IDENTIFICACION DE LIPIDOS.

II Semestre

LABORATORIO No. 2 IDENTIFICACION DE LPIDOS

I Objetivos
2.1. Objetivo General Identificar las caractersticas principales de los lpidos simples por medio de diferentes tcnicas segn sus propiedades fsicas y qumicas.

II LISTADO DE MATERIALES, EQUIPOS E INSTRUMENTOS

La Tabla 1, muestra los equipos e instrumentos necesarios para llevar a cabo la prctica. Tabla 1. Equipos e instrumentos
tubos de ensayo gradilla centrifuga varillas de vidrio mechero vasos precipitados pipetas agitador de vidrio mortero solucin de NaOH al 40 % solucin de Sudan III Gotero tinta china roja metanol cloroformo

Emulsin: Es la preparacin que se obtiene de mezclar dos ingredientes que son incompatibles entre s; como el agua y el aceite (son heterogneos; es decir insolubles entre s) al juntar estas dos sustancias una de ellas se separa formando glbulos sin llegar a disolverse. Para obtener un lquido homogneo de dos sustancias que no se pueden unir, se utiliza un agente emulsionante como en este caso un detergente, el jabn con el fin de estabilizar la emulsin.

acido clorhdrico concentrado Aceite de oliva

III DEFINICIONES Y CONCEPTOS

Saponificacin : Es la reaccin que produce la formacin de jabones, la principal causa es la disociacin de las grasas en un medio alcalino separndose glicerina y cidos grasos , estas ltimas se asocian inmediatamente con los lcalis constituyendo las sales sdicas de los cidos grasos.

Tincin: o coloracin es un tcnica auxiliar utilizada en microscopa para mejorar el contraste en la imagen viste en el microscopio, esto implica agregar un colorante especifico (esto significa que se una de manera selectiva ya sea a ADN, protenas, lpidos, carbohidratos, etc.) a un sustrato para cualificar o cuantificar la presencia de un determinado compuesto. Un ejemplo de colorante liposoluble es el sudan III el cual tie lpidos neutros de color rojo.

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Tomamos un dos tubos de ensayo un uno vertimos aceite de oliva y en el otro aceite vegetal, luego le agregamos dos mililitros de NaOH al 40% y lo agitamos despus lo pusimos al bao de maria por 30 minutos al cabo de este tiempo podemos observar que la solucin estaba separada en tres fases , una inferior que es clara que contiene la solucin de hidrxido sobrante y glicerina, otra intermedia semislida que es el jabn formado y una superior lipdica que es aceite inalterado. OLIVA Solubilidad: Es la capacidad que tiene un compuesto de disociarse frente a otro de caractersticas similares, por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgnicos, como el ter cloroformo, acetona, benceno, etc; es decir son solubles en sustancias a polares como ellos. VEGETAL

2. Emulsin
En un tubo de ensayo vertimos 2 ml de agua y le aadimos 1 ml de aceite vegetal, lo agitamos con una varilla de vidrio, observamos un aspecto lechoso que al dejar reposar se separan quedando el aceite sobre el agua lo que indica que es una emulsin inestable porque no se separan las fases. Luego le aadimos un ml de detergente liquido y agitamos de nuevo, al dejar reposar comprobamos que no se separaron las fases lo que indica que es una emulsin estable.

Extraccin de lpidos de la yema de Huevo:

Tomamos un huevo, separamos la yema, la pesamos y la vertimos en un mortero luego le agregamos 10 ml de una mezcla de cloroformo, acido clorhdrico y lo mezclamos hasta que la yema quedo integrada en la mezcla luego la empacamos en un tubo de centrifuga y lo pusimos en la centrifuga.

IV DESARROLLO DE LA PRCTICA

3. Tincin 1. Saponificacin
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IDENTIFICACION DE LIPIDOS. II Semestre Tomamos dos tubos de ensayo les vertimos a cada uno dos ml de aceite le agregamos a uno de los tubos 5 gotas de tinta china roja y al otro le agregamos 5 gotas de sudan, al observar los dos tubos, analizamos que el tubo al cual le agregamos el sudan el aceite se tio de color, mientras al que le vertimos la tinta se notaba que se separan quedando la tinta en la parte inferior y algunas partculas encapsuladas en las molculas del aceite. Tinta Sudan III Tinta roja

densidad. En la segunda fase queda la gran cantidad de colesterol de la yema del huevo y finalmente encontramos la tercera fase que es la parte nutritiva del huevo que son las protenas acompaada de otros metales como Fe, Zn, Cu, Mg, entre otros. luego sirviendo de base un papel filtro desocupamos en tubo de centrifuga el colesterol y se limpia con agua destilada para poder llevar al horno y saber el peso exacto del colesterol que se obtuvo de la yema del huevo.

4. Solubilidad.
Tomamos dos tubos de ensayo vertimos 2 ml de aceite a cada uno de ellos, luego le agregamos a uno 2 ml de ter y al otro la agregamos 2ml de agua los agitamos y dejamos reposar, despus de unos minutos observamos que el aceite se ha disuelto en el ter mientras que el tubo al que se le agrego agua se separaron dos fases quedando el aceite sobre el agua.

5. Reaccin del colesterol Luego de que se llevo a cabo la disolucin de la yema del huevo en otros reactivos y que se centrifugo se dejo una noche en reposo dentro de la centrifuga, en ese proceso se obtuvo una primera fase en la que se encontr solventes sobrantes como cloroformo, metanol ,ect quedan en la primera fase por su menor
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V ANALISIS

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Saponificacin: Como ya hemos citado con

anterioridad, observaremos tres fases: la inferior clara con la solucin que sobra de hidrxido de sodio (sosa) junto con la glicerina que se ha formado, algo que nos revela que se ha producido la reaccin de saponificacin perfectamente al haber obtenido un alcohol, y otra fase intermedia semislida con el jabn formado, otro aspecto que nos aclara definitivamente que si se ha producido esa reaccin de saponificacin, puesto que ya hemos obtenido los dos productos de ese proceso: el jabn y un alcohol. Observamos tambin una fase superior lipdica de aceite que no ha participado en la reaccin, se encuentra inalterado. Tambin podemos aclarar que este primer procedimiento se hizo con aceite vegetal, pero tambin se realizo con aceite de oliva el cual no saponifico de la misma forma que el vegetal. Por qu no se puede saponificar el aceite de oliva? Rta/: porque el aceite de oliva es un cido graso insaturado que impide formar cadenas de cidos grasos extendidas lo cual provoca el enrarecimiento del jabn generando una composicin de jabn blando como si estuviera mezclada pero en una pequea proporcin por lo cual por norma general las grasas duras (con abundancia de cidos grasos saturados) requieren disoluciones ms concentradas es decir, menor cantidad de agua. Al contrario, el aceite de oliva o grasa insaturada requieren disoluciones ms diluidas, con mayor proporcin de agua por lo cual no logra separarse. Emulsin: En general las emulsiones no son estables pues tienden a separarse, como ocurre si mezclamos agua y aceite, donde observaremos que las gotitas tendern a unirse diferencindose del agua. Pero pueden estabilizarse si se les agrega un elemento emulsionador. En la leche actan como tales los albuminoides. En la mayonesa es la lecitina la que impide que se unan las gotitas de aceite. Un gran agente emulsificante es el jabn. Tincin los lpidos se colorean selectivamente de rojoanaranjado con el colorante sudn III. esto es debido a que el sudn III es un colorante lipfilo (soluble en grasas). por esa afinidad a los cidos grasos hace que la mezcla de stos con el colorante se ponga de color rojo, mezclndose totalmente y convirtindose en un

Solubilidad Se ver cmo el aceite se ha disuelto en el ter (disolvente orgnico) y, en cambio no lo hace en el agua al ser insoluble en ella y el aceite subir debido a su menor densidad, quedndose separados por ser dos lquidos inmiscibles. Reaccin del colesterol El proceso realizado en esta prctica, mediante la experimentacin se logr, la extraccin de lpidos utilizando un solvente orgnico, lo cual permiti el anlisis y determinacin de ellos como fue el peso de colesterol existente en la yema del huevo y sus dems nutrientes observados, especificando que el peso en total no es exacto ya que se perdi gran parte de la muestra.

VI CUESTIONARIO
Porque en la saponificacin la glicerina aparece en la fase acuosa? Porque en la saponificacin, se utilizan grasas y stas estn compuestas por cidos grasos y glicerina. Como resultado se obtiene una fase semislida que es la sal de sodio de los cidos grasos (el jabn), por lo tanto, en la fase acuosa quedar el alcohol (glicerina) como subproducto de la elaboracin del jabn puesto que es parcialmente soluble en agua, por lo que no hay razn para que no est presente en esta forma. Qu enzima logra en el aparato digestivo la hidrolisis de las grasas? La enzima que logra la hidrolisis de las grasas en el estmago es la enzima lipasa gstrica y en el intestino delgado la lipasa pancretica-colipasa. Por qu la emulsin con el jabn es ms estable que con el agua? La cadena hidrocarbonada no es soluble en agua, pero tiene afinidad con las grasas, por lo que se la denomina cola lipoflica o liposoluble. El extremo inico tiene cargas elctricas y tiende a disolverse en el agua. Se lo llama cabeza hidrofilia o hidrosoluble. Si se disuelve jabn en agua y se disuelve jabn en agua y se agrega un aceite, ste (por su menor densidad) forma una fase sobre el agua. Las molculas de jabn se orientan y se disponen en la interface con la cabeza hacia el agua y la cola hacia el aceite.

colorante especfico utilizado para revelar la presencia de grasas.

IDENTIFICACION DE LIPIDOS. II Semestre Si se agita este sistema, el aceite se subdivide en gotitas y cada una es rodeada por agua. Las molculas de jabn se orientan de la manera indicada. Cada glbulo de grasa tiene a su alrededor cargas elctricas del mismo signo que, al repelerse, hacen que las partculas grasas queden separadas entre s, formando una emulsin estable. En caso contrario, si no existiera el jabn, al agitar el sistema agua aceite, se formara en el primer momento una emulsin, pero al cesar la agitacin, debido a la gran atraccin entre sus molculas, las gotitas se uniran entre si formando nuevamente dos capas. Se dice, por esta propiedad, que el jabn emulsiona las grasas. La yema de huevo contiene, adems, lecitina o fosfatidilcolina y otros fosfolpidos; grasas que contienen fsforo, con interesantes propiedades para la salud. Lo cierto es que el huevo es la mejor fuente diettica de colina. Este compuesto participa en mltiples reacciones metablicas, est presente en las membranas celulares y en un neurotransmisor denominado acetilcolina. Su yema es rica en grasas: triglicridos, fosfolpidos (lecitina) y colesterol. El aporte de colesterol por yema es de alrededor de 250 miligramos. Tambin aporta minerales como fsforo, zinc y selenio, adems de vitaminas: A, D y del complejo B, especialmente, vitamina B12, cido flico y biotina.

Indica lo que ocurre con la mezcla aceiteSudan III y aceite-tinta y explica a qu se debe la diferencia entre ambos resultados. Cuando se mezcla el aceite con el Sudn III, todo el aceite se tie de rojo puesto que es un colorante (soluble en grasas) y debido a esa afinidad se utiliza para revelar la presencia de grasas. Pero la tinta roja no es soluble en grasas, por esa razn, el aceite no se tie de rojo con la tinta china roja no se mezclan, y la tinta se deposita en el fondo porque la tinta se encapsula en las molculas del aceite. Qu tipo grasas se encuentran en el huevo y cules son sus funciones biolgicas?

VII BIBLIOGRAFA [1] Prctica N 2 Compuestos de inters bioqumico II, unidad 7, pg. 176-185 http://bibliotecadigital.ilce.edu.mx/sites/cienci a/volumen1/ciencia2/51/htm/sec_10.html.

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IDENTIFICACION DE LIPIDOS

LORENA LUQUE ANYI CASTRO NATALY VASQUEZ

PROFESORA: DIANA MARTINEZ

F. ENFERMERIA BIOQUIMICA 2012

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