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Microscopios y calibraciones 1. Microscopio Compuesto Utilice una norma o un microscopio compuesto invertido para la identificacin de algas y enumeracin.

Equipar cualquier tipo con una etapa mecnica capaz de mover todas las partes de un recuento de clulas ms all de la lente del objetivo. Equipamiento de serie es un conjunto de 10 12,5 oculares o y 10 , 20 , 40 y 100 objetivos. Usa los objetivos de proporcionar una distancia adecuada de trabajo para el recuento cmara. Aumento requerido variar con la fraccin de plancton se est investigando, el tipo de microscopio, cmara de recuento utilizado, y la ptica. Con objetivos estndar, la Sedgwick-Rafter cmara limita la ampliacin de aproximadamente 200 Maloney y el Palmerclula limita aumento de aproximadamente 500 . Microscopios invertidos estn limitados en la resolucin por sus pticas. El lmite superior de aumento til para cualquier objetivo es 1000 veces ms apertura numrica (NA). Por encima de este aumento, no mayor detalle se puede resolver. Utilizar combinaciones de oculares, lupas y objetivos intermedios, para obtener el mayor magnificacin sin exceder el lmite til de magnificacin. Cuando se supera el lmite, resultados vacos ampliacin. Aumento se produce vaco donde la imagen es ms grande, pero no resolucin se logra mayor. ptica ofrecer mejoras de contraste, como contraste de fase o contraste diferencial de interferencia son tiles. 2. Microscopio Estereoscpico El microscopio estereoscpico es esencialmente dos microscopios completa montada en un instrumento binocular para dar una visin estereoscpica y una ereccin ms que una imagen invertida. Utilizar este microscopio para el estudio y el recuento de plankters grandes tales como microcrustacea maduro. Incluir 10 a 15 oculares apareados en combinacin con 1 a 8 objetivos. Esta combinacin de ptica cierra la brecha entre la lupa y el microscopio compuesto y proporciona aumentos que van desde 10 120 a. Tambin puede utilizar una buena calidad de zoom tipo de instrumento con un aumento comparable. 3. Microscopio compuesto invertido

espaol ingls francs

Microscopio Compuesto Utilice un estndar o un microscopio compuesto invertido para la identificacin de algas y enumeracin. Equipar cualquier tipo con una etapa mecnica capaz de mover todas las partes de un recuento

de clulas ms all de la lente del objetivo. Equipamiento de serie es un conjunto de 10 12,5 oculares o y 10 , 20 , 40 y 100 objetivos. Usa los objetivos de proporcionar una distancia adecuada de trabajo para el recuento cmara. Aumento requerido variar con la fraccin de plancton se est investigando, el tipo de microscopio, cmara de recuento utilizado, y la ptica. Con objetivos estndar, la Sedgwick-Rafter cmara limita la ampliacin de aproximadamente 200 Maloney y el Palmerclula limita aumento de aproximadamente 500 . Microscopios invertidos estn limitados en la resolucin por sus pticas. El lmite superior de aumento til para cualquier objetivo es 1000 veces ms apertura numrica (NA). Por encima de este aumento, no mayor detalle se puede resolver. utilizar combinaciones de oculares, lupas y objetivos intermedios, para obtener el mayor magnificacin sin exceder el lmite til de magnificacin. Cuando se supera el lmite, resultados vacos ampliacin. Aumento se produce vaco donde la imagen es ms grande, pero no resolucin se logra mayor. ptica ofrecer mejoras de contraste, como contraste de fase o contraste diferencial de interferencia son tiles.

Microscopio Compuesto Utilice un estndar o un microscopio compuesto invertido para la identificacin de algas y enumeracin. Equipar cualquier tipo con una etapa mecnica capaz de mover todas las partes de un recuento de clulas ms all de la lente del objetivo. Equipamiento de serie es un conjunto de 10 12,5 oculares o y 10 , 20 , 40 y 100 objetivos. Usa los objetivos de proporcionar una distancia adecuada de trabajo para el recuento cmara. Aumento requerido variar con la fraccin de plancton se est investigando, el tipo de microscopio, cmara de recuento utilizado, y la ptica. Con objetivos estndar, la Sedgwick-Rafter cmara limita la ampliacin de aproximadamente 200 Maloney y el Palmerclula limita aumento de aproximadamente 500 . Microscopios invertidos estn limitados en la resolucin por sus pticas. El lmite superior de aumento til para cualquier objetivo es 1000 veces ms apertura numrica (NA). Por encima de este aumento, no mayor detalle se puede resolver. utilizar combinaciones de oculares, lupas y objetivos intermedios, para obtener el mayor magnificacin sin exceder el lmite til de magnificacin. Cuando se supera el lmite, resultados vacos ampliacin. Aumento se produce vaco donde la imagen es ms grande, pero no resolucin se logra mayor. ptica ofrecer mejoras de contraste, como contraste de fase o contraste diferencial de interferencia son tiles.

Microscopio de calibracin Microscopio de calibracin es esencial. El equipo habitual para la calibracin es una rejilla de Whipple (micrmetro ocular, retculo, o retcula) colocado en un ocular del microscopio y una etapa micrmetro que tiene una escala estandarizada, con precisin pronunciado sobre un portaobjetos de vidrio. El disco de Whipple (Figura 10200:6) ha descartado una red con precisin subdividido en 100 cuadrados. Una plaza cerca de la centro est subdividido en 25 cuadrados ms pequeos. Las dimensiones exteriores de la rejilla son tales que con un 10 objetivo y un ocular 10, delimita un rea de aproximadamente 1 mm2 en la platina del microscopio. Debido a que esta zona puede diferir de un microscopio a otro, cuidadosamente calibrar la cuadrcula de Whipple para cada microscopio. Con los micrmetros ocular y etapas en paralelo y en parte superpuestas, haga coincidir la lnea en el borde izquierdo de la rejilla Whipple con la marca cero en la escala de micrmetro (figura 10200:7). Determinar el ancho de la imagen rejilla Whipple con una precisin de 0,01 mm a partir de la etapa micrmetro de escala. Si el ancho de la imagen de la rejilla de Whipple ser de exactamente 1 mm (1000 micras), los cuadrados ms grandes ser 1/10 mm (100 micras) en un lado y cada uno de los cuadrados ms pequeos 1/50 mm (20 micras). Cuando el microscopio se calibra a mayores aumentos, toda la escala de la etapa micrmetro no ser visto; hacer mediciones con una precisin de 0,001 mm. Detalles adicionales para calibracin son available.8 Procedimientos de recuento Para enumerar plancton utilizar una cmara de recuento celular o que limita el volumen y el rea de clculo de la densidad de poblacin listo. Al contar con una red de Whipple, establecer un convenio para tasar los organismos situados en una lnea de lmite exterior. Por ejemplo, en un campo de recuento'''' (cuadrado Whipple entero), designar los lmites superior e izquierda como'' lados sin contar'', y la parte inferior y los lmites adecuados como '''' Contar lados. Por lo tanto, cuente cada plankter tocar un conteo alterno'''' desde el interior o el exterior, pero ignorar cualquier lado tocando un'' no'' de conteo. Si un nmero significativo de gran filamentoso o de otro formas cruzar dos o ms lmites de la red, contar por separado en un aumento menor e incluir su nmero en el recuento total. Para identificar los organismos utilizan referencias estndar de banco (vase la Seccin 10900). Mtodos estndar para el examen de agua y aguas residuales Copyright 1999 por la American Public Health Association, American Water Works Association, Water Environment Federation No cuente las clulas muertas o rotas frstulas diatomeas. Tally vaco cntrica y diatomeas penadas por separado como'' diatomeas cntricas muertos'' o'' diatomeas muertas pinnadas''

para su uso en la conversin de la Nmero de especies de diatomeas proporcional a un recuento por mililitro. La ampliacin es importante en la identificacin y enumeracin de fitoplancton. Aunque aumentos de hasta 100 200 son tiles para contar grandes organismos o colonias, muy superior aumentos a menudo se requieren. Es til para categorizar las tcnicas para el fitoplancton recuento segn los aumentos proporcionados. una. Bajo aumento (hasta 200 ) Mtodos: El Sedgwick-Rafter (SR) celular es un dispositivo comnmente utilizado para el plancton contando porque es fcil de manipular y ofrece razonablemente datos reproducibles cuando se utiliza con un microscopio calibrado equipado con un ocular de medicin dispositivo, tal como la cuadrcula de Whipple. La mayor desventaja asociada con la clula es que los objetivos de proporcionar alta ampliacin no se puede utilizar. Como resultado, la clula SR no es apropiado para examinar nanoplancton. La clula SR es de aproximadamente 50 mm de largo por 20 mm de ancho por 1 mm de profundidad. La superficie total de la parte inferior es de aproximadamente 1000 mm2 y el volumen total es de aproximadamente 1000 mm3 o 1 ml. Comprobar cuidadosamente la longitud exacta y la profundidad de la celda con un micrmetro y pinzas antes del uso. 1) Llenado de la clula-Antes de llenar la celda con la muestra SR, colocar el vidrio de cubierta diagonal a travs de la clula y de transferencia de muestras con una pipeta de dimetro grande (Figura 10200:8). La colocacin de cubierta antideslizante en esta manera ayudar a evitar la formacin de burbujas de aire en las esquinas de clulas. La hoja de la cubierta a menudo se girar lentamente y cubrir la parte interna de la clula SR durante el llenado. No llene en exceso porque esto producira una profundidad mayor de 1 mm y producir un recuento vlido. No permitir que el aire grande espacios causados por la evaporacin de desarrollar en la cmara durante un largo examen. A evitar la formacin de espacios de aire, de vez en cuando colocar una pequea gota de agua destilada en el borde de cubierta de cristal. Antes de contar dejar la celda SR reposar durante al menos 15 minutos para resolver el plancton. Conde plancton en la parte inferior de la celda S-R. Algunos fitoplancton, especialmente algunas algas azul-verde o mviles flagelados en muestras no conservadas, pero no podr resolver la altura de la cara inferior de la hoja de cubierta. Cuando esto ocurre, contar estos organismos y con el total de los contados en el fondo de la celda a derivar nmero total de organismos. Cuente las algas en tiras o campos. 2) Franja de conteo-A'''' tira de la longitud de la clula constituye un volumen de aproximadamente 50 mm de largo, 1 mm de profundidad, y la anchura de la rejilla de Whipple total. El nmero de tiras que se contados es una funcin de la precisin deseada y el nmero de unidades (clulas, colonias o filamentos) por tira. Derivar nmero de plancton en la

celda de la SR despus: Mtodos estndar para el examen de agua y aguas residuales Copyright 1999 por la American Public Health Association, American Water Works Association, Water Environment Federation donde: C = nmero de organismos contados, L = longitud de cada tira (S-R longitud de la clula), mm, D = profundidad de una banda (S-R profundidad de clulas), mm, W = anchura de una banda (ancho Whipple imagen de cuadrcula), mm, y S = nmero de tiras de contado. Multiplicar o dividir el nmero de clulas por mililitro en un factor de correccin para ajustar para la muestra dilucin o concentracin. 3) Campo de conteo sobre muestras que contienen muchos plancton (10 o ms plankters por campo), hacer recuentos de campo en lugar de los recuentos de striptease. Cuente plankters en campos al azar cada uno compuesto por una rejilla de Whipple. El nmero de campos contados depender de plancton densidad y estadstica precisin deseada (ver Seccin 10200F.1). Calcule la cantidad de plancton por mililitro en el sigue: donde: C = nmero de organismos contados, A = rea de un campo (zona Whipple imagen rejilla), mm2, D = profundidad de un campo (S-R profundidad de clulas), mm, y F = nmero de campos contados. Multiplicar o dividir el nmero de clulas por mililitro por un factor de correccin para ajustar muestra de dilucin o de concentracin. b. Aumento Intermediate (menor a 500 ) Mtodos: El Palmer-Maloney (PM) nanoplancton cell3 est diseado especficamente para la enumeracin nanoplancton. Tiene una circular cmara con un dimetro de 17,9 mm, profundidad 0,4-mm, y el volumen de 0,1-ml. Los permisos de poca profundidad utilizar de 40 a 45 objetivos con distancia de trabajo suficiente. La principal desventaja de la Clula PM es que estos aumentos (400 a 450 ) a menudo son insuficientes para nanoplancton identificacin y enumeracin. Mtodos estndar para el examen de agua y aguas residuales Copyright 1999 por la American Public Health Association, American Water Works Association, Water Environment Federation Debido a que una porcin relativamente pequea muestra se examina en la celda PM no lo use a menos que la muestra contiene una poblacin densa (10 o ms plankters por campo). Una muestra tan pequea una porcin de una poblacin menos densa causa seria subestimacin de la densidad. Introducir la muestra con una pipeta en una de las 2 - 5-mm por canales en el lado de la cmara con la hoja de la cubierta en su lugar. Despus de un perodo de sedimentacin 10-min contar los plankters en campos al azar, con el nmero de campos en funcin de la densidad y la variedad de plancton y el

precisin estadstica deseada. Las tiras pueden ser contados en esta o en cualquier otra celda circular por la medicin el dimetro efectivo y contando dos tiras perpendiculares que se cruzan en el centro. Calcular el nmero por mililitro de la siguiente manera: donde: C = nmero de organismos contados, A = rea de un campo (imagen rejilla Whipple), mm2, D = profundidad de campo (P-M profundidad clula), mm, y F = nmero de campos contados. Multiplicar o dividir el nmero de clulas por mililitro por un factor de correccin para ajustar muestra de dilucin o de concentracin. Otra cmara fcilmente disponible es el hemocitmetro estndar mdico utilizados para la enumeracin de las clulas sanguneas. Se ha descartado una rejilla de mecanizado en un recuento en placa y est equipado con un tierra cubierta de vidrio antideslizante. La cuadrcula se divide en divisiones de 1-mm2; la cmara es de 0,1 mm de profundidad. Introducir la muestra en la pipeta y la vista bajo magnificacin 450. Contar todas las celdas de la cuadrcula. La cmara viene del fabricante con una hoja de instrucciones detallado que contiene indicaciones en los clculos y el uso adecuado. Una desventaja de estas clulas de recuento es que la muestra debe tienen una densidad de plancton muy alto para obtener datos estadsticamente fiables. c. Magnificacin de alta mtodos: Examen de fitoplancton a gran aumento requiere el uso de objetivos de inmersin en aceite. Los procedimientos adecuados incluyen la utilizacin invertida cmaras de microscopio, soportes de filtro de membrana, sedimentadas montajes de diapositivas, la cada de Lackey mtodo y diatomeas montajes. 1) microscopio invertido recuentos-preparar una muestra para examen llenando el asentamiento cmara. Despus de que el tiempo de establecimiento deseado (vase la Seccin 10200C.1), transferir la cmara a la platina del microscopio. Contar tiras perpendiculares a travs del centro del cristal de cubierta inferior. Pele recuentos se pueden hacer mediante el uso de una rejilla de Whipple o especiales oculares de conteo que tienen un par de ajustables pelos paralelas y una cruz simple. Determinar la anchura de la tira con una etapa micrmetro y organismos de recuento a medida que pasan la cruz nico que funciona como una referencia Mtodos estndar para el examen de agua y aguas residuales Copyright 1999 por la American Public Health Association, American Water Works Association, Water Environment Federation punto. Mantenga ancho de banda constante para cualquier serie de muestras. Alternativamente examinar al azar no se superponen los campos hasta por lo menos 100 unidades de las especies dominantes son contados. Para obtener la mxima precisin, sobre todo porque la distribucin de las algas puede ser no uniforme, contar toda la cmara suelo. Alternativamente, hacer un campo aleatorio-recuento mnimo para alcanzar un nivel de precisin de al menos

85% .4 donde: C = nmero de organismos contados, A = rea total de la parte inferior de la cmara de sedimentacin, mm2, L = longitud de una tira, mm, W = anchura de una banda (ancho Whipple imagen de cuadrcula), mm, S = nmero de tiras de contado, y V = volumen de la muestra se establecieron, ml. donde: A f = rea de un campo (rea Whipple imagen rejilla), mm2, F = nmero de campos contados, y otros trminos son como se definen anteriormente. 2) filtro de membrana que se monta-Concentrar la muestra como se indica en la Seccin 10200C.2 y preparar filtro de membrana como se indica en la Seccin 10200D.2a. Examinar las muestras, se concentr en filtros de membrana sin revestimiento y montado en aceite como se describe anteriormente. Cuente suficientes campos al azar para asegurar el nivel deseado de precisin estadstica (vase la seccin 10200F.1). Seleccionar nivel de ampliacin y el tamao de campo del microscopio (cuadrado) de tal manera que la mayora especies abundantes aparecer en al menos 70% pero no examinada ms de 90% de campos microscpicos (80% es ptimo). Ajustar el tamao del microscopio de campo mediante el uso de toda o parte de la red de Whipple. Examina 30 campos microscpicos aleatorios y el nmero de registro de los campos en que cada especie ocurrido. Notificar resultados como microorganismos por mililitro, calculado como sigue: Mtodos estndar para el examen de agua y aguas residuales Copyright 1999 por la American Public Health Association, American Water Works Association, Water Environment Federation donde: N = densidad (organismos / campo) de la Tabla 10200: II, Q = nmero de campos por filtro, V = mililitros filtr, y se D = factor de dilucin (0,96 el 4% formalina conservante). 3) sedimentadas rieles de montaje-Examine monta preparada segn se indica en la Seccin 10200D.2b. 4) gota Lackey mtodo-La cada Lackey (microtransect) method5 es un mtodo simple de obtencin de cargos de precisin considerable con muestras que contienen una densa poblacin de plancton. Es similar a la cuenta S-R tira. Prepare diapositivas como se indica en la Seccin 10200D.1. Objetivos de inmersin en aceite se puede utilizar con las diapositivas semipermanentes. Cuente organismos en tiras suficientes para garantizar un nivel deseado de estadstica precisin (vase la Seccin 10200F.1). Calcular el nmero de organismos por mililitro de la siguiente manera: donde: C = nmero de organismos contados, A = rea de la hoja de la cubierta, mm2, As = rea de una tira, mm2, S = nmero de tiras de contado, y

V = volumen de la muestra en virtud de la hoja de la cubierta, ml. 5) diatomeas monta-Preparar las muestras como se indica en la Seccin 10200D.3. Por nmero de especies de diatomeas proporcional, examinar muestras de diatomeas con aceite de inmersin en un aumento de al menos 900 . Escanear tiras laterales de la anchura de la rejilla Whipple hasta por lo menos 250 clulas se cuentan. Tiempo disponible y precisin que se requiere determinar el nmero de clulas que se contados. Determinar la abundancia de porcentaje de cada especie a partir de recuentos contados y calcular cuentas por mililitro de cada especie multiplicando por ciento abundancia total en vivo y muerto diatomea recuento obtenido a partir de la cmara de recuento de plancton. Para una mayor precisin distinguir diatomeas entre vivos y muertos a nivel de especies. 6) tincin fitoplancton tcnica de tincin algas permite diferenciar entre'' en vivo'' Mtodos estndar para el examen de agua y aguas residuales Copyright 1999 por la American Public Health Association, American Water Works Association, Water Environment Federation y'' muerto'' diatoms.6 Esto permite enumerar fitoplancton total en una sola muestra, sin sacrificar la taxonoma de diatomeas detallada. Tambin resulta en portaobjetos de referencia permanentes. La procedimiento es muy til cuando las diatomeas son los principales componentes del fitoplancton y es importante distinguir entre diatomeas vivas y muertas. Preferiblemente conservar las muestras en solucin de Lugol o alternativamente en formalina (vase la seccin 10200B.3). Para el anlisis de mezclar bien la muestra y filtrar una parte a travs de un 47-mm-Dimetro de filtro de membrana (dimetro de poro 0,45 micras o 0,65). Utilice un vaco de 16 a 20 kPa y dejar que nunca muestra seca. Aadir 2 ml a 5 ml solucin acuosa de cido fucsina (disolver 1 g de fucsina cida en 100 ml agua destilada a la cual 2 ml de cido actico glacial se ha aadido; filtro) para el filtro y dejar reposar durante 20 min. Despus de la tincin, la muestra de filtro, lavar brevemente con agua destilada y filtrar de nuevo. Administrar enjuagues sucesivos de 50%, 90% y 100% de propanol a la muestra mientras se filtra. Remojo durante 2 min en un segundo lavado 100% propanol, filtrar y agregar xileno. Por lo menos dos lavados son necesario, dejar el definitivo remojo 10 minutos antes de filtrar. Recorte el filtro empapado en xileno y el lugar en un portaobjetos en el que hay varias gotas de medio de montaje. # (117) Aplicar varias gotas ms de medio a alto de filtro e instale una cubierta de vidrio. Con cuidado, exprimir el exceso de medio de montaje. Hacer el montaje final permanente por lacado de los bordes de la tapa vidrio. Contar con organismos de aumento ms apropiado. '' En vivo'' diatomeas normalmente son de color rojo mientras que los muertos'''' se mancha. Aceite de inmersin es necesario para identificaciones de las especies de diatomeas y otras algas muchos. Contar con tiras o campos aleatorios y calcular plancton

densidades por mililitro: donde: C = nmero de organismos contados, A = rea total de filtro efectivo antes de recortar y montar, Ac = rea contado (franjas o campos), y V = volumen de muestra filtrada, ml. 3. Referencias 1. INGRAM, W.M. Y C.M. PALMER. 1952. Procedimientos simplificados para la recoleccin, Examinar, y el registro de plancton en el agua. J. Amer. Water Works Assoc. 44:617. 2. Strickland, J.D.H. Y T.R. PARSONS. 1968. Manual prctico de anlisis de agua de mar. Fish. Res. Junta Can. Bull. N 167. Impresora Reina, Ottawa, Ont. 3. PALMER, C. M. Y T.E. Maloney. 1954. Una nueva diapositiva Contando para nanoplancton. Spec. Publ. N 21, American Soc. Limnologa y Oceanografa. Mtodos estndar para el examen de agua y aguas residuales Copyright 1999 por la American Public Health Association, American Water Works Association, Water Environment Federation 4. SOURNIA, A., ed. 1978. El fitoplancton Manual. Monogr. Oceanogr. Metodologa. N 6. Naciones Unidas para la Educacin Org, la Ciencia y la Cultura., Pars. 5. Lackey, J. B. 1938. La manipulacin y el recuento de ro plancton y los cambios en algunos organismos debido a la preservacin de formalina. Pub. Salud Rep. 53:2080. 6. OWEN, B.B., JR., M. AFZAL y Cody: Gemelos W.R.. 1978. Preparaciones de tincin para el fitoplancton y perifiton. Brit. Phycol. J. 13:155. 10200 G. Tcnicas de zooplancton Counting 1. Submuestreo Contar con un nmero de muestras enteras bajos (<200 zooplancton zooplancton) sin submuestreo. Sin embargo, la mayora de las muestras de zooplancton contendr ms organismos que se puede enumerados prcticamente, por lo tanto, utilizar un procedimiento de submuestreo. Antes de submuestreo, retire y enumerar todos los grandes organismos poco comunes, tales como larvas de peces en agua dulce o celentreos, decpodos, larvas de peces, etc, en agua salada. Submuestra por la pipeta o mtodo de divisin. En el mtodo de la pipeta, ajuste de la muestra a un volumen conveniente en un cilindro graduado o Imhoff cono. La concentracin de plancton con una perilla de goma y clara tubo de plstico acrlico con multa red de malla ajustado en el extremo es conveniente y precisa (Figura 10200:9). Para picoplancton y el microzooplancton ms pequeo, utilizar tcnicas de sedimentacin descritas para concentrar fitoplancton. Transferir la muestra a un vaso de precipitados u otro recipiente de boca ancha para el submuestreo con una Hensen-Stempel pipeta o similares de gran calibre. Revuelva suavemente muestra completamente al azar con la pipeta y retirar rpidamente 1 a 5 ml. Transferir a una cmara de recuento adecuado. Alternativamente, mediante el fraccionamiento de una submuestra con cualquiera de una serie de dispositivos de los cuales el Folsom splitter1 plancton es el ms conocido (Figura 10200:10). Level divisor antes de usar.

Colocar la muestra en el divisor y se dividen en subsplits. Enjuague divisor en las submuestras. Repita hasta que funcione nmero (200 a 500 individuos) se obtiene en una submuestra. Tenga cuidado para proporcionar imparcial escisiones. Incluso cuando se utilizan las submuestras separador Folsom imparcial no puede ser incuestionablemente asumido, 2 por lo tanto, contar animales en varias submuestras de la misma muestra para verificar que el divisor es imparcial y para determinar el error de muestreo introducido mediante el uso de la misma. Otro mtodo permite que las estimaciones de abundancia de los niveles ms equivalentes de precisin entre taxones que la obtenida con cualquiera de la pipeta Hensen-Stempel o el normal Folsom splitter.3 procedimientos de escrutinio de organismos de recuento sobre la base de su abundancia en una muestra. Por lo tanto, en una muestra con un organismo dominante que constituyen el 50% del nmero total, el recuento de la dominante taxn ser grande y tiene un error pequeo. Sin embargo, el error sobre los subdominantes aumentar como el recuento de cada taxn disminuye. Al aceptar un nivel de precisin, la technique3 ha sido desarrolladas para obtener el mismo error sobre los dominantes y subdominantes, permitiendo cuantitativa comparaciones entre taxones ms veces consecutivas o entre estaciones. Mtodos estndar para el examen de agua y aguas residuales Copyright 1999 por la American Public Health Association, American Water Works Association, Water Environment Federation 2. Enumeracin Utilizando un microscopio compuesto y una magnificacin de 100 , enumerar pequeo zooplancton (Protozoos, rotferos, y nauplios) en un 1 - a 5-ml de clulas claras de plstico acrlico contar equipado con un vidrio cubreobjetos. Para ms grande, madura microcrustacea utilizar una cmara de recuento de sujecin 5 a 10 ml. Una clula Sedgwick-Rafter no es adecuado debido a su tamao. Una cmara de recuento abierta 80 por 50 mm y 2 mm de profundidad es deseable, sin embargo, una cmara abierta es difcil de mover sin sacudidas y interrumpir el conteo. Una solucin de detergente suave colocado en la cmara antes de contar reduce movimientos organismo o bandejas especiales contando con surcos paralelos o circulares o partitions4 5, puede ser utilizado. Contar microcrustacea con un microscopio binocular de diseccin con 20 40 magnificacin. Si la identificacin es dudosa, eliminar los microorganismos con una microbiolgico transferencia de bucle y examinar con un aumento mayor bajo un microscopio compuesto. Informe pequeo zooplancton como el nmero de formas por litro y de mayor tamao como el nmero por metro cbico: donde: C = nmero de organismos contados, Volumen V '= de la muestra concentrada, ml,

V'' = volumen contados, ml, y V'' '= volumen de la muestra tomada al azar, m3. Para obtener organismos por litro divisin en 1000. 3. Referencias 1. Longhurst, A. R. Y D.L.R. Seibert. 1967. La habilidad en el uso de la muestra de Folsom plancton divisor. Limnol. Oceanogr. 12:334. 2. McEwen, G. F., M. W. JOHNSON & T. R. FOLSOM. 1954. Un anlisis estadstico de la Folsom muestra divisor basado en observaciones de prueba. Arch. Meteorol. Geophys. Bioklimatol., Ser. A 6:502,. 3. ALDEN, R. W., III, R. C. Dahiya y R.J. YOUNG, JR. 1982. Un mtodo para la enumeracin de muestras de zooplancton. J. Exp.. Mar. Biol.. Ecol. 59:185. 4. GANNON, J. E. 1971. Dos clulas de recuento para la enumeracin de zooplancton micro-crustceos. Trans. Amer. Microsc. Soc. 90:486. 5. DODSON, A.N. Y W.H. THOMAS. 1964. La concentracin de plancton de manera suave. Limnol. Oceanogr. 9:455. Mtodos estndar para el examen de agua y aguas residuales Copyright 1999 por la American Public Health Association, American Water Works Association, Water Environment Federation 10200 H. clorofila La concentracin de los pigmentos fotosintticos se utiliza ampliamente para estimar fitoplancton biomass.1, 2 Todas las plantas verdes contienen una clorofila, que constituye aproximadamente el 1 al 2% de el peso seco de las algas planctnicas. Otros pigmentos que se producen en el fitoplancton incluir clorofilas b y c, xantofilas, ficobilinas, y carotenos. La clorofila importante productos de degradacin se encuentran en el medio acutico son las chlorophyllides, feoforbidas, y feofitinas. La presencia o ausencia de los pigmentos fotosintticos distintos se utiliza, entre los otras caractersticas, para separar los grupos de algas principales. Los tres mtodos para determinar la clorofila a en el fitoplancton es el espectrofotomtrico ,3-5 el fluoromtrico ,6-8 y el alto rendimiento de cromatografa lquida (HPLC) techniques.9 Fluorometra es ms sensible que la espectrofotometra, requiere menos de la muestra, y se puede utilizar para en-vivo measurements.10 Estos mtodos pticos significativamente puede bajo-o clorofila sobreestimacin unas concentraciones ,11-18, en parte debido a la superposicin de la bandas de absorcin y fluorescencia de los pigmentos accesorios concurrentes y clorofila productos de degradacin. Feofrbido y una feofitina una, dos productos de degradacin comunes de la clorofila A, puede interferir con la determinacin de la clorofila a, ya que absorben la luz y la fluorescencia en la misma regin del espectro, como lo hace la clorofila a. Si estos pheopigments estn presentes, significativo errores en los valores de clorofila a como resultado. Pheopigments se puede medir por

espectrofotometra o fluorometra, pero en ambientes marinos y de agua dulce del fluoromtrico mtodo no es fiable cuando la clorofila b co-produce. Tras la acidificacin de la clorofila b, la emisin de fluorescencia resultante de feofitina b es coincidente con la de un feofitina, as produccin de subestimacin y la sobreestimacin de la clorofila y pheopigments, respectivamente. HPLC es un mtodo til para cuantificar fotosinttica pigments9 ,13,15,16,19-21, a saber clorofila a, pigmentos accesorios (por ejemplo, clorofilas b y c), y clorofila degradacin productos (chlorophyllides, feofrbidos, feofitinas y). La distribucin del pigmento es til para evaluacin cuantitativa de la composicin del fitoplancton comunidad y el pastoreo del zooplancton activity.22 1. Extraccin de pigmentos Llevar a cabo el trabajo con los extractos de clorofila en la luz tenue para evitar la degradacin. Utilice opaco recipientes o envolver con papel de aluminio. Los pigmentos se extraen del plancton concentrarse con acetona acuosa y la densidad ptica (absorbancia) del extracto es determinaron con un espectrofotmetro. La facilidad con que las clorofilas se eliminan de las clulas vara considerablemente con diferentes algas. Para conseguir la extraccin consistente completa de los pigmentos, romper las clulas mecnicamente con un triturador de tejidos. Filtros de fibra de vidrio son los preferidos para la eliminacin de algas de agua. Las fibras de vidrio en ayudar romper las clulas durante el rectificado, mayores volmenes de agua se puede filtrar, y sin precipitado Mtodos estndar para el examen de agua y aguas residuales Copyright 1999 por la American Public Health Association, American Water Works Association, Water Environment Federation se forma despus de la acidificacin. Filtros de membrana inertes tales como filtros de polister se puede utilizar cuando estos factores son irrelevantes. una. Equipos y reactivos: 1) Tejidos amoladora: * # (118) con xito filtros de fibra de vidrio en la maceracin de tejidos con amoladoras molienda tubo y mano de mortero de diseo cnico puede ser difcil. Utilizar preferentemente de fondo redondo molienda tubos con una mano de mortero a juego que tiene ranuras en la punta de TFE. 2) centrfuga clnica. 3) Tubos de centrfuga de 15 ml graduado, con tapn de rosca. 4) equipo de filtracin, filtros, fibra de vidrio # (119) o de la membrana (0,45 micrasporosidad, 47-mm diam); bomba de vaco; resistente a los disolventes conjunto de filtro desechable, tamao de poro 1,0-micras; # (120) 10-mL resistente a los disolventes jeringa. 5) una solucin saturada de carbonato de magnesio: Aadir 1,0 g de polvo fino MgCO3 a 100 ml agua destilada. 6) solucin acuosa de acetona: Mezcla de 90 partes de acetona (grado reactivo BP 56 C) con 10 partes

solucin saturada de carbonato de magnesio. Para el anlisis de HPLC pigmento, mezclar 90 partes de grado HPLC acetona con 10 partes de agua destilada. b. Procedimiento de extraccin: 1) concentrar la muestra por centrifugacin o filtrado tan pronto como sea posible despus de la recogida. Si tratamiento debe retrasarse, mantener en hielo oa 4 C y proteger de la exposicin a la luz. Use botellas opacas porque incluso una breve exposicin a la luz durante el almacenamiento alterar la clorofila valores. Las muestras tomadas en los filtros de agua que tiene un pH de 7 o superior puede colocarse en envases hermticamente bolsas de plstico y se almacen congelado durante 3 semanas. Muestras de proceso de agua cida con prontitud despus de filtracin para evitar la degradacin de la clorofila posible a partir del agua residual cida en el filtro. Utilizar vasos y cubetas de que estn limpios y libre de cido. 2) Coloque la muestra en un triturador de tejidos, cubrir con la solucin de 2 a 3 ml de 90% acetona acuosa, y macerar a 500 rpm durante 1 min. Use TFE / vidrio amoladora por un filtro de fibra de vidrio y vidrio / vidrio amoladora por un filtro de membrana. 3) Transferir la muestra a un tubo de centrfuga de tapa de rosca, enjuague amoladora con unos pocos mililitros 90% acetona acuosa, y aadir el aclarado a la suspensin de extraccin. Ajustar el volumen total a 10 ml, con 90% de acetona acuosa. Utilice disolvente con moderacin y evitar la dilucin excesiva de los pigmentos. Empinado muestras de al menos 2 horas a 4 C en la oscuridad. Filtros de fibra de vidrio de 25 y 47-mm diam # (121) tienen volmenes secos de desplazamiento de 0,03 y 0,10 ml, respectivamente, e introducen errores de aproximadamente 0,3 y 1,0% si un volumen de extraccin de 10-mL se utiliza. 4) Aclarar por filtracin a travs de un filtro desechable resistente a los disolventes (para minimizar la retencin de los extraer en el soporte de filtro y el filtro, la fuerza de 1 a 2 ml de aire a travs del filtro despus de que el extracto), o por centrifugacin en tubos cerrados durante 20 minutos a 500 g. Decantar el extracto clarificado en un lugar limpio, calibrado, 15-ml, con tapn de rosca tubo de centrfuga y miden el volumen total. Proceder como en 2, 3, 4, o 5 a continuacin. Mtodos estndar para el examen de agua y aguas residuales Copyright 1999 por la American Public Health Association, American Water Works Association, Water Environment Federation 2. Determinacin espectrofotomtrica de clorofila una. Equipos y reactivos: 1) Espectrofotmetro, con una banda estrecha (paso) de ancho (0,5 a 2,0 nm) debido a que el pico de absorcin de clorofila es relativamente estrecha. En un ancho de banda espectral de 20 nm de los la concentracin de clorofila puede ser subestimado por tanto como 40%. 2) cubetas, con 1 -, 4 -, y 10-cm longitudes de la trayectoria. 3) Pipetas, 0,1-y 5,0-mL. 4) El cido clorhdrico, HCl, 0,1. b. Determinacin de clorofila a en la presencia de un feofitina: clorofila a, puede ser

sobreestimado incluyendo pheopigments que absorben cerca de la misma longitud de onda como la clorofila una. La adicin de cido a la clorofila A, la prdida del tomo de magnesio, la conversin a feofitina a. Se acidifica cuidadosamente hasta una molaridad final de no ms de 3 10-3M para prevenir ciertos pigmentos accesorios de cambio para absorber en la misma onda que feofitina A.13 Cuando un solucin de clorofila pura se convierte en un feofitina una acidificacin por, la absorcin de pico-ratio (OD664/OD665) de 1,70 se utiliza en la correccin de la clorofila aparente una concentracin para feofitina a. Las muestras con una OD664 before/OD665 despus proporcin acidificacin (664b/665a) son de 1,70 considera que no contienen un feofitina y para estar en condiciones fisiolgicas excelente. Soluciones de feofitina puro no muestran una reduccin en OD665 tras la acidificacin y tienen una relacin de 664b/665a de 1,0. Por lo tanto, las mezclas de clorofila ay feofitina un pico de absorcin tienen proporciones que van entre 1,0 y 1,7. Estas relaciones se basan en el uso de 90% de acetona como disolvente. Con el 100% acetona como disolvente afecta en un clorofila a antes a despus de la acidificacin relacin de aproximadamente 2.0.3 Espectrofotomtrica procedimiento de transferencia 3 ml de extracto clarificado a una cubeta de 1 cm y leer densidad ptica (DO) a 750 y 664 nm. Acidificar extraer en la cubeta con 0,1 ml de HCl 0,1 N. Agite suavemente la acidificado extraer y leer la DO a 750 y a 665 nm, 90 s despus de la acidificacin. Los volmenes de extracto y el cido y el tiempo despus de la acidificacin son crticos para la precisa, resultados consistentes. La OD664 antes de la acidificacin debe estar entre 0,1 y 1,0. Por muy diluidas utilizar extractos cubetas de longitud de paso ms largo. Si una celda ms grande se usa, aadir un volumen proporcionalmente mayor de cido. Corregir DO obtenida con grandes cubetas de 1 cm antes de hacer clculos. Restar el valor de 750-nm OD de las lecturas antes (OD 664 nm) y despus de la acidificacin (OD 665 nm). Utilizando los valores corregidos calcular clorofila ay feofitina un metro cbico por lo sigue: