IDENTIFICACIN DE LPIDOS

1. Objetivos Reconocer el efecto de colorantes como el Sudan III y la tinta azul en la identificacin de lpidos. Identificar la solubilidad de los lpidos, en un disolvente polar y uno apolar, utilizando agua y ter respectivamente. Realizar una reaccin de saponificacin y reconocer el efecto de las sales como el NaOH al unirlas a los cidos grasos. Identificar el producto de la reaccin de saponificacin.

Aceite de cocina Al agitar En Reposo

Solubilidad Solubilidad en ter en Agua dietlico Soluble Se forma emulsin Soluble Insoluble, formacin de dos fases

Para la saponificacin de grasas se utilizaron dos tipos; grasa animal (porcina) y vegetal (aceite de girasol), a dos tubos de ensayo con 2ml de cada grasa se le agregaron 2ml de NaOH, se agitaron y pusieron a calentar a bao maria. Tabla 3. Observaciones de saponificacin. Lpidos Observaciones Aceite de girasol Se form el glicerol, jabn y restos de grasa. Tena olor a glicerina Grasa de cerdo Haba formacin de 3 fases, restos de grasa de cerdo, jabn y glicerina. Tena olor fuerte a grasa de cerdo. 3. Anlisis de resultados Los lpidos son un conjunto muy heterogneo de biomolculas cuya caracterstica distintiva aunque no exclusiva ni general es la insolubilidad en agua, siendo por el contrario, solubles en disolventes orgnicos. Estn constituidas bsicamente por tres elementos: carbono

2. Resultados Para la tincin de lpidos se utiliz dos tubos de ensayo con 2ml de aceite, a uno se le adiciono 5 gotas de tinta azul y al otro tubo, 5 gotas de Sudan III. Tabla 1. Resultado de la coloracin con tinta azul y Sudan III. Colorante Al agitar Sudan III Tinta azul Color rosa Color azul Reposo

Color rosa Color azul y se forman dos fases, presenta precipitado. Para la prueba de solubilidad de lpidos en agua y en disolventes orgnicos, se utiliz 2ml de agua y de ter dietlico, posteriormente se les agreg 1 ml de aceite de cocina. Tabla 2. Solubilidad del aceite de cocina en agua y en ter dietlico.

(C), hidrgeno (H) y oxgeno (O); en menor grado aparecen tambin en ellos nitrgeno (N), fsforo (P) y azufre (S)1. Los lpidos son una de las macromolculas ms importantes que poseen las clulas, pues cumplen una cantidad de funciones muy importantes en los organismos; estas biomolculas son el principal componente de la membrana celular(fosfolpidos), que es el lmite de las clulas y que controla la salida y la entrada de distintas sustancias al interior de la clula; los lpidos tambin son las principales reservas energticas(triglicridos), por su capacidad de empaquetar grandes cantidades de ellos y ocupar muy poco espacio; y son molculas seal como las hormonas(cortisol)2. Existen diferentes pruebas que son de gran importancia para su caracterizacin como lo son la tincin, pruebas de solubilidad o reacciones caractersticas de estas molculas; como lo es la saponificacin. Para la conocer el efecto de los colorantes en la identificacin de lpidos, se realizaron dos muestras con aceite y se agreg tinta azul y sudan III a cada una de las muestras respectivamente. En el que se le agrego sudan III, al agitar la muestra, tom un color rosa y al dejarlo en reposo, continuo ese mismo color. En el segundo, al agregarle la tinta azul y al agitarlo, la muestra tomo un color azul pero al dejar en reposo, se formaron dos fases, mostrando un precipitado. Esto se debe a que el sudan III (Figura 1) es un tinte del tipo lisocromo, es decir, soluble nicamente en grasas, principalmente por las interacciones hidrofbicas, entre las partes apolares de ambos compuestos. Adems existen interacciones dbiles, en este caso los puentes de hidrogeno entre el carboxilo de los cidos grasos y los nitrgeno y el hidroxilo del Sudan.

Figura 1. Estructura del Sudan III Al interaccionar con el aceite, reacciona dando un color rosa, lo que permite identificar la presencia del lpido y despus de la agitacin permanece la coloracin ya que el sudan es un compuesto orgnico y por lo tanto va a disolverse totalmente en el aceite formando una mezcla homognea. En el caso de la tinta azul, que es un compuesto insoluble en grasas, y esta compuesto por diferentes componentes adems del colorante, como alcoholes y resinas, minimizan su interaccin con los lpidos. Estos componentes adicionales, al dejar en reposo, la mezcla del aceite y la tinta forman un precipitado. Aqu se ven dos capas, la de abajo corresponda a la tinta y la de arriba al aceite, siendo as una mezcla heterognea.

Todas las sustancias poseen unas fuerzas intermoleculares que le confieren ciertas propiedades fsicas como el punto de ebullicin, de fusin, solubilidad, entre otras. Fuerzas ion- dipolo, dipolo-dipolo, fuerzas de dispersin de London y enlaces por puentes de hidrgeno son las fuerzas intermoleculares, las cuales estn relacionadas con la polaridad de las molculas. La solubilidad se ve afectada por las atracciones intermoleculares tanto del soluto como del solvente en la formacin de una disolucin, cuando se presentan los mismos tipos de interacciones en diferentes sustancias se dice que stas son miscibles, es decir que

se form una disolucin3. El agua es solvente polar, debido a la presencia de un tomo electronegativo como el oxgeno; en cuanto a las atracciones intermoleculares presentes, el agua tiene fuerzas de dispersin y enlaces por puentes de hidrogeno que son caractersticos por formase entre un tomo de hidrogeno de un enlace polar y un par de electrones libres, normalmente de oxgeno, nitrgeno o flor (Figura 1). Figura 2. Estructura triglicridos. Teniendo en cuenta las propiedades polares del agua, el aceite no es soluble en este solvente y forma dos fases, la superior es la del aceite, pues su densidad es menor que la del agua; sin embargo cuando se agita la mezcla de agua y aceite se forma una emulsin, que se da por parte de dos lquidos inmiscibles entre si, que cuando es agitado uno de los lquidos se dispersa en forma de gotas dentro del otro componente. La fase interna o dispersa es el aceite y la externa es el agua4. Al dejar reposar la emulsin desaparece y se forman de nuevo las dos fases, pues para mantenerla se necesitan de agentes emulsificantes molculas anfipticas, que son solubles en por lo menos uno de los componentes de la emulsin, esto ayuda a la estabilizacin de las 2 fases. Despus se realiz una de las reacciones caracterstica de los lpidos llamada saponificacin. La reaccin de saponificacin es la hidrolisis alcalina de una grasa, es decir un triglicrido, en donde se forma una sal del cido graso, que puede ser sdica o potsica y glicerina, la sal formada es conocida comnmente como jabn5 (Figura 3). Cualquiera de los lpidos que contenga

Figura 1. Interaccin puentes hidrogeno en molculas de agua.

de

En el caso del ter, ste es un disolvente apolar, que presentan fuerzas de dispersin de London, pues predominan los enlaces C-C y C-H que son apolares, sobre el C-O que es polar. Los lpidos son molculas apolares muy variadas que estn compuestos principalmente por cidos grasos, que son cidos carboxlicos de cadena carbonada larga. En los aceites y grasas normalmente estn presentes los triglicridos, que son molculas compuestas por un glicerol y tres cidos grasos. Las fuerzas intermoleculares que predominan son las de dispersin de London, aunque tenga una parte polar del glicerol esta no tiene gran impacto. Por lo anterior el aceite es completamente soluble ter dietlico o en cualquier otro solvente orgnico; teniendo en cuenta que similar disuelve similar.

un cido graso puede ser saponificado; como los esfingolpidos, glicolpidos y triglicridos.
an

Figura 3. Saponificacin En este caso se utiliz dos tipos de grasas, aceite de oliva y grasa de cerdo. Las grasas vegetales son normalmente liquidas a temperatura ambiente ya que los cidos grasos que las componen son polinsaturados y minimizan su capacidad de empaquetamiento por ende disminuye su punto de fusin, caso contrario en es el de las grasas animales, los cidos grasos que las componen son saturados o con pocas insaturaciones, que hacen que a temperatura ambiente sean slidos, por su capacidad de empaquetarse6. Para que la saponificacin se de completamente hay que ser cuidadosos con la cantidad de lcali usado, en este caso NaOH, pues de este depender la hidrolisis completa de la grasa. Con aceite vegetal se espera la saponificacin completa, ya que est compuesto nicamente por triglicridos, con un tipo de cido graso. Pero en el experimento la saponificacin no se dio completamente, se form el jabn y la glicerina; pero quedaron algunos restos de grasa, esto sucedi por la cantidad inadecuada de hidrxido de sodio utilizada, que no fue suficiente para lograr la reaccin completa. De igual manera el olor del tubo de ensayo era de glicerina. En el caso de la grasa de cerdo, es de esperarse que quedaran restos de grasa sin saponificar pues estn compuestas por

triglicridos con diferentes cidos grasos, de diferentes longitudes y saturados o poco insaturados. Por lo que la saponificacin debe tener condiciones de reaccin especficas para una reaccin completa y tanto para el aceite vegetal como para la grasa de cerdo fueron las mismas; en este caso luego de hacer la saponificacin de la grasa se observaron tres capas, glicerol (inferior), jabn (intermedia), y restos de grasa (superior). En el tubo de ensayo predominaba el olor a grasa de cerdo pues tena una cantidad considerable de grasa sin saponificar. 4. Conclusiones Se logr identificar que el sudan III es un colorante soluble en grasas que permite identificar la presencia de lpidos, la tinta azul no lo hace posible posible ya que es soluble es en un solvente polar. Los lpidos estn compuestos por cadenas hidrocarbonadas largas, que permite interacciones de dispersin de London, como el ter que es un disolvente apolar, pues est compuesto en su mayora tiene enlaces C-H C-C, por esta razn se demostr que el aceite se disuelve en el ter u otro compuesto orgnico. Se observ que el aceite es insoluble en el agua, por lo que es un solvente polar, y se observaron las dos fases que se forman, siendo el aceite el componente de la fase superior debido a que tiene una densidad menor que la del agua. Se logr hacer una emulsin al agitar el agua con el aceite, pero para que una emulsin permanezca es necesario de agentes emulsificantes. Se logr identificar el papel del NaOH en la reaccin de

saponificacin, siendo este el que permita la hidrolisis completa de la grasa. Se identific que el producto de una reaccin de saponificacin completa es jabn y glicerina, se esperaba que el aceite vegetal reaccionara completamente, pero por adicionarle una cantidad incorrecta de NaOH, no reacciono completamente y la muestra quedo con residuos de grasa.

5. Referencias 1. Lpidos. [Citado el 1 de Marzo de 2013]; Disponible en: http://www.biologia.edu.ar/macro moleculas/lipidos.htm.

2. STYER, Lubert, BERG; Jeremy M. y TYMOCZO. John L.Bioquimica. 6 ed. Editorial Revert., 2008. p.303, 309.

3. BROWN, Theodore. Qumica de la ciencia central. 10 ed. Pearson Educacin de Mxico S.A, 2009, cap. 11 p 440-444, cap. 13 p528536. 4. Emulsiones. [Citado 1 de Marzo/ 2013]; Disponible en: http://es.scribd.com/doc/49496012 /Emulsiones 5. QUESADA, Silvia. Manual de experimentos de laboratorio para bioqumica. Editorial universidad estatal a distancia, 2007. Pg. 62. 6. BRUICE, Paula Y. Qumica Orgnica. 5 ed. Univerity of California, Santa Barbara, Pearson Educacin de Mxico, S.A, 2008, Pg. 1163-1166.