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ANDROLOGIA BIOQUIMICA SEMINAL El semen o eyaculado es una suspensión de las cé lulas reproductivas,

ANDROLOGIA

BIOQUIMICA SEMINAL

El semen o eyaculado es una suspensión de las células reproductivas, los espermatozoides, en un líquido complejo al que denominamos “plasma seminal“.

Los componentes del plasma seminal son el resultado de diversas glándulas Exocrinas:

Glándulas uretrales de Litré: Producen un líquido mucoso, que lubrica la uretra.

Glándulas Bulbouretrales de Cooper: Secreción rica en mucoproteinas, galactosa y Ácido oxálico.

Próstata: Produce Acido Cítrico, fosfatasa ácida y básica, inositol, espermita, Glucosa 6 fosfato deshidrogenasa, transminasa glutámico oxalacética, lisozima, α- amilasa, β- glucosidasa, γ-glutamil transpeptidasa, plasminógeno, albúmina, Láctico dehidrogenasa, calcio, magnesio, zinc, maltasa, así como otros productos en menor cantidad.

Vesículas seminales: Contiene fructosa, lactoferrina, prostaglandinas, potasio, fósforo, Glicerofosforilcolina, inhibidores de las proteasas entre otros.

Epidídimo: Aporta Carnitina, glicerofosforilcolina, α-glucosidasa neutra, glucurónidos, ácido siálico, fosfolípidos y ácido láctico.

La OMS propone las determinaciones de Fructosa, Acido Citrico, α-Glucosidasa, zinc, Fosfatasa ácida.

Valores de Referencia de los principales marcadores bioquimicos del plasma seminal:

Sustancia

Lugar de Producción

Valor de Referencia

Zinc

próstata

2,4 μmol/ eyaculado

Citrato

próstata

52 μmol/ eyaculado

Fosfatasa ácida

próstata

200 U/eyaculado

Fructosa

Vesículas Seminales

13µmol/eyaculado

α-Glucosidasa neutra

Epidídimo

20 mU/eyaculado

α -Glucosidasa neutra Epidídimo 20 mU/eyaculado HOMOGENEIDAD ESPERMÁTICA. O´Donnell, 32 1ºE – 28009
α -Glucosidasa neutra Epidídimo 20 mU/eyaculado HOMOGENEIDAD ESPERMÁTICA. O´Donnell, 32 1ºE – 28009

HOMOGENEIDAD ESPERMÁTICA.

O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España

T: 902 102 163

20 mU/eyaculado HOMOGENEIDAD ESPERMÁTICA. O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España T: 902 102 163 F:

F: 915 040 440

MARCADORES BIOQUIMICOS EPISCREEN Test de la α -Glucosidasa El volumen de la actividad de la

MARCADORES BIOQUIMICOS

EPISCREEN

Test de la α-Glucosidasa

El volumen de la actividad de la α-glucosidasa en semen, está relacionada con la actividad secretora del epidídimo. La valoración de este marcador bioquímico enplasma seminal de pacientes con Oligo o Astenozoospermia, puede reflejar una parcial obstrucción o una deficiencia funcional del epidídimo.

El empleo del test evita llevar a cabo una biopsia de testículo, por su alta fiabilidad diagnóstica.

Ref.

MT 255

Presentación

25 test

Caducidad

12 meses

Conservación

Temp. ambiente

FRUCTOSCREEN

Test para determinar la cantidad de Fructosa en el plasma seminal.

La Fructosa constituye la mayor fuente de energía para los espermatozoides. La determinación de fructosa en el plasma seminal, puede proporcionar información sobre la función secretora de las vesículas seminales.

Ref.

MT 252

Presentación

96 test

Caducidad

12 meses

Conservación

2º - 4ºC

CITRICSCREEN

Test para determinar la cantidad de Acido Cítrico en Plasma seminal.

La determinación de Acido Cítrico proporciona información acerca de la función secretora de la próstata.

Ref.

MT 254

Presentación

96 test

Caducidad

12 meses

Conservación

Temp. ambiente

O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España

T: 902 102 163

12 meses Conservación Temp. ambiente O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España T: 902 102 163

F: 915 040 440

TINCIONES Morfología: Los espermatozoides en la mayoría de los mamíferos, presentan una morfología muy homogénea

TINCIONES

Morfología:

Los espermatozoides en la mayoría de los mamíferos, presentan una morfología muy homogénea que se correlaciona claramente con la capacidad de fertilización. Por el contrario en la especie humana se observa el fenómeno de anisozoospermia, que expresa una heterogeneidad morfológica de los espermatozoides.

El porcentaje de espermatozoides normales es la información principal en el estudio de semen basal.

Las alteraciones de los espermatozoides corresponden a cabeza, cuello, pieza intermedia y cola.

Anomalías de la cabeza:

Anucleada: Espermatozoide sin cabeza.

Alargada

Bicefálica: Dos cabezas y una sola cola.

Anomalias del cuello y/o la pieza intermedia:

Implantación Axial anómala: Algulo 45-90º de la pieza intermedia con respecto al eje longitudinal de la cabeza.

Engrosamiento, pieza intermedia marcadamente engrosada.

Gotas Citoplasmáticas: Restos citoplasmáticos superiores al 1/3 del área normal de la cabeza que se localizan en el cuello o en la pieza intermedia.

Anomalías de la cola:

el cuello o en la pieza intermedia. Anomalías de la cola: ESPERMATOZOIDES ALARGADOS CON NUCLEO ALARGADO
el cuello o en la pieza intermedia. Anomalías de la cola: ESPERMATOZOIDES ALARGADOS CON NUCLEO ALARGADO

ESPERMATOZOIDES ALARGADOS

Anomalías de la cola: ESPERMATOZOIDES ALARGADOS CON NUCLEO ALARGADO SIN ACROSOMA • Ausencia total o

CON NUCLEO ALARGADO SIN ACROSOMA

Ausencia total o parcial.

Arrollada total simple o con envoltura citoplasmática.

Arrollada parcial (final cola).

Dobles o múltiples.

Angulaciones: Angulación en la cola de 45, 90 ó 180 º.

La tinción idónea es aquella que permita la identificación de todas las estructuras del Espermatozoide, que proporcione una imagen nítida y una correcta definición.

proporcione una imagen nítida y una correcta definición. MICROCÉFALOS, GLOBULOSOS SIN ACROSOMA O´Donnell, 32 1ºE

MICROCÉFALOS, GLOBULOSOS SIN ACROSOMA

O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España

SIN ACROSOMA O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España GLOBULOSOS CON ACROSOMAS T: 902 102 163
SIN ACROSOMA O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España GLOBULOSOS CON ACROSOMAS T: 902 102 163

GLOBULOSOS CON ACROSOMAS

T: 902 102 163

F: 915 040 440

SIN ACROSOMA O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España GLOBULOSOS CON ACROSOMAS T: 902 102 163
SPERMAC STAIN Procedimiento a seguir antes de utilizar la Tinción del Spermac Stain: Lavado con

SPERMAC STAIN

Procedimiento a seguir antes de utilizar la Tinción del Spermac Stain: Lavado con PBS.

1. Se cogen 500 µl de muestra a la que se añade la misma cantidad de PBS, 500 µl.

2. Se procede a la centrifugación a 1.500 r.p.m durante 10 minutos.

3. Retiramos el sobrenadante y se añade PBS, según la concentración. Por ej, si tenemos

490

millones/ml (en 1 ml encontramos 490 millones de espermatozoides) se añaden

500

µl de PBS. Como norma por cada 100 millones se añaden 100 ml de PBS.

4. Si tuviéramos una cantidad de espermatozoides inferior a 100 millones, por ejemplo 70 ó 50, añadimos 100 ml de PBS. Se trata de tener la suficiente cantidad para poder realizar el resto de los tests diagnósticos de un seminograma.

5. Continuar con el protocolo del Spermac Satín: Fijar, teñir, secar, etc

6. Al lavar quitamos todas las impurezas, y el resultado de la tinción es mejor.

Tinción - Procedimiento:

1. Hacer una extensión de una fina capa de la muestra de semen sin diluir. Dejar secar al aire un máximo de 5 minutos.

2. Fijar la muestra por inmersión del porta un máximo de 5 minutos en una jarra de Coplin, conteniendo el fijador. El porta se deja durante toda la noche.

3. Lavar al grifo o con agua destilada. Quitar el exceso de agua utilizando un papel absorbente, teniendo cuidado de no tocar la muestra con el papel.

4. Teñir 1-2 minutos en Stain A. Lavar.

5. Teñir 1 minuto en Stain B. Lavar

6. Teñir 1 minuto en Stain C. Lavar

7. Dejar que la extensión se seque al aire.

8. Observar la muestra al microscopio, utilizando el objetivo de inmersión.

ACROSOMA

VERDE

NUCLEO

ROJO

REGIÓN ECUATORIAL

VERDE PÁLIDO

PIEZA INTERMEDIA Y FLAGELO

VERDE

Las muestras gelatinosas y congeladas deber ser diluidas 1:1 con una Solución de citrato de sodio al 3% antes de hacer la extensión.

Sin embargo, si la extensión se fija tan pronto como se haya secado al aire, este paso es innecesario.

El color de la tinción deber ser verde claro. Si se observa un color

verde oscuro, la preparación se debe dejar secar más tiempo antes de emplearse el fijador.

Ref.

MT 256

Presentación

150 – 200 tinciones

Caducidad

36 meses

Conservación

Temp. ambiente

O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España

T: 902 102 163

F: 915 040 440

36 meses Conservación Temp. ambiente O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España T: 902 102 163
LEUCOSCREEN La mayoría de los eyaculados humanos contienen leucocitos predominando los neutrófilos. La excesiva

LEUCOSCREEN

La mayoría de los eyaculados humanos contienen leucocitos predominando los neutrófilos. La excesiva presencia de estas células ( Leucocitorspermia ) indica la existencia de una infección en el tracto reproductivo. Además la leucocitospermia puede estar asociada con defectos en el semen, como por ejemplo una reducción de volumen del eyaculado, una baja concentración de esperma y baja movilidad como consecuencia de un stress oxidativo y/o la secreción de citokinas citotóxicas.

Como norma general un eyaculado normal no debe de contener más de 5mill celulas/ml, mientras que el número de leucocitos no debe exceder de 1 mill/ml. Si el semen contiene más de 1 mill/ml de células blancas, está indicando que hay una infección.

METODO Endtz, 1.972

Preparación de la Solución de Trabajo

1.- Añadir 30µl de reactivo 2 a 1 ml de reactivo 1. Esta solución es estable durante 1 día.

2.- Mezclar una gota ( 10 µl ) de esperma con una gota ( 10 µl ) de la solución de trabajo, usando el borde de un papel. Mezclarlo minuciosamente durante 1 minuto.

3.- Cubrirlo con un papel, aproximadamente 2 minutos después de la mezcla evitando que se formen burbujas de aire. La formación de burbujas se debe a la reacción de la peroxidasa.

4.- Leer el resultado después de 2 minutos al microscopio.

Interpretación: Las células teñidas de amarillo o marrón, son células con actividad peroxidasa positiva. Indica la presencia de leucocitos Neutrófilos polimorfos. Si la tinción de las células es rosa, indica la presencia de otras células.

Comentario: La formación de un sedimento en el reactivo 1 es normal. Se elimina el sedimento filtrando el contenido en un papel de filtro.

Precauciones: Evitar inhalaciones y el contacto con la piel.

Ref.

MT 259

Presentación

20 test

Caducidad

12 meses

Conservación

Temp. ambiente

Caducidad 12 meses Conservación Temp. ambiente MACRÓFAGO ‐ LEUCOCITO POLINUCLEAR. CELULA EPITELEAR
Caducidad 12 meses Conservación Temp. ambiente MACRÓFAGO ‐ LEUCOCITO POLINUCLEAR. CELULA EPITELEAR

MACRÓFAGO LEUCOCITO POLINUCLEAR.

Temp. ambiente MACRÓFAGO ‐ LEUCOCITO POLINUCLEAR. CELULA EPITELEAR PARASITADA. O´Donnell, 32 1ºE – 28009
Temp. ambiente MACRÓFAGO ‐ LEUCOCITO POLINUCLEAR. CELULA EPITELEAR PARASITADA. O´Donnell, 32 1ºE – 28009

CELULA EPITELEAR PARASITADA.

O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España

T: 902 102 163

O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España T: 902 102 163 LEUCOCITO POLINUCLEAR. CRISTALES FOSFATO DE
O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España T: 902 102 163 LEUCOCITO POLINUCLEAR. CRISTALES FOSFATO DE

LEUCOCITO POLINUCLEAR. CRISTALES FOSFATO DE ESPERMINA.

F: 915 040 440

32 1ºE – 28009 Madrid España T: 902 102 163 LEUCOCITO POLINUCLEAR. CRISTALES FOSFATO DE ESPERMINA.
INMUNOLOGIA A finales del siglo XIX, Kart Landsteiner investigó sobre las sustancias no microbianas que

INMUNOLOGIA

A finales del siglo XIX, Kart Landsteiner investigó sobre las sustancias no microbianas que inducían inmunidad humoral, fué uno de los pioneros en demostrar que el espermatozoide podría ser antigénico si se inyectaba en especies diferentes. Elie Metchnikoff que prestó más atención a la inmunidad celular demostró la inmunogenicidad de los espermatozoides cuando se inyectaban en la misma especie. En los años 50, Franklin y Dukes demostraron la presencia de anticuerpos anti-espermatozoides en mujeres con infertilidad idiopática.

Los espermatozoides son antígenos inmunogénicos para el organismo que los produce, cualquier factor que altere la integridad de la barrera hemototesticular, favorecerá un contacto entre los espermatozoides y los leucocitos, desencadenándose la formación de anticuerpos anti-espermatozoide, que se pueden encontrar en el plasma seminal, en la sangre o enlazados en los propios espermatozoides.

Test SPERMMAR

Aproximadamente un 8% de los casos de infertilidad, son debidos a causas inmunológicas. El Test Spermmar es un método fácil, rápido y exacto de detectar Anticuerpos Antiesperma. Los más utilizados en la valoración de autoinmunidad o inmunidad espermática son los IgG e IgA. Los anticuerpos IgM apenas son utilizados por su poca relevancia clínica, aparecen en el semen en una pequeña proporción debido a su gran tamaño molecular y a su breve vida media.

El SpermMar detecta anticuerpos IgG y IgA en el semen fresco. Indirectamente se puede emplear el test en el moco cervical y en el plasma seminal.

Ref.

IgG

MT 250

IgA

MT 251

Presentación

50 test

Caducidad

12 meses

Conservación

2º - 8ºC

O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España

T: 902 102 163

F: 915 040 440

12 meses Conservación 2º - 8ºC O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España T: 902 102
TINCIÓN DE VITALIDAD Un espermatozoide inmóvil no es sinónimo de espermatozoide no viable, puesto que

TINCIÓN DE VITALIDAD

Un espermatozoide inmóvil no es sinónimo de espermatozoide no viable, puesto que puede mantener todas sus estructuras normales y mostrar una vitalidad normal. En el estudio de semen basal es importante obtener el valor porcentual de la vitalidad, porque un elevado número de formas vivas pero inmóviles, puede ser indicativo anomalías severas en la cola, como ocurre con el Síndrome de Kartagener. Existen diferentes métodos para estudiar la vitalidad; unos valoran el estado en que se encuentra la membrana plasmática del espermatozoide. Mediante la utilización de un colorante que penetra a través de la membrana lesionada, se observa una coloración interna del espermatozoide que nos indica que es una célula muerta.

Vitalscreen

Ref.

MT 281 / 10-13003

Presentación

200 test

Caducidad

12 meses

Conservación

200 test Caducidad 12 meses Conservación VITALIDAD (EOSINA ‐ NIGROSINA) MADURACION NUCLEAR (AZUL
200 test Caducidad 12 meses Conservación VITALIDAD (EOSINA ‐ NIGROSINA) MADURACION NUCLEAR (AZUL

VITALIDAD (EOSINA NIGROSINA)

meses Conservación VITALIDAD (EOSINA ‐ NIGROSINA) MADURACION NUCLEAR (AZUL DE ANILINA) FRAGMENTACION NUCLEAR
meses Conservación VITALIDAD (EOSINA ‐ NIGROSINA) MADURACION NUCLEAR (AZUL DE ANILINA) FRAGMENTACION NUCLEAR
meses Conservación VITALIDAD (EOSINA ‐ NIGROSINA) MADURACION NUCLEAR (AZUL DE ANILINA) FRAGMENTACION NUCLEAR
meses Conservación VITALIDAD (EOSINA ‐ NIGROSINA) MADURACION NUCLEAR (AZUL DE ANILINA) FRAGMENTACION NUCLEAR

MADURACION NUCLEAR (AZUL DE ANILINA)

‐ NIGROSINA) MADURACION NUCLEAR (AZUL DE ANILINA) FRAGMENTACION NUCLEAR ENSAYO HIPOOSMOTICO: TEST DE HOS

FRAGMENTACION NUCLEAR

ENSAYO HIPOOSMOTICO:

TEST DE HOS

(Jeyendran y col.)

Esta prueba evalúa la integridad de la membrana; bajo condiciones Hipoosmóticas, se produce una hinchazón de la cola del espermatozoide debido al paso de agua a través de la membrana. Antes de proceder a su estudio, es importante valorar la muestra de semen en fresco para observar las posibles colas arrolladas.

Ref.

MT 282 / 10-13002

Presentación

9 viales x 20ml

Caducidad

12 meses

Conservación

O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España

T: 902 102 163

Caducidad 12 meses Conservación O´Donnell, 32 1ºE – 28009 Madrid España T: 902 102 163 F:

F: 915 040 440