1 ENERGTICA BIOQUMICA

Cambios de energa libre y constantes de equilibrio Acoplamiento de la energa enlaces de "Alta energa " Cintica vs termodinmica Introduccin a la oxidacin/reduccin La energa de cambio libre (DG) de una reaccin determina su espontaneidad. La energa de cambio libre (DG), y su relacin con la constante de equilibrio; Una reaccin es espontnea si DG es negativo (si la energa libre de los productos es menor que la energa libre de los reactantes). DG = cambio en energa libre, DGo' = cambio de energa libre estndar (con 1 M reactivos y productos, a ph 7), R = constante de gas T = temperatura absoluta. Tenga en cuenta que la energa estndar de cambio libre (DGO') de una reaccin pueden ser positivo, por ejemplo y el cambio de energa libre actual (DG) negativo, dependiendo de la concentracin celular de reactivos y productos. Muchas reacciones para que DGo' es positivo, Pero son espontneas porque otras reacciones causan agotamiento de productos o el mantenimiento de las concentraciones altas de sustrato.

En el equilibrio, DG es igual a cero. Problemas para DGo' produce la relacin a la izquierda. K'eq, el cociente [C] [D] / [A] [B] en el equilibrio, se llama la constante de equilibrio . Una constante de equilibrio mayor que uno (a ms productos que reactantes en equilibrio) indica una reaccin espontnea (DG ' negativo).

La variacin de la constante de equilibrio con DGo' se muestra en la siguiente tabla. Keq 104 102 100 = 1 10: 2 10 4 DGo' (kj/mol) 23 11 0 + 11 + 23 A partir de 1 M de reactivos y productos, la reaccin: Procede hacia adelante (espontnea) Procede hacia adelante (espontnea) Es en el equilibrio Procede a la inversa Procede a la inversa

2 ACOPLAMIENTO DE ENERGA Una reaccin espontnea puede conducir a una reaccin no espontnea.

Cambios de energa libre de reacciones acopladas son aditivos .

Ejemplos de diferentes tipos de acoplamiento: A. Algunas reacciones catalizadas por enzimas son interpretables como dos semi reacciones acoplados, una espontnea y los otros no espontneas. En el sitio activo de la enzima, cinticamente facilitada la reaccin acoplada, mientras que la semi reacciones individuales son impedidas. Se suman los cambios de energa libre de las semi reacciones, para producir la energa libre de la reaccin acoplada. Por ejemplo, en la reaccin catalizada por la enzima hexoquinasa de la gluclisis, las dos semi-reacciones son:

ATP + H2O ..ADP + Pi DGo' = -31 kjoules/mol P + glucosa ..glucosa-6-P + H2O DGO' = + 14 kjoules/mol ADP + glucosa-6-P .. DGo' = -17 kjoules/mol

Junto la reaccin: ATP + glucosa

La estructura de la enzima del sitio activo, de donde el agua se excluye, impide las reacciones hidrolticas individuales, mientras que favorecen la reaccin acoplada. B. Dos reacciones enzimticas catalizadas separadas, que ocurren en el mismo compartimiento celular, una espontnea y los otros no espontneo, puede ser juntados por un intermediario comn (reactivo o producto). Un ejemplo hipottico, pero tpico, el pirofosfato :

Enzima 1: A + ATP ..B + AMP + PPi Enzima 2: PPi + H2O. 2Pi

DGo' = + 15 kj/mol DGo' = 33 kj/mol DGo' = 18 kj/mol

Total: A + ATP + H2O .B + AMP + 2P

Pirofosfato (PPi) es a menudo el producto de una reaccin que necesita una fuerza impulsora. Su hidrlisis espontnea, catalizada por la enzima Pirofosfatasa, impulsa la reaccin para que ppi sea un producto. c. transporte inico puede ser acoplado a una reaccin qumica, por ejemplo, la hidrlisis o la sntesis de ATP. En el diagrama a la derecha y abajo, el agua no se muestra. Cabe recordar que la reaccin de hidrlisis/sntesis de ATP es ATP + H2O.. ADP + P. el cambio de energa libre (diferencia de potencial electroqumico) asociado con el transporte de un ion S a travs de una membrana del lado 2 se representa a continuacin.

R = constante de gas, T = temperatura, Z = carga en el in, F = constante de Faraday y voltaje a travs de la membrana.

Puesto que los cambios de energa libre son aditivos, la Direccin espontnea para la reaccin acoplada depender de la magnitud relativa de:

DG para el flujo de iones (DG vara con el voltaje y el ion degradado). DG para la reaccin qumica (DGo' es negativo en la direccin de la hidrlisis de ATP. La magnitud de DG depende tambin de las concentraciones de ATP, ADP y P.)

Dos ejemplos de tal acoplamiento son: 1. Transporte activo. Hidrlisis de ATP espontnea (DG) negativo est acoplado al flujo de iones (unidades) contra un gradiente (DG positivo). 2. Sntesis de ATP en la mitocondria. Flujo espontneo H+ a travs de una membrana (DG negativo) es la sntesis de ATP acoplada (unidades) (DG positivo). Consulte la explicacin de la ATP Sintetasa.

"ENLACES DE ALTA ENERGA" La estructura del ATP se muestra a continuacin a la derecha, enlaces Anhdrido (en rojo) unen los fosfatos terminales. ENLACES de Phosphoanhydride (formado por la divisin de agua entre dos cidos fosfricos o entre un cido carboxlico y un cido fosfrico) tienden a tener una gran DG negativa de hidrlisis y as se dice que son enlaces de "alta energa" Es importante tener en cuenta que la energa de enlace no es necesariamente alta, slo la energa libre de hidrlisis. Los enlaces de "Alta energa" son a menudo representados por la~ de "" smbolo (Garabato), con ~P representando a un grupo de fosfato con una alta energa libre de hidrlisis. Compuestos con enlaces de "alta energa" se dicen que tienen transferencia de grupo de alto potencial. Por ejemplo, Pyo espontneamente de ATP para la transferencia a otro compuesto (por ejemplo, a un grupo del oxhidrilo en glucosa). Potencialmente pueden ser escindidos dos enlaces de "alta energa", como dos fosfatos son liberados por la hidrlisis de ATP (trifosfato de adenosina), ADP (difosfato de adenosina), y en ltima instancia AMP (adenosina monofosfato). Esto puede representarse como sigue (omitiendo hidrlisis de las aguas):

AMP~P~P AMP~P

AMP~P + Pi (ATP ADP + Pi) AMP + Pi (ADP AMP + Pi)

Alternativamente, como discutido sobre:

AMP~P~P P~p

AMP + P~Pi (ATP AMP + PP) 2Pi

4 ATP sirve a menudo como una fuente de energa. Hidrolizando uno o ambos enlaces de "alta energa" EL ATP se acopla a una reaccin (no espontnea) que requieren de energa, como en los ejemplos presentados anteriormente. AMP funciona como un sensor de energa y regulador del metabolismo, Cuando la produccin de ATP no mantiene las necesidades Metablicas del da , una porcin ms alta de de nucletidos de adenina de una clula en forma de AMP. estimula las vas que producen ATP . Algunos ejemplos de esta funcin implican directa activacin de enzimas alostrica de la va por AMP. (Por ejemplo, la activacin de la enzima Glucgeno fosforilasa AMP se discutir ms adelante.) Algunos efectos reglamentarios de AMP estn mediadas por la enzima Quinasa AMP-Activated. (Por ejemplo el papel de la quinasa AMP-Activa en estimulacin del catabolismo de los cidos grasos por AMP se discutir ms adelante.)

Anlogos Artificiales de la ATP han sido diseados que son resistentes a la hendidura del fosfato terminal por hidrlisis, por ejemplo, kossnp, representa a la derecha. Estos anlogos se han utilizado para estudiar la dependencia de reacciones acopladas en la hidrlisis de ATP. Adems, han hecho posible cristalizar una enzima que cataliza la hidrlisis de ATP con una anloga en el sitio activo de la ATP.

LA reaccin que es importante para el equilibrio de ~ P entre nucletidos de adenina dentro de una clula es catalizado por la Adenilato quinasa : ATP + AMP.. 2 ADP La reaccin de la adenilato quinasa tambin es importante porque el sustrato para la sntesis de ATP, por ejemplo, por la mitocondrial ATP Synthase, es ADP, mientras que algunas reacciones celulares dephosphorylate ATP hasta AMP . Equilibra la enzima Nuclesido difosfato quinasa (nudiki) ~ P entre los nucletidos diferentes que se necesitan, por ejemplo, para la sntesis de ADN y ARN. Nudiki cataliza reacciones reversibles tales como: ATP + GDP------ ADP + GTP para formar DNA Y RNA ATP + UDP -------ADP + UTP POLIFOSFATO INORGNICO..hidrolizar este P y sacar e, nuestras clulas no son capaces de hacer eso. Muchos organismos almacenan energa como polifosfato inorgnico, una cadena de muchos residuos de fosfato Unidos por enlaces phosphoanhydride. Se puede representar como: P~P~P~P~p... Hidrlisis de P residuos de polifosfato pueden acoplarse a las reacciones dependientes de la energa. Segn el organismo o tipo de clula, polifosfato inorgnico puede tener funciones adicionales. Por ejemplo, puede servir como un reservorio de P, un quelante de iones metlicos, un tampn o un regulador. Nucletidos que se unen a 3 y liberan 2p

5 Por qu los vnculos phosphoanhydride tienen una alta energa libre de hidrlisis? Factores que contribuyen para el ATP y el PP se cree que incluyen:

Estabilizacin de la resonancia de los productos de la hidrlisis supera estabilizacin de resonancia del mismo Repulsin electrosttica entre oxgenos fosfato cargados negativamente favorece la separacin de los fosfatos.

Fosfocreatina (tambin llamado fosfato de creatina), otro compuesto con un vnculo de fosfato de "alta energa", se utiliza en las clulas nerviosas y musculares para almacenamiento de enlaces. ~ P Creatina-cinasa cataliza: Fosfocreatina + ADP ATP + creatina Es un reversible reaccin de , aunque ligeramente la constante de equilibrio favorece la formacin de fosfocreatina. Fosfocreatina se produce cuando los niveles de ATP son altos. Cuando el ATP se agota durante ejercicio muscular, fosfato se transfiere de fosfocreatina a ADP, para reponer el ATP. Fosfoenolpiruvato (PEP), involucrados en la produccin de ATP en la gluclisis ATP. Eliminacin de fosfato desde el enlace ster en PEP es espontnea, ya que el producto de enol convierte espontneamente a una cetona. El enlace ster en PEP es una excepcin. steres de fosfato, formado por la divisin de agua entre un cido fosfrico y un grupo hidroxilo, tienen generalmente un baja pero la negativa DG de hidrlisis. Ejemplos, que se muestra a continuacin, se incluyen:

El vnculo entre el primer fosfato y el hidroxilo de la ribosa del ATP. La vinculacin de fosfato y un grupo hidroxilo en glucosa-6-fosfato o glicerol-3-fosfato . La vinculacin de fosfato y el grupo hidroxilo de un residuo de aminocido en una protena (serina, treonina o tirosina). Regulacin de protenas por fosforilacin y desfosforilacin se discutir ms adelante. Un ejemplo mencionado es AMPActivated quinasa.

6 ATP.- Tiene funciones especiales en el acoplamiento de la energa y la transferencia de fosfato. La energa libre de hidrlisis del fosfato del ATP es intermedio entre los ejemplos figuran en la siguiente tabla . ATP as puede actuar como un donante de fosfato y ATP puede ser sintetizado por transferencia de fosfato de otros compuestos, como el fosfoenolpiruvato (PEP). Compuesto Fosfoenolpiruvato (PEP) Fosfocreatina Pirofosfato ATP (al ADP) Glucosa-6-fosfato Glicerol-3-fosfato DGo' de hidrlisis del fosfato (kj/mol) 61.9 43.1 33. 5 30.5 13.8 9.2

Algunos otros enlaces de "alta energa": Una forma de tioster entre un cido carboxlico y un grupo tiol (SH), por ejemplo, el tiol de coenzima A (coa-SH abreviado). Thioesters son los vnculos de "alta energa". En contraste con steres de fosfato, thioesters tienen gran negativa DG de hidrlisis.

El tiol de la coenzima A puede reaccionar con un grupo carboxilo del cido actico (produciendo acetil-coa) o un cido graso (rendimiento graso acil-coa). La espontaneidad de la hendidura tioster es esencial el papel de la coenzima A, como un portador de grupo acil. Como ATP, acil-coenzima A tiene un potencial de transferencia de grupo de alto.

Coenzima A incluye -mercaptoethylamine , un enlace amida al grupo carboxilo de la vitamina B pantotenato. El hidroxilo de pantotenato es en enlace ster a un fosfato de ADP-3'-fosfato. El grupo funcional es el tiol(SH) de -mercaptoethylamine.

7 3', 5'-Cyclic AMP (abreviado de campo), se muestra a la derecha y abajo, es utilizado por las clulas como una seal transitoria. Adenilato ciclasa (Cyclase del Adenylyl) cataliza la sntesis de campo: ATP campamento + PP . La reaccin es muy espontnea debido a la produccin de PP, que hidroliza espontneamente. Fosfodiesterasa cataliza cataliza la ruptura hidroltica de uno de los vnculos de ster de fosfato (en rojo), conversin de campo 5'-AMP. Se trata de una reaccin muy espontnea, porque campo sterically est limitado por tener un fosfato con enlaces ster a dos hidroxilos de la ribosa misma. La labilidad del campo a la hidrlisis es una excelente seal transitoria. Papeles de la seal de campo se discutirn por separado.

Identificar el vnculo que es troceado al campamento es hidrolizado a AMP. Por qu es la ruptura de este enlace por hidrlisis espontnea? Distincin entre termodinmica y cintica: Una barrera de energa de activacin alta generalmente causa la hidrlisis de un "bono de alta energa" por ser muy lento en la ausencia de un catalizador de la enzima. Esta "estabilidad cintica" es esencial para el papel del ATP y otros compuestos con enlaces de ~ . Si el ATP se hidroliza rpidamente en ausencia de un catalizador, no podra servir sus papeles importantes en el metabolismo energtico y la transferencia de fosfato. Fosfato es eliminado del ATP slo cuando la reaccin se acopla mediante catlisis de la enzima a alguna otra reaccin til a la clula, como el transporte de un ion, fosforilacin de la glucosa, o la regulacin de la enzima por fosforilacin de un residuo de serina. Oxidacin y reduccin de sern cubiertos en ms detalle ms adelante. Aqu se presentar una breve introduccin a los temas seleccionados. La evolucin de la fotosntesis y la generacin del oxgeno que ahora abunda en nuestro medio, permiti el desarrollo de vas metablicas que se derivan de la energa de la transferencia de electrones del oxgeno en ltima instancia a molecular de varios reductores. Oxidacin de un tomo de hierro implica la prdida de un electrn (para algunos tomo aceptor): Fe++ (reducido) Fe+++ (oxidado) + ePara un compuesto de carbono, mayor oxidacin significa aumento del nmero de enlaces C-O. Puesto que los electrones en un enlace C-O se asocian ms con el oxgeno, el C se convierte relativamente deficiente de electrones cuando vaya de hidrocarburos a CO2. Oxidacin del carbono es espontnea (rendimiento de energa).

Dos portadores de electrones importante en el metabolismo son NAD+ y FAD . NAD+ (Nicotinamide Adenine Dinucleotide) funciona como un aceptor de electrones en las rutas catablicas. El anillo de nicotinamida del NAD+, que se deriva de la vitamina niacina, acepta 2 e- y uno H+ (un hidruro) va al estado reducido, como NAD+ se convierte en NADH. Vase tambin p. 461 y 555. NADP+ /NADPH es similar, excepto un adicional fosfato esterificado a un grupo hidroxilo en la ribosa de adenosina. Funciones de NADPH como donante de electrones en vas sintticas.

La reaccin de transferencia de electrones puede resumirse como: NAD+ + 2 e + H+ NADH

Tambin se puede escribir como: NAD+ + 2 e + H 2+ NADH + H+

FAD (Flavin Adenine Dinucleotide) tambin funciona como un aceptor de electrones. La porcin de moda que sufre oxidacin/reduccin es el anillo de dimethylisoalloxazine, derivado de la vitamina riboflavina..

FAD acepta normalmente 2 e y H 2+ en ir a su estado reducido: FAD + 2 e- + 2 H+ FADH2

NAD+ es una coenzima, que se une reversiblemente a las enzimas. FAD es un grupo prosttico, que generalmente permanece estrechamente unido en el sitio activo de una enzima.

9 GLUCLISIS Y FERMENTACIN Va de la gluclisis Las reacciones de la glicolisis tienen lugar en el citosol de las clulas. Glucosa entra en la va de la gluclisis por conversin a glucosa-6-fosfato; Inicialmente, hay entrada de energa correspondiente a la ruptura de dos enlaces P de ATP. 1.- HEXOQUINASA: cataliza: Glucosa + ATP glucosa-6-fosfato + ADP La reaccin de la hexoquiinasa implica el ataque nucleoflico(susticin nucleofilica donde se remplaza un grupo por otro) del oxgeno del oxihidrilo del C6 de glucosa por fsforo del fosfato terminal del ATP. ATP se une a la enzima como un complejo con Mg++ La carga positiva del Mg++ interacta con tomos de oxgeno cargados negativamente del fosfato del ATP, proporcionando la compensacin de cargas y brindar y promover una conformacin favorable de ATP en el sitio activo, de la hexoquinasa evitando que haya repulsin. Por consiguiente el magnesio es un estabilizador de cargas. La reaccin catalizada por la hexoquinasa es altamente espontnea. Un enlace de fosfoanhydrido de ATP (~ P) se escinde. El ster del fosfato formado en glucosa-6-fosfato tiene un menor DG de hidrlisis. Ajuste inducido : Atascamiento de la glucosa en la hexoquinasa estabilizando una conformacin en la cual: El hidroxilo del c6 de la glucosa dependiente est cerca de la terminal fosfato de ATP, promoviendo la catlisis. El agua se excluye del sitio activo ,esto evita que la enzima cataliz la hidrlisis del ATP, en lugar de transferir el fosfato a la glucosa; entonces el sitio activo de la hexoquinasa es hidrofobico o hay zonas hidrofobicas que facilitan que no haya agua. Es un motivo comn para una enzima que el sitio activo se encuentra en una interfase entre los dominios de la protena que estn conectadas por una regin de bisagra flexible; La flexibilidad estructural permite el acceso al sitio activo, permitiendo un posicionamiento preciso de residuos al sitio activo y algunos casos exclusin del agua promueve la Unin del sustrato como una conformacin particular. Mg , Zona hidrofobica
Dentro del sitio activo evitan que el ATP se hidrolIze

La glucosa es fosfatada por la energia del ATP.

10 2. FOSFOGLUCOSA ISOMERASA cataliza: Glucosa-6-fosfato (Aldosa) ..fructosa-6-fosfato (cetosa) El mecanismo de la Fosfoglucosa Isomerasa implica la catlisis del cido/base, con la apertura del anillo,a travs de una isomerizacin enediolato, intermediario y a continuacin cierre del anillo. Rx de acoplamiento,espontanea con DG negativo. Una reaccin similar catalizada por la Triosa fosfato isomerasa se presenta con ms detalle a continuacin 3. FOSFOFRUCTOKINASE cataliza Fructosa-6-fosfato + ATP.. Fructosa-1, 6-bifosfato + ADP Esta reaccin es muy espontnea tiene un mecanismo similar a la de la hexoquinasa. La reaccin de la Fosfofructoquinasa es el paso de limitacin de velocidad de la gluclisis. La enzima est altamente regulada, como se expondr ms adelante. La fosfofructoquinasa limita la Rx controla, regula, activa o inactiva. Son importantes pork regulan reacciones: x sealizacin, x su producto, x inhibidores. La glucosa cambia de estados de mayor energa a mas bajos. Al algunas enzimas que controlan.

4. ALDOLASA cataliza: Fructosa-1, 6-bifosfato. Dihidroxiacetona fosfato + gliceraldehdo-3-fosfato La reaccin de la aldolasa es una hendidura del aldol, el reverso de una condensacin aldlica. Tenga en cuenta que pasan a los tomos de carbono en los productos de reaccin. Un residuo de lisina en el sitio activo de las funciones de enzima aldolasa en catlisis. El grupo ceto de fructosa-1, 6-bisp reacciona con el e-grupo amino sitio activo lisina, para formar un base intermedia protonada Schiff. Sigue la ruptura de los lazos entre C3 y C4. Esta enzima la aldosa produce una ruptura aldolica de tipo aldol esta enzima en su sitio activo se une a la lisina y forma una base de shiff una especie de sumidero de electrones( atrae, jala) si es positivo atraer elecrones de doble enlace y electrones de esa zona son atrados ala parte positiva y tendr k reponer el enlace de este carbona, lgicamente hay ruptura.

del

11 5. TRIOSA FOSFATO ISOMERASA (TIM) Dihidroxiacetona fosfato (cetosa) gliceraldehdo-3-fosfato (Aldosa) Gluclisis contina de gliceraldehdo-3-fosfato. La constante de equilibrio (Keq) para la reaccin de TIM favorece la dihidroxiacetona fosfato, pero retiro de gliceraldehdo-3-fosfato por una reaccin espontnea posterior permite rendimiento. La conversin de Cetosa/Aldosa de TIM implica la catlisis del cido/base y se piensa proceder mediante un enediol intermedio, como con la Fosfoglucosa Isomerasa, Sitio activo Glu y sus residuos se piensan extraer y donar protones durante la catlisis.

2-Phosphoglycolate es un ejemplo de un estado de transicin analgico que une fuertemente en el sitio activo de la Triosa fosfato isomerasa. Este inhibidor de la catlisis por TIM es similar en estructura a la enediolate propuesta intermedia. TIM es considerado una "enzima perfecta", porque la velocidad de reaccin est limitada slo por la tasa a la cual substrato choca con la enzima. La estructura de la Triosa fosfato isomerasa es un barril de ab , o el cilindro de TIM . En un barril de ab hay 8 paralelo b-filamentos rodeados por 8 un-hlices. Circuitos cortos conectan alterna b-hilos y unhlices. Cuando se reconstituye la energa la dihidroxiacetona se convierte en gliceraldehido x k esla nica pero para k la dihidroxiacetona se convierta en gliceraldehido 3P libera y capta protones formando un intermediario ENENDIOL k es una forma de catlisis acido bsica, que involucra aminocidos como glutamato e histidina. TIM barriles sirven como andamios para residuos activos del sitio en una gran variedad de enzimas. Residuos que forman el sitio activo siempre se encuentran en el mismo extremo del can, asociado con los extremos de la terminal C de b-filamentos y los lazos conectndolas a un-hlices. Hay debate sobre si las muchas enzimas diferentes de barril TIM se relacionan evolutivamente, ya que a pesar de las similitudes estructurales hay gran diversidad en funciones catalticas de estas enzimas y poca homologa de secuencia. Explore a la derecha la estructura de la homodmero de Triosa fosfato isomerasa (TIM), con el estado de transicin inhibidor 2-phosphoglycolate atado a uno de los monmeros de TIM. Nota la estructura del can de TIM y el lazo que forma una tapa que se cierra sobre el sitio activo despus del sustrato.

12 6. GLICERALDEHDO-3-FOSFATO DESHIDROGENASA cataliza: Gliceraldehdo-3-fosfato + NAD+ + P 1.3, Bisfosfoglicerato + NADH + H+

Oxidacin Exergnico de los aldehdos en gliceraldehdo-3-fosfato, a un cido carboxlico, impulsa la formacin de un fosfato acil, un bono de "alta energa" (~ P), en 1, 3-Bisfosfoglicerato. Este es el nico paso en la glicolisis en que NAD+ se reduce a NADH.

Un tiol de la cistena en el sitio activo de gliceraldehdo-3-fosfato deshidrogenasa tiene un papel de catlisis (p. 596).

El aldehdo de gliceraldehdo-3-fosfato reacciona con el tiol de la cistena de sitio activo para formar un intermedio de thiohemiacetal. Oxidacin de un cido carboxlico (en un tioster de "alta energa") se produce, como NAD+ se reduce a NADH. La "alta energa" acil tioster es atacado por P ceder el acil fosfato (~ P) producto.

Recordar que NAD+ acepta 2 e- ms un H+ (un hidruro) en ir a su forma reducida.

7. FOSFOGLICERATO QUINASA cataliza: 1, 3-Bisfosfoglicerato + ADP. 3-fosfoglicerato + ATP Esta transferencia de fosfato al ADP, del grupo carboxilo en 1, 3Bisfosfoglicerato, es reversible (baja DG), puesto que uno ~ P enlace es troceado y otro se sintetiza. La enzima sufre un cambio conformacional inducida por sustrato similar de la hexoquinasa.

13 8. FOSFOGLICERATO MUTASA cataliza: 3-fosfoglicerato. 2-fosfoglicerato Fosfato se desplaza desde el hidroxilo en C3 de 3-fosfoglicerato al hidroxilo en el C2.

Un sitio activo histidina side-chain participa en la transferencia de fosfato, al donar y aceptar el fosfato. El proceso implica un intermedio de 2, 3-bifosfato.

9. ENOLASA cataliza:

2-fosfoglicerato-------- fosfoenolpiruvato + H2O

Esta reaccin de deshidratacin es Mg++-dependiente. Los iones de magnesio++ interactan con los tomos de oxgeno del grupo carboxilo substrato en el sitio activo. Los iones de magnesio++ ayudan a estabilizar el anin enolate intermedio que se forma cuando un grupo amino de la cadena lateral del lisina extrae un protn de carbono #2. 10. PIRUVATO QUINASA cataliza: Fosfoenolpiruvato + ADP---- piruvato + ATP Esta transferencia de fosfato de PEP al ADP es espontnea. PEP tiene una mayor DG de hidrlisis del fosfato de ATP, porque la extraccin de fosfato de PEP rinde un enol inestable, que espontneamente se convierte en la forma de ceto de piruvato . requiere cationes inorgnicos K+ y Mg++ se unen a residuos aninicos en el sitio activo de la piruvato quinasa. Va Gluclisis (omitiendo H+): Glucosa + 2 NAD+ + 2 ADP + 2 P .2 piruvato + NADH 2 + 2 ATP En organismos aerobios , piruvato producido en la glicolisis es oxidado a CO2 mediante el ciclo de Krebs y el NADH producido en la glicolisis y ciclo de Krebs se reoxida a travs de la cadena respiratoria, con produccin de mucho ATP adicional.

14 FERMENTACIN Organismos anaerobios carecen de una cadena respiratoria. Se debe reoxidize el NADH producido en la glicolisis por alguna otra reaccin, porque NAD+ es necesario para la reaccin de la gliceraldehdo-3-fosfato deshidrogenasa (vase arriba). NADH es generalmente reoxidado como piruvato se convierte en un compuesto aun ms reducido. La va completa, incluyendo la gluclisis y la reoxidacin del NADH, se llama fermentacin . Por ejemplo, lactato deshidrogenasa cataliza la reduccin del grupo ceto en piruvato a un hidroxilo, produciendo lactato, como NADH es oxidado a NAD+. L actate, adems de ser un producto final de fermentacin, sirve como una forma mvil de energa nutritiva y posiblemente como una molcula sealizadora en organismos mamferos. Las membranas celulares contienen protenas portadoras que facilitan el transporte de lactato. Los msculos esquelticos fermentan la glucosa a lactato durante el ejercicio, cuando el esfuerzo es breve e intensa. Lactato liberado a la sangre puede ser tomado por otros tejidos o msculo esqueltico despus de hacer ejercicio y convierte a travs de deshidrogenasa de lactato a piruvato, que puede ser oxidado en el ciclo de Krebs o (en el hgado) convierte a de nuevo en glucosa mediante gluconeognesis. Lactato sirve como fuente de combustible para el msculo cardiaco as como las neuronas del cerebro . Astrocitos, que rodean y protegen las neuronas en el cerebro, fermentan la glucosa a lactato y sultelo. Lactato de neuronas adyacentes se convierte en piruvato que se oxida mediante el ciclo de Krebs. Algunos organismos anaerobios metabolizan piruvato al etanol, que es excretada como un producto de desecho. NADH se convierte en NAD+ en la reaccin catalizada por la Alcohol deshidrogenasa. Tiamina Pirofosfato, el cofactor de la Alcohol deshidrogenasa, se discute en otros lugares

Fermentacin Va, de la glucosa a lactato (omitiendo H+): Glucosa + 2 ADP + 2 P .2 lactato + 2 ATP Anaerobicamente el catabolismo de la glucosa produce slo 2 enlaces de "alta energa" de ATP. Regulacin de la glicolisis Enzima de la glicolisis * Hexoquinasa Fosfoglucosa Isomerasa Fosfofructoquinasa Aldolasa Triosa fosfato isomerasa Gliceraldehdo-3-fosfato deshidrogenasa & fosfoglicerato quinasa Fosfoglicerato Mutasa Enolasa Piruvato quinasa Dgo' (kj/mol) DG (kj/mol) -20.9 +2.2 -17.2 22,8 7.9 -16.7 +4.7 3,2 -23.0 -27.2 -1.4 -25.9 -5.9 Negativo -1.1 -0,6 -2,4 -13.9

15 Flujo a travs de la va de la gluclisis es regulado por el control de las 3 enzimas que catalizan altamente reacciones espontneas : hexoquinasa, Fosfofructoquinasa y Piruvato quinasa Estas enzimas con DG mayor dirijen el sentido del proceso.

Control local del metabolismo implica efectos reguladores de diversas concentraciones de va sustratos o productos intermedios, en beneficio de la clula. Control global es para el beneficio de todo el organismo y a menudo implica seal hormonal activada en cascadas.

Las clulas hepticas tienen papeles importantes en el metabolismo, incluyendo sangre manteniendo niveles diferentes de nutrientes como la glucosa. As el control global implica especialmente el hgado. Algunos aspectos de control global por cascadas de la seal hormonal activado se discutir en la seccin en la gluconeognesis . HEXOQUINASA, el primer paso en la va de la gluclisis, es inhibida por su producto glucosa-6-fosfato

Por la competencia en el sitio activo, y por la interaccin alostrica en un sitio independiente sobre la enzima.

Clulas tramp fosforilan la glucosa , evitando la salida en los portadores de la glucosa. La Inhibicin del producto de hexoquinasa asegura que las clulas no seguir acumulando glucosa en la sangre, si [glucosa-6-fosfato] dentro de la clula es amplia. A este tipo de regulacin se denomina FEEDBACK,una regulacin por el producto o una regulacin alosterica. La fosforilacin previene los acarreadores de transporte; en algunas clulas no se almacenan glucosa. A Inhibir la fosforilacion implica inhibir la hexoquinasa. Hgado acumula glucosa,aumenta en el torrente sanguneo, la glucokinasa tambin esta en el hgado y su catlisis es mejor pero solo se activa cuando hay niveles altos de glucosa. Aumenta la insulina..codifica los transportadores de glucosa, tambin codifica los genes glucoquinasa; esta enzima no es inhibida por el producto o sea por la glucosa,por esa NO tiene regulacin. Hay una protena que inhibe glucosa desfosforilada e inhibe la glucoquinasa GLUCOKINASA es una variante de la hexoquinasa ubicada en el hgado

Glucokinasa tiene una alta KM para la glucosa, As es activa slo en altas [glucosa] . Uno de los efectos de la insulina, una hormona producida en respuesta a la glucosa alta en la sangre, es la activacin en el hgado de la transcripcin del gen que codifica la enzima glucoquinasa. Glucokinase NO est sujeta a la inhibicin del producto por la glucosa-6-fosfato.

El hgado toman y fosforila glucosa incluso cuando el hgado tiene concentraciones altas de [glucosa-6-fosfato]. Glucokinase depende de la inhibicin de una protena reguladora glucokinasa (GKRP). La relacin de Glucokinase a GKRP en el hgado cambia en diferentes estados metablicos, proporcionando un mecanismo para la modulacin de las tasas de fosforilacin de la glucosa. As se inhibe la glucokinasa !!!!, tambin hay una proporcin. GKRPcuando se hace se hace ejercicio.;glucokinasa tiene un KM alto. Glucokinase, con su alta KM para la glucosa, permite al hgado almacenar la glucosa como glucgeno en el estado alimentado cuando [glucosa] en sangre es alta. La enzima glucosa-6-fosfatasa cataliza la liberacin hidroltica de P de glucosa-6-fosfato. As la glucosa se libera desde el hgado a la sangre segn sea necesario para mantener la sangre [glucosa].

16 Las enzimas Glucokinase y glucosa-6-fosfatasa, ambos se encuentran en el hgado pero no en la mayora de otras clulas de cuerpo, permitir que el hgado controlar la [glucosa] sangre. la glucosa .sangre.tejido glucosa..glucogeno(150_200gr).acidos grasos ..tej adiposo glugoquinasa 3.- PIRUVATO QUINASA, el ltimo paso de la va de la gluclisis, es controlada por el hgado en parte por la modulacin de la cantidad de enzima .

Alta [glucosa] dentro de las clulas del hgado provoca una transcripcin factor protena carbohidratos elemento responsivo (chrebp) para ser transferido en el ncleo, donde activa la transcripcin del gen de piruvatocinasa. Esto facilita la conversin entre el exceso de glucosa a piruvato, que es metabolizado a acetil-coa, el principal precursor para la sntesis de cidos grasos, para almacenamiento de energa a largo plazo.

Piruvatoquinasa ;enzima que cataliza la ultima reaccin de la glucolisis CHREBP;protena que modula cantidad de glucosa(niveles altos de glucosa);protena enlazante responsable de carbohidratos,factor de transcripcin entra al nucleo e induce al gen de la piruvato quinasa.,el exeso se almacena como acidos grasos pero necesariamente pasa por acetil COA 4.-FOSFOFRUCTOQUINASA es generalmente el paso de limitacin de velocidad de la va de la gluclisis. Fosfofructoquinasa cataliza: fructosa-6-fosfato + ATP fructosa-1, 6-bifosfato + ADP Fosfofructoquinasa (PFK) es allostericamente inhibida por ATP En baja concentracin, el sustrato de ATP se une solamente en el sitio activo. En alta concentracin, ATP se une tambin a una menor afinidad sitio regularorio El ATP regula la fosfofructoquinasa , es como un sensador;los 2 sustratos entran al sitio activo;cuando el ATP; Esta en : poca cantidad se realiza la reaccin; cuando hay mucho ATP no se da la reaccin., entonces se inhibe cuando hay mucho ATP La conformacin tensa de Fosfofructoquinasa tiene una afinidad baja por su otro sustrato, fructosa-6-fosfato. Dependencia sigmoidal de la velocidad de reaccin en [fructosa-6-fosfato] se observa en alta [ATP], como se muestra a la derecha AMP, que est presente en niveles significativos slo cuando hay extensa hidrlisis de ATP, antagoniza el efecto de alta [ATP]. Inhibicin de Fosfofructoquinasa, el paso de limitacin de velocidad de la gluclisis, cuando [ATP] es alta, evita la descomposicin de la glucosa, en un camino cuya funcin principal es hacer que el ATP. Es ms til a la clula para almacenar glucosa como glucgeno cuando abunda el ATP (ver diagrama de caminos interconectados anteriores).