentes a aquellos para aforar tuberas. Por lo que establecer a priori el mtodo por utilizar requiere el conocimiento de su implementacin e instalacin de estructuras requeridas para aforar un canal o tubera. Durante la presente prctica el alumno tendr oportunidad de usar los mtodos de aforo ms comunes y de evaluar el flujo de una corriente bajo conductos cerrados o abiertos. Objetivo Medir el flujo de una corriente de agua en tuberas y canales utilizando diversas estructuras de aforo. Mtodos de Aforo Aforo por Trayectorias.- Este mtodo es adecuado para aforar tuberas. El gasto de descarga se estima al medir la distancia horizontal hasta formar una perpendicular con un plano vertical que intercepta al flujo de agua en su cada (Figura 1). Borde de la Tubera X Tubera Flujo de Agua Y Punto de Interseccin

Figura 1.- Representacin esquemtica de la trayectoria del flujo de agua durante el aforo de una tubera. El gasto de la tubera se estima mediante la siguiente ecuacin:
Q 1.72 X D 2 g

Donde: Q = gasto que transita por la tubera (m3 s-1) X = distancia horizontal (m). Y = distancia vertical (m). D = dimetro de la tubera (m). Seccin Velocidad.- en este mtodo el gasto (Q) se estima midiendo el rea transversal al canal y la velocidad del agua, la cual se estima al multiplicar 0.6 por la velocidad superficial. El gasto se obtiene mediante la siguiente frmula:
Q A v

Donde: A es el rea transversal al flujo (m2) y v la velocidad de flujo (m s-1). Estructura de aforo.- otro mtodo comnmente utilizado es el de seccin de control. La metodologa consiste en utilizar una estructura con una escotadura, en su parte media superior, que puede ser rectangular, triangular o trapezoidal (Figura 2). La estructura puede ser de acero o concreto, permanentemente construida o colocada con el propsito de aforar el canal en un momento especifico.

Figura 2.- Secciones de aforo ms comnmente utilizadas en vertedores. La formula general para estimar el gasto que pasa por la seccin de control o escotadura del vertedor es: Q C H X Donde: Q = gasto de aforo (m3 s-1), C = coeficiente de proporcionalidad, X = exponente y H = carga sobre el vertedor (m). Reglas para la Instalacin y Operacin de los Vertedores 1.- Los vertedores deben colocarse en una seccin del canal donde el ancho y la profundidad del mismo permitan una velocidad inferior a los 0.15 m s-1. 2.- El vertedor debe colocarse perpendicular a la direccin de la corriente y en posicin vertical. 3.- La cresta debe ser biselada y perfectamente nivelada. 4.- La profundidad del agua que pasa por encima de la cresta del vertedor en ningn caso debe superar 1/3 de la altura de la cresta sobre el fondo del canal.

5.- Un limnimetro debe colocarse fuera de la influencia de la depresin del nivel del agua por la escotadura. El cero en la escala del limnimetro debe coincidir con el nivel de la escotadura. 6.- La profundidad del agua que pasa sobre la escotadura debe ser mayor a 5 cm. Materiales a. Flotador b. Cronometro c. Cinta de medir d. Vertedor e. Limnimetro f. Nivel g. Golpeador Mtodo de Seccin Velocidad a. Elegir una seccin recta del canal donde sea posible medir 5 m de distancia. b. Medir la profundidad del agua en forma transversal al flujo en varias secciones vecinas para obtener el rea transversal promedio. c. Colocar el flotador sobre la superficie del agua y operar el cronometro al momento de soltarlo. d. Estimar el tiempo transcurrido para recorrer 5 m de distancia. e. Obtener el gasto del efluente mediante la ecuacin 2.2. Mtodo de Estructura de Aforo a. Colocar un vertedor triangular en la seccin transversal del canal siguiendo las reglas de operacin e instalacin de los vertedores. b. Colocar el limnimetro a 1 m de distancia del vertedor. c. Registrar la altura de la cresta del vertedor d. Registrar la altura del espejo del agua en el limnimetro una vez alcanzado el equilibrio. e. Estimar el gasto de aforo mediante la siguiente ecuacin:

Q 1.35 H 2.47

SLIDOS SUSPENDIDOS TOTALES Introduccin El trmino de slidos suspendidos totales (SST) se refiere a la materia suspendida de cualquier origen. Ellos pueden afectar la calidad del agua en diversas formas; por ejemplo, el agua con alto contenido de SST promueve el crecimiento bacterial y la aportacin de nutrientes a los sistemas acuticos receptores. El anlisis SST es importante en el control de procesos biolgicos y fisiolgicos involucrados en el tratamiento de agua residual as como para determinar el cumplimiento de los lmites establecidos por las agencias de regulacin ambiental. Quienes establecen los limites de efluente secundario, durante su tratamiento, 30 mg L-1 y de 10 mg L-1 para efluente terciario. Objetivo Determinar la concentracin de slidos suspendidos totales en muestras de agua residual o cuerpos de agua superficial. Desarrollo de la Prctica Manejo y preservacin de la muestra Las muestras deben ser colectadas en botellas de plstico o vidrio preferentemente de 1 L de capacidad. Principie el anlisis a la brevedad posible o mantenga la muestra a 4 C hasta que la muestra sea analizada para evitar la descomposicin microbiolgica de los slidos. Se recomienda realizar el anlisis en las primeras 24 h despus de colectada la muestra. Por ninguna circunstancia conserve la muestra por ms de 7 das. Al momento del anlisis, la muestra debe estar a temperatura ambiente. Principio del mtodo Una muestra bien mezclada se filtra a travs de un filtro de fibra de vidrio. El residuo retenido sobre el filtro es secado hasta alcanzar peso constante a una temperatura de 103 a 105 C. El incremento en peso del filtro representa los slidos suspendidos totales.

Materiales y Equipos a. Plato de aluminio o acero inoxidable de 57 mm de dimetro b. Filtro de fibra de vidrio marca Whatman de 47 mm de dimetro, #934-AH c. Bomba de vaco d. Matraz de vaco

e. Balanza analtica con capacidad de 0.01 mg a 250 g f. Estufa de secado Procedimiento a. Pesar el filtro de fibra de vidrio y colquelo en el aparato de filtracin. b. Aplique vaco y lave el disco tres veces, cada una de ellas, con 20 ml de agua calidad de reactivo. c. Contine filtrando para eliminar cualquier remanente de agua. d. Remueva el filtro del aparato de filtracin y transfiralo a un disco de acero inoxidable o aluminio, previamente pesado. e. Transfiralo a una estufa con una temperatura de 103 a 105oC por una hora. Enfrelo en un desecador a temperatura ambiente y pselo. f. Repita el ciclo de secado, desecado y pesaje hasta alcanzar una diferencia constante de 4% o 0.5 mg, o que represente un valor ms bajo. g. Instale el aparato de filtracin con el filtro de fibra de vidrio y aplique succin, mojando ligeramente el filtro con agua calidad de reactivo para unirlo a la base del aparato de filtracin. h. Agite la muestra con una barra magntica en la plancha de calentamiento, y mientras agita, agregue un volumen determinado de muestra sobre el filtro. i. Lave tres veces sucesivas con 10 ml de agua calidad de reactivo, permitiendo que el agua se drene completamente entre lavados, y siga aplicando succin por tres minutos, despus de haber realizado la filtracin. j. Remueva el filtro y transfiralo al plato de aluminio o acero inoxidable. k. Colquelo en la estufa a 103 o 105 oC, enfrelo en el desecador y pese. respecto al promedio deben estar en un rango del 5%. Clculos Repita el ciclo de secar, enfriar y pesar hasta alcanzar una diferencia de 4% o 0.5 mg. La diferencia de las replicas con

( A B) 1000 mg de slidos suspendidos totales L volumende muestra, ml

Donde: A = Peso del filtro ms residuo seco, mg. B = Peso del filtro, mg.

DEMANDA QUMICA DE OXGENO Introduccin La Demanda Qumica de Oxgeno (DQO) es una medida de la cantidad de oxigeno necesario para oxidar la materia orgnica, susceptible, mediante un oxidante qumico fuerte; por lo general, Dicromato de Potasio (K2Cr2O7) ya que su habilidad oxidante es superior a la de otros compuestos qumicos, es aplicable a una gran cantidad de muestras y es fcil de manipular. Es una determinacin comnmente realizada en sistemas de tratamiento de aguas residuales industriales con alta carga orgnica (>2000 mg L-1). Objetivo Determinar la Demanda Qumica de Oxgeno en muestras de agua residual municipal y de la industria de los alimentos. Habilidades y actitudes Manejar el equipo de laboratorio, eficiencia en el manejo de recursos, seguimiento de las normas de seguridad e higiene, respeto al medio ambiente y liderazgo. Desarrollo de la Prctica Interferencias y Limitaciones Compuestos alifticos de cadena lineal no son oxidados en apreciables cantidades debido a que los orgnicos voltiles permanecen en la fase de vapor y no entran en contacto con el oxidante lquido. Estos compuestos alifticos son oxidados ms efectivamente cuando cristales de Sulfato de Plata (Ag2SO4) son aadidos. Sin embargo, Ag2SO4 reacciona con cloruros, bromuros y yoduros produciendo precipitados que son oxidados parcialmente. Los problemas causados por halgenos pueden ser superados en gran medida, no completamente, al reaccionar con sulfato de mercurio (HgSO4). Para una muestra de 50 ml se recomienda 1 g de HgSO4 una menor cantidad puede ser usada en muestras con menos de 200 mg L-1 de cloruros siempre que una proporcin de 10:1 de HgSO4:Cl sea mantenida. Conservacin y Muestreo Preferentemente colecte las muestras en botellas de vidrio. Las muestras deben ser analizadas inmediatamente y en aquellos casos en los que esto no es posible las muestras deben ser acidificadas a

pH 2 usando H2SO4. Preferentemente acidifique cualquier muestra que no pueda ser analizada el mismo da. Mtodo de reflujo abierto Principio del mtodo La mayora de la materia orgnica es oxidada mediante la ebullicin de cidos sulfrico y crmico. En nuestro caso usaremos dicromato de potasio (KCr2O7) para digerir la materia orgnica mediante reflujo abierto. Posterior a la digestin, el KCr2O7 no reducido se titula con sulfato ferroso amoniacal para determinar la cantidad de KCr2O7 consumido; la materia orgnica oxidada se estima en trminos de su equivalencia en oxigeno. Cuando se analice un volumen de muestra diferente a 50 ml las relaciones de pesos, volmenes, y concentraciones deben mantenerse. El tiempo estndar de 2 h puede reducirse si se demuestra que periodos ms cortos proporcionan los mismos resultados. Equipo y Materiales a. Matraz bola fondo plano de 500 o 250 ml con entrada 24/40. b. Condensador con unin 24/40. c. Parrilla de calentamiento para producir 1.4 W cm-2 de calor superficial. d. Solucin de dicromato de potasio estndar, 0.0414 M: Disuelva 12.259 g de KCr2O7, calidad de reactivo, previamente secado a 103oC por 2 h, agua destilada y diluya a 1 L. e. Solucin de cido sulfrico estndar: agregue Ag2SO4, calidad de reactivo, a H2SO4 a una relacin de 5.5 g Ag2SO4/kg H2SO4. Deje en reposo por 1 o 2 das para disolver el Ag2SO4. f. Indicador Ferroin: disuelva 1.485 g de 1,10-fenantrolina monohidratada y 695 g de FeSO47H2O en agua destilada y diluya a 100 ml. g. Sulfato Ferroso Amoniacal Estndar (FAS), aproximadamente 0.25 M: disuelva 98 g de Fe(NH4)2(SO4)2 6H2O en agua destilada. Agregue 20 ml de H2SO4 concentrado, enfre, y diluya a 100 ml. Estandarice esta solucin diariamente con KCr2O7 estndar de la siguiente manera: Diluya 10 ml de K2Cr2O7 a 100 ml y agregue 30 ml de H2SO4 concentrado, permita que se enfre. Titule esta solucin con FAS usando 0.10 a 0.15 ml ( 1 a 2 gotas) de Ferroin.

Molaridad de FAS

Volumen de K 2Cr 2O7 titulado, ml 0.25 Volumen de FAS usado en la titulacin, ml

h. Sulfato de Mercurio, HgSO4.

Procedimiento para muestras con DQO > a 50 mg O2 L-1. a. Dispense 50 ml de muestra en un matraz de 500 ml y en otro 50 ml de agua destilada, siga los siguientes pasos en ambas muestras. b. Aada 1 g de HgSO4, algunas perlas de vidrio y lentamente agregue 5 ml de la solucin estndar de cido sulfrico, agitando mientras el cido se agrega para disolver el HgSO4. c. Enfre mientras mezcla para evitar posibles prdidas de materiales voltiles. d. Aada 25 ml de 0.0417 M K2Cr2O7 y mezcla. e. Conecte el matraz al condensador y permita fluir el agua. f. Agregue 70 ml de cido sulfrico a travs de la parte superior del condensador; cubra la parte superior y caliente por 2 h. g. Enfre y lave interiormente el condensador con agua destilada, desconctelo y diluya a dos veces el volumen de muestra con agua destilada. h. Enfre a temperatura ambiente y titule el exceso de K2Cr2O7 con FAS usando de 0.1 a 0.15 ml (2 o 3 gotas) de ferroin, use el mismo volumen en todas las muestras. Tome como el punto final de la titulacin el primer cambio de color de verde-azul a caf rojizo. i. digiera y titule un control negativo, un volumen de agua destilada igual al de la muestra. Clculos

DQO en mg L1
Donde:

( A B) M 8000 ml de muestra

A = ml de FAS usados en el control negativo. B = ml de FAS usados en la muestra M = Molaridad del FAS.

DEMANDA BIOQUMICA DE OXGENO Introduccin La Demanda Bioqumica de Oxigeno (DBO) es una determinacin emprica en la que procedimientos estndar de laboratorio son usados para determinar los requerimientos relativos de oxigeno de aguas residuales o efluentes contaminados. Especficamente la prueba ms comnmente utilizada es el mtodo de incubacin de 5 das, el cual estima el consumo de oxigeno disuelto por diferencia entre la etapa inicial y final del periodo de incubacin. Es necesario contar con una poblacin de microorganismos capaz de oxidar la materia orgnica de la muestra. Aguas municipales no clorinadas o efluentes no desinfectados de plantas de tratamiento de desechos biolgicos cuentan con densidades suficientes para desarrollar la oxidacin. La determinacin de DBO es una biodeterminacin en la que un inoculo no aclimatado a las condiciones de la muestra es determinante en los resultados. Por esta razn, un control positivo usando glucosa y cido glutmico, la cual tiene una velocidad de degradacin similar a muchas aguas residuales municipales, es utilizado conjuntamente con la prueba de DBO de la muestra. Objetivo Que el alumno aprenda a determinar la DBO de muestras de agua residual y a colectar y preservar la muestra para el anlisis de DBO. Habilidades y actitudes Manejo de equipo de laboratorio, eficiencia en el uso de recursos, seguimiento de las normas de seguridad e higiene, comunicacin escrita y liderazgo. Desarrollo de la Prctica Conservacin de la muestra Si el anlisis se lleva a cabo dentro de las 2 primeras horas de tomada la muestra, no es necesario mantenerla refrigerada. Para periodos ms largos, hasta 6 h, se requiere conservar la muestra por debajo de 4 C. En los casos en que el anlisis no es posible realizarlo en las primeras 6 h, consrvela por debajo de 4 C y reporte el periodo de tiempo y la temperatura de almacenamiento con los resultados. Por ninguna razn realice el anlisis despus de 24 h. En aquellos casos de muestras compuestas, mantenga las submuestras a 4 C durante la integracin de la muestra y limite el tiempo de integracin a 24 h. Siga el mismo criterio anterior para conservacin y anlisis.

Primera Parte Materiales y Equipo a. Botellas de Incubacin de 250 a 300 ml de capacidad. Lave las botellas con detergente, enjuguelas repetidas veces y espere su secado. Preparacin de Reactivos e Inoculo a. Solucin Buffer: disuelva 8.5 g de KH2PO4, 21.75 g de K2HPO4, 33.4 de Na2HPO47H2O y 1.7 g de NH4Cl en 500 ml de agua destilada y diluya a 1 L. El pH debe estar a 7.2. b. Solucin de Sulfato de Magnesio: disuelva 22.5 g de MgSO47H2O en agua destilada y diluya a 1L. c. Solucin de Cloruro de Calcio: disuelva 27.5 CaCl2 en agua destilada y diluya a 1L. d. Solucin de Cloruro Frrico: Disuelva 0.25 g de FeCl36H2O en agua destilada y diluya a 1L. e. Solucin de Cloruro de Amonio: disuelva 1.15 g de NH4Cl en aproximadamente 500 ml de agua destilada y ajuste el pH a 7.2 con la solucin de NaOH y diluya a 1L. f. Caldo de Soya: agregue 30 g de caldo de soya tripticaseina a 1 litro de agua destilada, agite y caliente hasta ebullicin y esterilice. Mantenga el medio de cultivo a 4oC hasta su utilizacin. g. Aada una muestra de 1 L de efluente primario a un embudo Imhoff y permita que sedimente hasta el siguiente da. Colecte el sobrenadante y mantngalo a 4 C. Segunda parte Procedimiento a. Prepare una solucin de Sulfito de Sodio disolviendo 1.575 g de NaSO3 en 1000 ml de agua destilada. b. Aada 3 L de agua en una botella con suficiente capacidad y agregue 1 ml de las soluciones buffer, MgSO4, CaCl, y FeCl3 por litro de agua. c. Asegrese que la temperatura del agua de dilucin es de 20 C y satrela con oxgeno disuelto agitndola en una botella parcialmente llena. d. Agregue 1 ml del sobrenadante, obtenido anteriormente, a 50 ml de caldo de soya. e. Diluya la muestra en agua de dilucin para obtener un factor de dilucin 0, 10 y 100. Los resultados ms adecuados se alcanzan al obtener una concentracin residual de OD de 1 mg L-1 y una asimilacin de por lo menos 2 mg L-1 despus de 5 das de incubacin. f. Inocule cada una de las botellas y llnelas hasta su mxima capacidad formando un sello de agua y cubriendo su parte superior con aluminio o plstico.

g. Incube a 201 C las botellas conteniendo las diluciones de la muestra y el control negativo. Determine el OD antes y despus de los 5 das de incubacin. Clculos
DBO5 , mg / L ( D1 D 2 ) ( B1 B 2 ) P

Donde: D1 = OD de la muestra diluida inmediatamente despus de preparada, mg L-1. D2 = OD de la muestra diluida despus de 5 das de incubacin a 20 C, mg L-1. P = Fraccin volumtrica de la muestra usada. B1 = OD del control inoculado antes de incubar, mg L-1. B2 = OD del control inoculado despus de incubar, mg L-1.

COLIFORMES TOTALES Y FECALES Introduccin Los microorganismos patgenos que pueden ser transmitidos por agua son bacterias, virus y protozoarios. Ellos habitan en el sistema digestivo y son desalojados a travs de las heces; por lo que la contaminacin fecal del agua puede ocurrir, resultando en la transmisin de microorganismos infecciosos y en enfermedades tales como Salmonelosis, Clera, Shigelosis, Hepatitis A y E, Miocarditis, Meningitis, Criptosporidiosis y otras. El examen rutinario de patgenos entricos es difcil y algunas veces imposible; es mucho ms fcil demostrar la presencia de algunos tipos de microorganismos no patognicos que habitan en el sistema digestivo tales como el grupo de Coliformes Totales. Las bacterias Coliformes Totales estn frecuentemente asociadas a organismos patognicos entricos y por muchos aos han sido utilizadas como indicadores de contaminacin fecal en agua y alimentos; este grupo incluye Escherichia coli, Enterobacter, Klebsiella y Citrobacter. Coliformes Fecales las cuales son ms claramente de origen fecal. Este grupo est integrado por Escherichia coli y Klebsiella que se distinguen por fermentar lactosa a 44.5 C en 24 h con produccin de gas. Objetivo Determinar la concentracin de Coliformes Totales y Fecales en muestras de agua residual y a colectar y preservar la muestra para su anlisis. Habilidades y actitudes Manejo de la tcnica de filtracin, medir con precisin y exactitud, identificar unidades formadoras de colonias, respeto al medio ambiente, seguimiento de la normatividad de seguridad e higiene y liderazgo. Desarrollo de la Prctica Principio del mtodo El mtodo se basa en filtrar un volumen determinado de muestra a travs de una membrana de nitrocelulosa de 0.45 m de tamao de poro y 47 mm de dimetro que atrapa la bacteria en su superficie. La membrana se coloca sobre una placa de un medio de cultivo diseado para el crecimiento de la bacteria en forma diferencial, es decir, la bacteria crecer desarrollando una caracterstica distintiva; por ejemplo, color de la colonia, que permitir su identificacin y enumeracin. El mtodo ms tradicional en la identificacin de coliformes es el del Numero Ms Probable. Este mtodo

estadstico est basado en el hecho de que entre ms grande el numero de bacterias en la muestra mayor numero de diluciones son necesarias para reducir su densidad a tal punto que ningn crecimiento es observado en los tubos de dilucin. El mtodo de filtracin rene una serie de ventajas en comparacin con el mtodo de Numero Ms Probable como lo es el ser ms rpido, sencillo y volmenes ms grandes de muestra pueden ser probados; sin embargo, es necesario realizar diluciones en aguas con alto contenido de slidos suspendidos para evitar obstruir la membrana. Equipo e Instrumental a. Bomba de vaci. b. Manifold con embudos de filtracin. c. Membranas de 0.45 m de tamao de poro y 47 mm de dimetro. d. Pipeta estril de 10 ml. e. Pinzas de diseccin. f. Pipeteador. g. Mechero h. Plancha de calentamiento. g. Cajas petri de 100 x 15. Medios de cultivo a. Coliformes Totales: mezcle 51 g de Emendo Agar Less (Difco, Detroit, MI) y 20 ml de alcohol etlico en 1 L de agua destilada, caliente hasta la ebullicin y vaci de 12 a 15 ml por caja petri, permita que solidifique, rotule, empaque y conserve a 4 C. b. Coliformes Fecales: prepare una solucin 1N de Hidrxido de Sodio con 1% de cido reslico. Posteriormente, mezcle 51 g de Agar de mFC (Difco, Detroit,MI) en agua destilada, caliente hasta la ebullicin, retire, agregue 10 ml L-1 de la solucin de NaOH y cido reslico y caliente nuevamente permitiendo hervir por 1 min. Vaci de 12 a 15 ml del medio de cultivo por caja petri, permita que solidifique, rotule, empaque y conserve a 4 C. Procedimiento a. Esterilice en seco, humedeciendo en alcohol etlico y flameando en el mechero, un par de pinzas de diseccin y colquelas en cajas petri estriles. b. Ensamble el manifold de filtracin al matraz de vaci y coloque el embudo de filtracin.

c. Separe la parte superior del embudo y coloque la membrana de filtracin con la cuadricula hacia arriba y centrndola en la superficie de filtracin. d. Agregue 50 ml de agua destilada estril sobre la membrana de filtracin y aada 1 ml de muestra. e. Aplique vaci. A medida que el nivel del agua se aproxime al filtro, lave las paredes del embudo con agua destilada estril. Permita que el vaci drene completamente el agua del embudo. f. Retire la parte superior del embudo con el vaci todava aplicado sobre la membrana. Con las pinzas de diseccin retire la membrana y colquela sobre una placa de mEndo Agar Less para coliformes totales. Rotule la caja petri con 1 ml, la fecha, sus iniciales y CT (coliformes totales). g. Repita los incisos a) a f) pero ahora para coliformes fecales. h. Repita los pasos de los incisos a) a f) con 10 ml para coliformes totales y fecales y posteriormente con 100 ml para ambos grupos de bacterias. i. Incube por 24 h a 37 C las cajas petri con los ensayos de coliformes totales y a 44.5 C las coliformes fecales. j. Las Unidades Formadoras de Colonia (UFC) de coliformes totales sern cuantificadas enumerando aquellas colonias de color verde metlico. Mientras que las UFC para coliformes fecales se cuantificaran enumerando las colonias de color azul formadas sobre la membrana. CALCULOS

UFC / 100 ml

UFC enumeradas 100 ml Volumen de muestra ensayado

COLIFAGOS Introduccin Los virus son parsitos internos obligados que utilizan las capacidades metablicas del husped para su replicacin. Ellos solo pueden ser visibles mediante la ayuda del microscopio electrnico. Se les considera macromoleculas compuestas principalmente de ADN o ARN y protena. Aquellos virus que infectan el tracto intestinal de humanos y animales se les conoce como virus entricos. Estos virus son excretados en las heces fecales de individuos infectados. Los virus que infectan bacterias se les conoce como bacterifagos y aquellos que infectan bacterias coliformes se les llama colifagos y son encontrados en cualquier lugar donde las bacterias coliformes son encontradas. Algunos colifagos han sido usados como modelos de virus entricos en estudios de desinfeccin, sobrevivencia y transporte en suelos y acuferos. Tambin, ellos han sido usados como indicadores de contaminacin fecal, y eficiencia de tratamiento de agua residual. Su anlisis es simple, econmico y los resultados se obtienen en un periodo de 24 h lo cual es sumamente rpido en comparacin con los virus entricos. Objetivo Determinar la concentracin de colifagos nativos en muestras de agua residual municipal. Habilidades y actitudes Manejo de la tcnica de doble capa, utilizacin eficiente de recursos y tiempo, respeto al medio ambiente e iniciativa. Desarrollo de la Prctica Principio del mtodo Los colifagos se analizan mediante la adicin de una muestra de agua junto con un cultivo de E. coli, con su crecimiento en fase de aclimatacin, a una placa de Agar. El colifago se adhiere a la clula bacterial y rompe la bacteria. La bacteria E. coli crecer formando una capa sobre la placa de agar, pero en aquellos lugares donde fue infectada se observaran pequeos lugares transparentes indicando que la bacteria fue eliminada por el virus. A estos lugares se les conoce como Unidades Formadoras de Placa (UFP)

Equipo y materiales a. b. c. d. e. f. g. h. i. 1 ml de agua residual o muestra de agua conteniendo colifagos. Cultivo de E. coli con 2 a 3 h de incubacin a 37 C en caldo de soya. 20 ml de solucin salina buffer. 4 tubos de ensayo con agar de soya tripticaseina lquido. 4 cajas petri con una placa de agar de soya (12 a 15 ml). Micropipeteador con capacidad de 100 a 1000 L. Pipeteador. Bao Mara. Incubadora a 37 C.

Procedimiento a. Diluya en serie una muestra de agua residual 1:10 y 1:100, en tubos de dilucin de 6 ml, agregando 0.3 ml de muestra y 2.7 ml de agua esterilizada. b. Coloque los tubos de dilucin que contienen el agar en un vaso de precipitado, con agua y mantngalos en la plancha de calentamiento hasta derretir el agar. Procure que el nivel del agua en el vaso de precipitado este por encima del nivel del agar en el tubo de ensayo. c. Los tubos de ensayo con el agar derretido colquelos en el bao mara a una temperatura entre 45 y 48 C. Espere 15 min. d. Aada a uno de los tubos de ensayo 1 ml del cultivo de E. coli y 1 ml de la muestra. Retrelo del bao mara, agtelo, seque el exceso de agua del tubo de ensayo y virtalo en una caja petri conteniendo una placa de agar de soya tripticaseina. Agite suavemente la caja petri para el agar derretido se distribuya homogneamente sobre la placa de agar. e. Espere a que el agar solidifique, invierta las cajas petri y rotleles con la fecha, sus iniciales y 1 ml. f. Repita el proceso anterior para las diluciones de 1.10 y 1:100 y rotlelas como 10-1 y 10-2 . g. Coloque los platos en la incubadora por 24 h a 37 C. h. Enumere las placas formadas en la caja petri. CALCULOS

UFP / 100 ml

UFP enumeradas 100 Volumen de muestra ensayada (ml )