Licenciatura em Enfermagem - ESENFC

Bioqumica e Biofsica

Clonagem

AC Santos - 2009/2010

Clonagem o processo natural ou artificial pelo qual so produzidos clones, cpias fiis geneticamente de outro ser, por reproduo assexuada. A clonagem tem sido um assunto muito debatido recentemente com o advento de tcnicas que permitem a clonagem de animais a partir de vulos no fecundados. Mas processos de clonagem artificial so conhecidos desde o sculo XIX entre os horticultores, que j obtinham clones de orqudeas atravs da cultura de tecidos meristemticos de uma planta matriz, que originava dezenas de novas plantas geneticamente idnticas. O termo clone foi criado em 1903 pelo botnico Herbert J. Webber enquanto pesquisava plantas no Departamento de Agricultura dos Estados Unidos. Segundo Webber, o termo vem da palavra grega Kln, que significa broto vegetal. basicamente um conjunto de clulas, molculas ou organismos descendentes de uma clula e que so geneticamente idnticas a clula original. Desta forma, a clonagem um processo de reproduo assexuada, onde so obtidos indivduos geneticamente iguais (microorganismo, vegetal ou animal) a partir de uma clula-me. um mecanismo comum de propagao de espcies de plantas, bactrias e protozorios. Em humanos, os clones naturais so gmeos univitelinos, seres que compartilham do mesmo DNA, ou seja, do mesmo material gentico originado pela diviso do vulo fertilizado.

A clonagem alcanou a fico aquando da escrita de "Admirvel Mundo Novo", por Aldous Huxley, que talvez no imaginasse que algum dia a cincia poderia aproximar-se tanto da fico da sua obra. Ainda que com possibilidades remotas de tornar-se realidade, a produo de indivduos em laboratrio, como diz Huxley, j ultrapassou a linha divisria entre a fico e a realidade.

Clonar significa produzir indivduos idnticos a um outro, por meio de tcnicas que excluem a fertilizao. Na rea vegetal, a clonagem deixou de ser novidade h muito tempo. A tcnica tem sido usada para propagar inmeras espcies de plantas, como batata, bananeira e abacaxi. Partindo-se de pedacinhos de uma planta, possvel originar em meses, dezenas ou centenas de outras plantas iguais. A importncia disso que podemos escolher os melhores indivduos para serem produzidos, qualquer que seja o aspecto desejado (produo, sanidade, etc.). Enquanto a clonagem vegetal vinha sendo continuamente otimizada, a clonagem animal e, sobretudo, a humana eram consideradas apenas uma viso futurista da cincia.

Clonagem em Biologia Molecular MacFarlane Burnet - prmio Nobel em 1965 com um trabalho sobre sntese proteica e cdio gentico. Um suio fez, mais tarde, um raciocnio brilhante: o DNA tem forma de escada, em que os degraus so de natureza proteica e os corrimes so constitudos por acares.

Os degraus so diferentes de pessoa para pessoa, ento se se conseguisse fracturar a molcula em pequenos fragmentos poder-se-ia estudar o genoma do indivduo! Assim, os utenslios ou ferramentas biolgicas so: enzimas de restrio, sondas de DNA ou RNA e hibridizao molecular (Werner Arber, Hamilton Smith, Daniel Natham, 1970, USA) biologia e a gentica moleculares.

Enzimas de restrio ou endonucleases[1] de restrio: so componentes do sistema de defesa celular de bactrias contra DNA estranho. Estas enzimas cortam o DNA estranho de dupla cadeia em sequncias nucleotdicas especficas, geralmente com simetria dupla em torno de um ponto central, chamadas sequncias palindrmicas[2], mas no o seu prprio DNA (que metilado em pontos potenciais de reconhecimento). A sua designao deriva do nome da bactria de que foi isolada (ex: Eco RI da E. coli, Pst I da Providentia stuart).

Famlia de exonucleases 5'-3: (a) exonuclease T5, (b) ribonuclease H do bacterifago T4 e (c) domnio exonuclease da Taq polymerase, (d) a estrutura colorida da T5 exonuclease codificada de acordo com as regies que mostram flexibilidade.

[1] [2]

Exonuclease: corta a extremidade da cadeia de DNA. Chama-se palindroma a qualquer palavra que quando se l de trs para a frente repete o original (ex: anilina, ana, asa, etc.)

Vector (Hubert Boyer, Stanley Cohen, USA) um plasmdeo, fago ou cosmdeo no qual possvel inserir sequncias de DNA estranho, para proceder sua clonagem (produzir muitas cpias para formar uma biblioteca de DNA = amplificao).
Tabela 1 - Vectores de clonagem

Caractersticas Serem estveis na clula hospedeira Controlarem a sua prpria replicao Possuirem pequena dimenses

Funes Permite a replicao Permite a sua multiplicao dentro da clula com aumento do n de cpias Permite uma rpida introduo na clula por transformao, electroporao ou transduo Permite a inibio do DNA dador e a circularizao do plasmdeo Evita que o DNA recombinante se dissocie para as populaes nativas das bactrias Evita possvel distinguir as clulas transformadas das no transformadas Aumenta o rendimento do plasmdeo recombinante

Serem cortadas num s local por uma enzima de restrio No serem transferidos por conjugao

Terem carcatersticas facilmente detectveis Serem facilmente isoladas das clulas

Diagramas de vectores de clonagem simples derivados de um plasmdeo. O plasmdeo pode transportar um ou mais genes que lhe confiram propriedades particulares, tais como a resistncia a certos antibiticos. O gene selectivo ampr codifica a enzima -lactamase, que inactiva a amplicilina (antibitico).

Vector de expresso 4,85 Kb centrmero Insert de DNA origem Local promotor Local mlpiplo de clonagem (MCS ou polylinker ) Local terminador

telmero

bla ex: pGEM (1959 pb)

Vector de expresso.

Plasmdeo: segmento circular de DNA de cadeia dupla que se encontra no interior das bactrias e se replica autonomamente.

Cosmdeo: vectores sintticos para clonagem de genes que podem inserir grandes fragmentos de DNA estranho.

YAC (yeast artificial chromosomes): cromosoma artificial construdo com regies centromricas e telomricas dos cromosomas de leveduras, por forma a permitir a insero de grandes fragmentos de DNA heterlogo (maior que 100 Kb), mantendo a sua capacidade de replicao.

Tabela 2 - Componentes de uma experincia de clonagem.

Componentes DNA dador (insert) Endonuclease de restrio

Funo Fonte do DNA ou gene a ser clonado Enzima utilizada para cortar tanto o DNA do dador como o do vector em locais especficos, de modo a que o DNA do dador possa ser inserido no vector Plasmdeo ou bacteriofago utilizado para introduzir o gene a ser clonado numa clula hospedeira adequada Enzima utilizada pata ligar as extremidades livres e adaptveis do DNA do vector e do dador e assim formar um vector recombinante Geralmente uma bactria ou uma clula de levedura. Os vectores recombinantes introduzem-se nas clulas hospedeiras de modo a obter maior quantidade de molculas de DNA recombinante

Vectores

Ligase de DNA

Clula hospedeira

Tcnicas de amplificao in vitro (PCR) em Biologia Molecular Clonagem de DNA ou clonagem molecular - isolamento seguido de produo de vrias rplicas de um fragmento de DNA, pot multiplicao num vector (plasmdeo, fago, cosmdeo, YAC). A reaco de PCR (polymerase chain reaction) foi delineada por Kary Mullis em 1985. Com um fragmento de DNA podem fazer-se milhares de cpias. Utiliza-se uma enzima que se reproduz a temperatura elevada, Taq polimerase (Taq de Thermophillus aquaticus). PCR = reaco de polimerizao em cadeia utilizada para amplificar determinadas sequncias de DNA. So usadas duas sequncias de oligonucletidos de DNA flanqueadores, como iniciador de replicao (primers) e, recorrendo a uma polimerase do DNA, fazem-se replicaes sucessivas da sequncia do DNA inicial. Amplificao de DNA: produo de mltiplas cpias de uma sequncia de DNA (amplicons). Primer (sequncia de iniciao): sequncia de DNA ou RNA complementar para o incio de uma sequncia nucleotdica e que serve de ponto de partida para esta ser copiada por uma polimerase.

Ciclo de amplificao 1 etapa: destruio do DNA (90C) (30 '' a 1 min) 2 etapa: hibridao dos primers (30 '' a 1 min) 3 etapa: elongao pela Taq polimerase (30 "' a 2 min) volta-se a iniciar outro ciclo e assim sucessivamente ... vrias vezes ( s preciso juntar mais primers, a Taq no se gasta) nf = n0 + 2n nf = n de cpias final; n0= n cpias inicial

A PCR usada correntemente em diagnstico mdico (ateno s contaminaes!), em vrias reas (ex: fase de eclipse do vrus da SIDA) porque uma tcnica: - rpida, - sensvel, - especfica, - no precisa de clonagem, isto , permite multiplicar um fragmento de DNA sem recorrer a clonagem. Tambm se utiliza noutras reas de investigao cientfica para as mais variadas aplicaes.

Hibridao: ligao de sequncias unicatenares de cidos nuclicos (DNA ou RNA) atravs da complementaridade de bases. Gis (agarose ou poliacrilamida): suprimem as correntes de converso produzidas por pequenos gradientes de temperatura; servem de crivos moleculares que acentuam a separao. Probes: (sondas): molculas de DNA ou RNA marcadas com istopos radioactivos (ex: 32P) ou no radioactivas (ex: peroxidase; avidina-biotina + peroxidase = fluorescncia) usadas para detectar a presena de sequncias complementares por hibridizao. Aplicao de sondas: - diagnstico gentico pr-natal - diagnstico gentico pr-sintomtico - identificao individual (DNA fingerprints)

Com a PCR pode fazer-se a sequenciao do genoma, mas utilizam-se vrias outras tcnicas em Biologia Molecular: - Southern Blotting - Northern blotting - Western blotting

O blotting a transferncia do DNA (ou RNA ou protenas) de um gel para uma membrana sinttica (nylon ou nitrocelulose). Aps a hibridizao, por ex: tendo usado 32P-DNA, tem de se revelar = autorradiografia. O autorradiograma serve ento para fazer a leitura (sempre de baixo para cima) da sequncia de nucletidos. Hoje em dia h aparelhos automticos para fazer quer a PCR quer a hibridizao e a leitura dos blots.

Aplicao prtica - ex: verificao de mutao gentica na fenilcetonria ou nas anemias (ex: anemia falciforme forma mediterrnica caracterizada por fragilidade dos glbulos vermelhos).
Hb S (anemia falciforme) Hb A (normal) heterozigtico

Fig. 3 - Esquema das bandas electroforticas num gel de poliacrilamida na anemia falciforme.

SOUTHERN BLOT: - tcnica usada para testes de hibridizao em fragmentos de DNA separados por electroforese em gel, aps aco de enzimas de restrio. A designao Southern vem do nome do cientista que a inventou. As designaes de Northern e Western surgiram depois desta e apontam as regies dos USA onde foram descobertas as respectivas tcnicas. Tcnica de Southern Blotting extraco de DNA - a clula lisada com detergentes (ex: SDS, Triton X, Tween) precipitam-se as protenas com enzimas (ex: proteinase K) o DNA vai ser precipitado com solventes (ex: fenol e formol) com uma vareta enrola-se o DNA e retira-se da soluo.

A tcnica de Northern Blot aplicada a amostras de RNA. A tcnica de Western Blot aplica-se a amostras de peptdeos e protenas.

Hibridoma Protenas

Anticorpos Insulina lnterfero Albumina srica humana Hormona humana do crescimento Activador plasminognico de tecidos Antitrombina Factores de coagulao do sangue Luciferase (pirilampo) Linfocinas Factor da necrose tumoral Gonadotropina humana Cereais resistentes a doenas Tomates hidropnicos Resistncia a pesticidas Bio-insecticidas Fixao do azoto Hepatite B Herpes Gripe Malria

Agricultura

Vacinas

Alguns benefcios da biotecnologia

Fizeram-se progressos considerveis no sentido de introduzir genes em animais e plantas para curar doenas genticas, aumentar a produtividade das plantas e do gado e tornar os cereais mais resistentes a doenas. Por exemplo, introduzem-se muitos genes em plantas para as tornar resistentes a insectos e a plantas infestantes. Muitos cientistas esto a tentar introduzir em alguns cereais como o trigo, o arroz, a cevada e o milho, os genes bacterianos para a converso do azoto atmosfrico em amnia. Isto permitiria o crescimento dos cereais sem a necessidade de adio de fertilizantes de azoto, bastante dispendiosos e muitas vezes prejudiciais ao meio ambiente

Pesquisa do genoma humano H trs grande projectos a nvel mundial nesta rea desde 1985: USA, Japo e CEE. O genoma humano haplide (23 com) tem 3 109 pb. Pretende-se fazer a sequenciao do genoma, isto , determinar a ordem efectiva das 3 109 unidades (nucletidos) que constituem o genoma. Conhecendo o genoma teremos mais possibilidades de entender a fisiologia normal, ver quais os mecanismos etiolgicos e etiopatognicos das doenas, para produzir novos medicamentos, novos alimentos, etc.. At ao momento j foi feito o mapeamento cromosmico, ou seja, a identificao de marcadores moleculares que permitem uma localizao rpida e aproximada de genes, e a diviso dos cromosomas em fragmentos de DNA com extremos comuns. Ainda no est terminado para os 23 crom a sequenciao dos fragmentos de DNA obtidos; a reconstituio da ordem das bases pricas e pirimdicas nos cromosomas, recorrndo sobreposio das regies comuns nos extremos dos fragmentos de DNA; a comparao das sequncias entre diversos genes, indivduoas da mesma espcie ou mesmo de outras espcies. J esto descobertos cerca de metade dos nossos genes e com os novos conhecimento entretanto adquiridos o nmero de genes diminuiu para 20 a 25 mil genes

1 preciso fazer um mapa gentico (em cada cromosoma encontrar marcadores moleculares, onde as enzimas de restrio vo actuar; 1 centimorgan = 1 milho de pares de bases). Depois faz-se um mapa fsico, formado por vrias sequncias. A seguir necessrio p-los topo a topo at encontrar o comprimento total do cromosoma. Por fim quando se tiverem todas as sequncias que se v o que lixo ou no (o DNA codificante s entre 5 a 10%)

Na espcie humana j foram identificados mais de 5 000 genes e localizados e clonados 1 500 genes.

Crom 1 = 263 Mb (8,6% do genoma) Crom 21 = 50 Mb (1,6% do genoma) - contm o gene da doena de Alhzeimer (brao longo - AD1), da amiloidose cerebral (APP), do sndroma de Down (DCR), Crom X Croms Y - 2 genes

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/science96/

Chromosome 1
GBA. In Gaucher disease, the defective enzyme is unable to metabolize glucocerebrosides which accumulate in characteristic, distended phagocytic cells

Cromosoma 1

AD4. Brain scans of a healthy elderly person and a patient with Alzheimer's disease

DMD Defects in the dystrophin gene cause Duchenne muscular dystrophy, a fatal progressive degeneration of muscle tissue

FMR1 An unstable nucleotide repeat is associated with the most common form of mental retardation known as Fragile X syndrome

ATP7A Abnormal Purkinje cell dendrites in the brain of a patient with Menkes disease

ALD Mylein-stained section of brain in adrenoleukodystrophy, characterized by defective catabolism of long chain fatty acids

Cromosoma X

TDF - Testis-determining factor (also known as SRY) binds to DNA and regulates genes controlling the development of the testis

http://www.genome.gov/12513430

Como resultado do avano no conhecimento cientfico, tanto a clonagem humana como a animal esto na ordem do dia. Isto ficou mais evidente em Fevereiro de 1997 com o nascimento da ovelha Dolly, o primeiro mamfero a ser clonado a partir de uma clula adulta, na Esccia.

Nos anos 70, John Gurdon clonou girinos com sucesso. Transplantou o ncleo de uma clula especializada de um sapo num ovo no fertilizado de outro sapo, no qual o ncleo foi destrudo por luz ultravioleta. O ovo com o ncleo transplantado desenvolveu-se num girino que era geneticamente idntico ao segundo sapo.

Apesar de os girinos de Gurdon no terem sobrevivido at se tornarem sapos adultos, a sua experincia mostrou que o processo de especializao em clulas animais era reversvel e sua tcnica de transferncia nuclear abriu caminho para sucessos posteriores em clonagem.

Clonagem

Plasmdeo recombinante

Bactria hospedeira (E. coli) Transformao da bactria hospedeira por mistura com o plasmdeo recombinante

Crescimento em meio de cultura durante 24h a 37C

1997 - Ian Wilmut (Edimburg, UK) - 1 clone de animal adulto (ovelha Dolly): Ovelha Finn Dorset clula do dador (glndula mamria), clonada numa cultura com muito baixa concentrao de nutrientes para que no se exprimisse. Ovelha Blackface vulo (colhido por suco). Fundiu as duas clulas (1 impluso elctrico serve para as pr em contacto e o 2 impulso elctrico funde-as). O embrio resultante foi implantado (mrula com 6 a 8 clulas) no tero de outra ovelha. O resultado foi um cordeiro da raa Finn Dorset, geneticamente igual ao dador inicial.

Como o que foi clonado foi uma clula adulta houve envelhecimento precoce, devido peristase (o ambiente intra-uterino mantm o extra-uterino).

Como o que foi clonado foi uma clula adulta houve envelhecimento precoce, devido peristase (o ambiente intra-uterino mantm o extra-uterino).

Com os avanos obtidos na rea animal, abriram-se perspectivas para que a tcnica tambm fosse estudada em seres humanos com fins teraputicos. No entanto, a manipulao de clulas humanas gerou polmica que culminou quando foi levada para o plano reprodutivo. Em 2002, equipas de investigadores fizeram anncios sobre possveis trabalhos visando produo de clones humanos. O mais recente foi feito pela Companhia Clonaid, uma organizao religiosa internacional fundada h pouco mais de 6 anos que acredita na existncia de extraterrestres e se denomina como a primeira companhia do mundo a oferecer servios de clonagem humana, a qual anunciou, sem nenhuma comprovao cientfica, o nascimento do primeiro clone humano. Alguns dias mais tarde, a mesma empresa anunciou o nascimento de um segundo clone, mais uma vez sem apresentar nenhuma prova sobre a bagagem gentica destes recm-nascidos, causando desconfiana na comunidade cientfica internacional sobre a veracidade de tais nascimentos.

Embora a teoria seja simples, na prtica a clonagem complexa. Nos animais os resultados da clonagem tm frequentemente apontado para nascimentos com algum tipo de anomalia e alta ineficincia quando os resultados so expressos em nascimentos vivos por transferncia de embrio. Mesmo assim, as pesquisas na rea no param e depois do anncio do nascimento da ovelha Dolly, proles vivas de ratinhos, ratos, coelhos, porcos e vacas j foram registadas. O Brasil tambm j apresenta resultados na rea. Em maro de 2001, pesquisadores da Embrapa Recursos Genticos e Biotecnologia anunciaram o nascimento do primeiro clone bovino baptizado de Vitria. Embora a tcnica de clonagem animal seja bem mais complexa do que a vegetal e ainda esteja longe de ser totalmente dominada, os objectivos finais so bastante semelhantes queles da clonagem vegetal e incluem, entre outros, a possibilidade de multiplicao de animais com boas caractersticas genticas e a recuperao de populaes de espcies silvestres ameaadas de extino.

Sob o ponto de vista tcnico, e para os defensores da clonagem humana, a tecnologia poderia beneficiar, por exemplo, casais infrteis que deixariam de utilizar as tcnicas actuais de fertilizao in vitro para reproduzir indivduos relacionados a si mesmos. No plano da fico, acredita-se que por meio dela seria possvel clonar novos Hitlers, Einsteins, Vivaldis, etc.. Baseando-se nas experincias com os animais, nas quais a eficincia em se produzir proles vivas e normais bastante baixa, actualmente a clonagem humana para fins reprodutivos injustificvel. Devido a estes riscos e aos princpios ticos, instituies como a Organizao Mundial da Sade e Unesco so contra os estudos de clonagem para estes fins.

H algum tempo os criadores norte-americanos comearam a clonar os seus melhores animais: gado de corte, vacas leiteiras, porcos, frangos, todos da melhor qualidade, podiam ser reproduzidos quantas vezes fosse preciso. O custo era alto, mas os resultados, garantidos, com uma produo igual ou at superior do original. Muito se fala sobre o assunto, mas a verdade que ainda existem poucas concluses. At nos Estados Unidos, onde as exigncias sanitrias so extremamente rgidas, no h um consenso. A Food and Drug Administration (FDA), agncia que regulamenta os alimentos e os medicamentos vendidos nos EUA, nunca aprovou a venda de subprodutos de animais clonados, mas, por outro lado, tambm nunca os proibiu. O delicado tema segue em anlise e o veredicto final, que deveria sair no final de 2007, no no saiu. De acordo com a FDA, no h um prazo estimado para que as pesquisas sejam concludas e uma posio final seja tomada. Para os defensores dos clones, a deciso ainda est longe de sair, no por problemas com os animais, mas sim por questes polticas, uma vez que a maioria da populao norte-americana contra o uso dos produtos clonados. Os criadores defendem-se, alegando que a deciso deveria partir do consumidor, que escolheria se quer ou no ingerir um produto fruto de clonagem. Eles garantem que a tecnologia segura e que no h qualquer problema com a carne ou leite clonados. Outro argumento que seria um grande desperdcio eliminar todos os animais j clonados, ainda mais sendo comprovadamente eficientes.

Clonar um animal, no entanto, ainda muito caro. Nos Estados Unidos custa em mdia US$ 17 mil (este valor diminui se forem feitas mais cpias), mas o resultado garantido, pois o animal ter exactamente as mesmas qualidades do seu original. J na concepo natural, as probabilidades de ter uma cria com as mesmas qualidades dos pais so de 5% a 10% nas fmeas e at 50% entre os machos.

O objectivo da investigao da clonagem humana nunca foi clonar pessoas ou criar bebs para no futuro serem dadores de partes ou produtos humanos. A investigao tem como objectivo obter clulas estaminais para curar doenas

As clulas estaminais so clulas cujo destino ainda no foi "decidido". Podem transformar-se em vrios tipos de clulas diferentes, atravs de um processo denominado "diferenciao". Nas fases iniciais do desenvolvimento humano, as clulas estaminais do embrio "diferenciam-se" em todos os tipos de clulas existentes no organismo - crebro, ossos, corao, msculos, pele, etc..

Os cientistas esto entusiasmados com a possibilidade de controlar o espectacular poder natural destas clulas para curar vrios tipos de doenas. Por exemplo, as doenas de Parkinson e Alzheimer resultam de leses em grupos de determinadas clulas no crebro. Ao fazer um transplante das clulas estaminais de um embrio para a parte do crebro com leses, os cientistas esperam substituir o tecido do crebro que se perdeu. Num futuro prximo, a investigao das clulas estaminais poder revolucionar a forma de tratamento de muitas "doenas mortais" como, por exemplo, acidentes vasculares cerebrais, a diabetes, doenas cardacas e at mesmo a paralisia.

As atitudes relativamente utilizao de clulas estaminais embrionrias para fins de investigao e tratamentos mdicos variam de pas para pas. Na Alemanha, por exemplo, a remoo de clulas estaminais de um embrio humano considerada ilegal. Na Gr-Bretanha legal mas, de acordo com regulamentos rigorosos, os cientistas britnicos podem utilizar embries humanos para investigao at 14 dias aps a fertilizao. Nesta altura, o embrio uma bola de clulas com cerca de um quarto do tamanho de uma cabea de alfinete (0,2 mm). Muitos pases ainda no possuem leis claras que regulem a investigao de clulas estaminais humanas. Uma vez que a utilizao de embries uma questo controversa eticamente, os cientistas em todo o mundo esto procura de outras fontes de clulas estaminais. As clulas estaminais encontradas na medula ssea dos adultos so uma possibilidade. Estas clulas tm o potencial para se "diferenciarem" em diferentes glbulos vermelhos ao longo do ciclo da vida. No futuro, os cientistas esperam manipular estas clulas estaminais adultas para que, em vez de produzirem apenas glbulos vermelhos possam produzir clulas do crebro, fgado, corao e clulas nervosas.

Existem actualmente pelo menos 100 000 embries excedentrios congelados armazenados por toda a Unio Europeia. Estes embries foram criados como uma fase de rotina dos tratamentos da esterilidade (FIV). Um nico ciclo de tratamento de FIV envolve normalmente a fertilizao simultnea de vrios ovos. De seguida, vrios ovos fertilizados so reimplantados na me e os restantes so congelados, caso a primeira tentativa de gravidez no seja bem sucedida. Se a mulher sujeita FVI engravidar de imediato, o casal pode optar por no utilizar os restantes embries. Em alguns pases, os casais podem optar por doar os embries para investigao ou pela sua eliminao. No entanto, nunca chegou a ser tomada uma deciso sobre o destino de alguns embries armazenados. Nos ltimos 20 anos, desde o incio da FIV, muitos dos dadores de ovos e esperma mudaram de casa, voltaram a casar e mudaram de nome ou talvez at j tenham morrido. As clnicas de fertilidade podem no conseguir encontr-los. O destino de muitos embries armazenados , por isso, incerto. Uma segunda fonte de embries para o fornecimento de clulas estaminais, ainda mais controversa, seria a criao de embries somente para investigao ou tratamento. Contudo, j existem milhes de espermatozides e milhares de ovos no fertilizados congelados em clnicas de FIV em toda a Europa. Se os espermatozides fossem utilizados para fertilizar os ovos, existiriam ainda mais embries para fornecer clulas estaminais de modo a curar doenas.

Medula ssea de adultos Uma fonte promissora de clulas estaminais poderia ser a medula ssea de um adulto. As clulas estaminais da medula ssea dos adultos produzem normalmente glbulos vermelhos e clulas da medula ssea. At h pouco tempo, os cientistas pensavam que era impossvel a estas clulas da medula ssea "voltar atrs no tempo" e reinventarem-se a elas prprias para produzirem tipos de clulas completamente diferentes como, por exemplo, clulas do crebro, clulas nervosas, do intestino ou da pele. Nos Estados Unidos os cientistas identificaram, recentemente, uma clula estaminal da medula ssea de adultos que pensam poder desenvolver-se noutro tipo de clulas. " algo de extraordinrio", afirma o perito em clulas estaminais Austin Smith do Centre for Genome Research em Edimburgo, Reino Unido. No s as clulas estaminais retiradas de um adulto com o seu consentimento seriam eticamente aceitveis para a maioria das pessoas e governos, como seriam tambm melhores para os pacientes. Imagine que portador de uma doena que est a matar as clulas do crebro. As clulas estaminais poderiam ser retiradas da sua medula ssea, seriam manipuladas no laboratrio para se tornarem em clulas cerebrais e voltariam a ser implantadas no seu crebro - no existindo, assim, uma rejeio imunitria do transplante.

Caso funcione, esta uma perspectiva muito entusiasmante. Os primeiros resultados parecem promissores, mas os cientistas no tm ainda conhecimento da versatilidade exacta das clulas estaminais da medula ssea. Esto muito mais confiantes sobre o que as clulas estaminais dos embries possam fazer. Tipos diferentes de clulas estaminais poderiam resultar mais eficazmente em tratamentos de doenas diferentes, por isso, a maioria dos cientistas optaria por continuar a investigao de ambos os tipos. Sangue placentar Uma ltima opo como fonte de clulas estaminais o sangue do cordo umbilical que normalmente eliminado no parto. Algumas empresas recolhem o sangue da placenta e, atravs de uma taxa, armazenam-no caso a criana venha a adoecer. Esta tcnica prev que as clulas estaminais recolhidas desta forma possam ser utilizadas para tratar problemas sanguneos como, por exemplo, leucemia e algumas perturbaes genticas e imunitrias. No futuro, o sangue do cordo umbilical poder vir a ser uma fonte de clulas estaminais para curar acidentes vasculares cerebrais, a diabetes, a doena de Parkinson e a distrofia muscular.

Em 2004, o sul-coreano Woo Suk Hwang reinvidicou ter clonado clulas estaminais embrionrias humanas, mas mais tarde descobriu-se que falsificara os resultados. At publicao deste trabalho, todos os esforos para o fazer tinham sido infrutferos, pelo que esta descoberta , nas palavras de Robert Lanza da Advanced Cell Technology em Los Angeles, California, equivalente a quebrar a barreira da som. A preparao de uma linha de clulas estaminais embrionrias implica: a criao de um zigoto, o seu desenvolvimento at a fase de blastocisto e a remoo da massa celular interna do blastocisto. No caso da clonagem teraputica (ou reprodutiva), o zigoto preparado introduzindo DNA de uma clula diferenciada num vulo a que foi retirado o material gentico. Na ovelha Dolly foi introduzido o DNA retirado de uma clula mamria adulta, j diferenciada, no caso do Semos uma clula da pele.

O sucesso do trabalho da equipa de Shoukhrat Mitalipov na OHSU residiu no mtodo que utilizaram para identificar e extrair os ncleos do vulos, o software especializado de visualizao Oosight Spindle Imaging System. Todas as tentativas anteriores de outros grupos de investigao resultavam em vulos danificados, que no se dividiam ou desenvolviam, devido dificuldade de extraco dos ncleos.

Como explicou Mitalipov, Embora tenham sido necessrias centenas de tentativas para desenvolver estas linhas de clulas estaminais embrionrias, o trabalho mostra que pode ser feito e levar ao apuramento da tcnica que tornar o processo mais eficiente e levar a uma maior taxa de sucesso. Este o prximo passo para o nosso grupo de investigao enquanto outros cientistas continuaro a investigar a promessa de terapias baseadas em clulas estaminais.

Os geneticistas foram alm da reproduo sexual: inventaram uma nova forma de conceber vida. O DNA de uma espcie pode agora ser adiccionado ao de outra, produzindo-se assim animais geneticamente alterados: os transgnicos. Pode fazer-se um grande nmero de seres idnticos mas tambm se podem fazer alteraes genticas com uma eficincia razovel. Passou-se do ponto em que era apenas um projecto de pesquisa para a comercializao. Pensase que dentro de poucos anos haver certamente um grande nmero de clones disponveis para compra. A indstria de clonagem grande negcio. Empresas de biotecnologia apressam-se a patentear a tecnologia de clonagem. Do grupo de cientistas que domina a clonagem, o Dr. James Robl Geneticista da Universidade de Massachusetts, detm o recorde de clones geneticamente alterados.

Existem j muitos animais que so potenciais fbricas de medicamentos. Os geneticistas experimentaram adicionar um gene humano ao DNA de uma vaca. O objectivo era o de obter uma vaca feita por encomenda para produzir medicamentos raros e vitais no seu leite para vtimas de queimaduras, doentes com fibrose cstica (funcionamento anormal das glndulas produtoras do muco, suor, saliva, lgrima e suco digestivo) ou hemoflicos (incapacidade de controlo de hemorragias). A vaca transgnica pode tornar mais acessveis estes medicamentos, que so normalmente dispendiosos. E no s isto que se pode fazer com o leite de vaca humanizado. J h vacass que produzem uma protena humana no leite. No limite podemos prever a substituio de todas as protenas do leite da vaca pelas do leite humano. Ao mugir uma vaca, retiraramos leite humano. Todos os anos h cerca de 55.000 pessoas em lista de espera para o transplante de um rgo que lhes possa mudar a vida. Os porcos transgnicos podem ser os futuros dadores. No entanto, antes de um transplante destes poder ser feito, h ainda muitos outros obstculos a ultrapassar e um dos maiores o perigo da introduo de vrus estranhos na raa humana, uma vez que sempre que interferimos com a natureza, as consequncias so uma surpresa.

Quando esta tcnica de clonagem for aperfeioada alguns dos animais mais raros e em perigo de extino podero ser salvos, como por exemplo os pandas, os tigres siberianos ou o leo-dourado. H algo de ainda mais espantoso pode estar a desenhar-se no horizonte: alguns cientistas acreditam poder criar clones a partir dum DNA antigo, com o objectivo de ressuscitar espcies extintas. A confirmar-se, poderemos recriar um verdadeiro Parque Jurssico!!!