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AO DE LA INTEGRACIN NACIONAL Y EL RECONOCIMIENTO DE NUESTRA DIVERSIDAD

UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL


FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMTICA
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGA

COLORACIN

CURSO: PROFESOR:
PRESENTADO POR:

BIOLOGA CELULAR CZAR ZAA


BORJA ARRATEA, Jos TORRES COELHO, Carlota Dea

Lima, Per 2013

Informe de laboratorio N2 - Coloracin

I.

INTRODUCCIN

Una coloracin o tincin es una tcnica auxiliar utilizada en microscopa con la finalidad de mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias que usualmente se utilizan en Biologa y Medicina para resaltar estructuras en tejidos biolgicos que van a ser observados con la ayuda de los diferentes tipos de microscopios. Los diferentes colorantes pueden ser utilizados para aumentar la definicin y examinar grandes cortes de tejido (resaltando por ejemplo fibras musculares o tejido conectivo), poblaciones celulares (por ejemplo clasificando diferentes clulas sanguneas) o incluso para resaltar organelas dentro de clulas individuales. En el presente informe se detallarn las experiencias de coloracin simple y compuesta de mucosa bucal; coloracin neutra en sangre y coloracin de una clula vegetal como fue la de tallo de geranio. Seguidas de una esquematizacin de resultados obtenidos y discusin de los mismos y finalizando con las respectivas conclusiones y recomendaciones. II. MARCO TERICO

A.

Coloracin

La coloracin es el proceso de coloracin de las clulas o de los componentes celulares para que sea posible su observacin a travs del microscopio. El objetivo de la tincin es la visualizacin de las clulas por medio de la coloracin, ya que nos proporciona un mejor. B. Colorante

Es un compuesto orgnico que le da color a la clula. Est compuesto de: Cromgeno (solvente orgnico que le provee las propiedades de color)

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Auxcromo (grupo qumico que se ioniza con el cromgeno y forma sales que se pegan a las fibras y tejidos). Facilita la unin del colorante a otras sustancias con carga elctrica.

Los colorantes se clasifican como colorantes naturales y sintticos. Los colorantes naturales son utilizados principalmente con fines histolgicos. Los colorantes a la vez pueden ser cidos, bsicos y neutros. La adhesin del tinte va a depender de la carga que posea, como se muestra a continuacin: Tabla 01. Tipos de colorantes.

C.

Tambin estn los colorantes neutros que no tienen carga como el Giemsa, Wright y Leischmans. Tipos de coloraciones

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Tabla 02.

Simple

Tamao, arreglo y forma

Un solo tinte

Neutra Es aquella resultante de Se distinguen diferentes mezclas entre partes de la clula gracias a soluciones acuosas de la contraste de los ciertos colorantes colorantes. cidos y bsicos. Usa dos colorantes Ms de un tinte neutros Coloracin Leishman o Whrigt para ver sangre

Diferencial

Ejm. Tincin con azul de metileno Tincin Gram en catafilo de cebolla.

a) Coloracin simple

Imagen 01. b) Coloracin diferencial o compleja

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Imagen 02. c) Coloracin neutra Principalmente usado en sangre Ej. Coloracin Wright o Coloracin Leishman

Imagen 03. III. MATERIALES

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IV.

Microscopios Goteros y pipetas Lminas porta objetos (4) Alcohol ter Lminas cubre objetos (4) Hematoxilina Palitos de dientes Safranina PROCEDIMIENTOS

Eosina Lanceta hematolgica Azul de metileno Alcohol Wright Algodn Leishmans Aceite de inmersin Agua destilada

A.

Coloracin simple con mucosa labial

1. Realizar el raspado de la mucosa labial, en este caso no se cont con palito mondadiente pero si se realiz con la lmina porta objeto y se realiz el frotis sobre otras lamina portaobjeto. 2. Se deja secar la muestra de mucosa labial. 3. Se agregan dos gotas de alcohol (Esperar a que fije 2 min) 4. Agregar dos gotas de colorante ya sea Eosina o Hematoxilina. 5. Dejar que el colorante fije y est seco. 6. Luego lavar con agua destilada y dejar secar. 7. Posteriormente ver la muestra en el microscopio con aumentos de 10x, 40x y 100x (solo con aceite de inmersin) 8. Esquematizar el resultado obtenido.

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Imagen 04. Raspado bucal

Imagen 05. Frotis bucal B. Coloracin compuesta con mucosa labial

1. Realizar todo hasta el paso nmero seis. 2. Agregar un colorante de contraste y esperar a que se fije en la muestre 3. Esperar a que seque. 4. Lavar con agua destilada y dejar secar 5. Posteriormente ver la muestra en el microscopio con aumentos de 10x, 40x y 100x (solo con aceite de inmersin) 6. Esquematizar el resultado obtenido.

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Imagen 06. Agregando colorante a la muestra

Imagen 07. Dejando secar muestras con hematoxilina.

Imagen 08. Dejando secar muestras con hematoxilina + Eosina.

C.

Coloracin neutra: Extensin sangunea

1. Desinfectar con alcohol la yema del dedo. 2. Con la lanceta pinchar y poner las gotas de sangre en el porta objeto 3. Realizar el frotis sanguneo 4. Secar la lmina a medio ambiente
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5. Agregar 2 o 3 gotas de colorante leishman o Wright (Wright de preferencia). Esperar durante 1 a 2 minutos. 6. Colocar agua destilada hasta cubrir la lmina y esperar 7 minutos. 7. Lavar con agua de cao y secar al medio ambiente o sino con mechero. 8. Posteriormente ver la muestra en el microscopio con aumentos de 10x, 40x y 100x (solo con aceite de inmersin) 9. Esquematizar el resultado obtenido.

Imagen 09. Pinchando el dedo con la lanceta.

Imagen 10. Agregando las gotas de sangre al porta objeto

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Imagen 11. Pasos de Frotis sanguneo

Imagen 12. Realizando el frotis en el laboratorio. D. Coloracin de muestras vegetales

1. Con la ayuda de una navaja realizar un corte transversal al peciolo de la planta de geranio. 2. Los cortes deben ser los ms finos posible y deben ser colocados en una placa Petri con agua. 3. Se pone una gota de agua en la porta objeto. 4. Se escoge el corte ms fino de la placa Petri, 5. Agregar una gota de safranina. Dejar secar. 6. Posteriormente ver la muestra en el microscopio con aumentos de 10x, 40x. 7. Esquematizar el resultado obtenido.

Imagen 13. Cortando el peciolo de geranio

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Imagen 14. Realizando cortes ms finos posibles V. A. RESULTADOS Coloracin simple con mucosa labial Tabla 03.
Constituyente Ncleo Reactivo Hematoxilina Material Clulas de mucosa labial Coloracin Simple y bsica

NCLEO CITOPLASMA

MEMBRANA PLASMTICA

Imagen 15. Clula de mucosa bucal + H a 100X B. Coloracin compuesta con mucosa labial

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Tabla 04.
Constituyente Ncleo y membrana plasmtica Reactivo Hematoxilina + eosina Material Clulas de Mucosa labial Coloracin Compuesta

Ncleo Citoplasma

Membrana citoplasmtica

Imagen 16. Clula de mucosa bucal + H + E a 100x C. Coloracin neutra: Extensin sangunea Tabla 05.
Constituyente Glbulos blancos Reactivo Wright Material Sangre Coloracin Neutra

Monocito

Imagen 17. Vista de un monocito a 100x

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Eosinfilo

Imagen 18. Linfocitos a 100X.

Neutrfilo

D.

Coloracin de muestras vegetales Tabla 06.

Constituyente Xilema + floema

Reactivo Safranina

Material Peciolo de geranio

Coloracin Bsica y simple

Xilema

Floema

Imagen 18. Clula de peciolo de geranio + S a 400x


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VI.

DISCUSIN DE RESULTADOS

1. Los resultados variaron segn la cantidad de colorante y si realmente se respetaron los pasos sealados en la gua. Mayormente cuando el colorante no se ha fijado en la muestra no se puede distinguir las estructuras por lo tanto no se observa lo que uno desea y tiene que volver a hacerlo de nuevo. 2. Si se realiz la coloracin compuesta y los colorantes realmente no se han fijado es muy difcil ver en la muestra los dos colores que se quieren ver en las estructuras que ambos tienen afinidad en algunos casos se ve solo un color y en otras estructuras los dos dando una mejor apreciacin. 3. Contrastando con un informe realizado en el ciclo pasado de Biologa II en esa experiencia en vez de hacer la coloracin y el proceso para ver clulas de mucosa bucal solamente se vieron tambin las de epitelio bucal y realizando coloraciones gram + y gram fue posible ver bacterias. Otra acotacin es que en esta clase el profesor prefiri realizar solo colorante Wright y en la otra experiencia ya antes obtenida la recomendacin fue usar Leishman porque se vean mejor las muestras. 4. Otro es que en las clulas vegetales los cortes realizados no fueron del mismo grosor para todos as que para algunos si les fue posible observar con ms claridad las estructuras y a otros no. 5. Un da anterior En laboratorio de Botnica se vieron tambin clulas de peciolo de geranio y sin realizar la coloracin con safranina se pudo observar lo mismo que con la safranina solo que con color verde muy ligero propio de esa clula. En s en clula vegetal lo primordial es que el corte sea fino.

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VII.

CONCLUSIONES

1. Las clulas teidas presentan un mayor contraste, en ellas resalta y se puede diferenciar mucho mejor las partes de la clula por ejemplo el ncleo y la membrana especialmente dependiendo del colorante que se use. En cambio las clulas no teidas al observar se ven al natural y no se puede distinguir con tanta facilidad. 2. Los glbulos blancos estn presentes en la sangre y son de distintos tipos y estn en diferentes cantidades. 3. Si el individuo presenta una alergia habr una mayor posibilidad de ver eosinfilos y sino, sera un poco difcil ya que estn en una cantidad mnima presente. 4. Los glbulos blancos ms abundantes son los neutrfilos. 5. Los ms grandes son los monocitos 6. Para las clulas vegetales que ya tiene color no es necesario hecha colorantes ya que de por s tienen una natural, y si el corte es fino se pueden ver todas las estructuras correctamente. VIII. RECOMENDACIONES

1. Para la clula del epitelio bucal hacer solo un raspado y dejar la muestra secar y fijarla. 2. Para teir una sustancia y obtener el resultado que se desea se deben seguir correctamente los pasos establecidos en la gua respetando los tiempos etc. 3. No lavar mucho la sustancia ya que se pierde el contenido. 4. Evitar acercar excesivamente la muestra al microscopio ya que se puede ensuciar el objetivo. 5. Utilizar el colorante Leishman en sangre para estudios en parasitologa ya que para experiencias como la realizad en el laboratorio colorante Wright es suficiente.

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6. De una gran cantidad de sangre en una muestra se puede traspasar a otras. 7. Deberan estar las muestras posicionadas de tal manera que el colorante no se caiga sino se distorsiona. 8. Secar la sangre en el portaobjetos es decir la muestra de la misma a la intemperie no fijarla en el mechero. 9. Desinfectar previamente antes de realizar lo anteriormente expuesto y sacar la sangre del anular izquierdo de la parte que est entre la yema y la ua (desechar la primera gota porque posee impurezas) IX. BIBLIOGRAFA

BERMEJO GARCA, [et al].Tcnico Especialista en Anatoma Patolgica,Espaa, Editorial Mad,2006, 345 p. X. WEBGRAFA

http://academic.uprm.edu/~lrios/3725/Ejercicio4.pdf
http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n http://diferencias-entre.com/diferencias-entre-celula-animal-y-vegetal/ http://es.scribd.com/doc/84571115/Diferencias-y-semejanzas-entre-la-celula-animal-y-vegetal

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CUESTIONARIO N1 1. Cules son las diferencias principales entre las clulas vegetales y animales? Tanto las clulas vegetales como las animales son eucariotas, es decir, que son clulas con una estructura interna muy compleja y desarrollada, pero estos dos tipos de clulas tienen grandes diferencias. A parte de las diferencias, encontramos caractersticas en comn. Ambas clulas tienen orgnulos de membrana, ambas tienen ncleo, mitocondrias, retculo endoplasmtico, aparato de Golgi, lisosomas y peroxisomas, citosol y otros elementos del citoesqueleto. Las funciones de los orgnulos son muy similares entre las dos clases de clulas (los peroxisomas realizan funciones muy complejas dentro de las clulas vegetales sobre todo dentro del tema de la respiracin celular). Sin embargo las pocas diferencias que existen entre plantas y animales son muy importantes y se refleja esta diferencia en las funciones de cada clula. Las clulas animales no tienen las paredes rgidas como las clulas vegetales. Esta caracterstica les permite a las clulas animales formar diferentes formas que con una pared rgida no podran formar. Por ejemplo en el caso de las clulas animales denominadas genricamente fagocitarias, esta clula es capaz de comerse a otras estructuras, en cambio, esta caracterstica no aparece en las clulas vegetales. No realizan fotosntesis y son de nutricin hetertrofa Las clulas vegetales por lo general son ms grandes que las clulas animales. El rango de tamao de una clula animal vara de 10 a 30 micrmetros, mientras que para una clula vegetal, puede variar de 10 a 100 micrmetros en funcin de le especie. Aparte del tamao, las principales diferencias entre las clulas vegetales y animales se encuentran en algunas estructuras adicionales que se encuentran en las clulas animales. Entre ellas, destacan: Los cloroplastos, la pared celular y las vacuolas.

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Aparte de esto, otra diferencia notable entre las clulas animales y las clulas vegetales es que estas ltimas tienen cloroplastos para la utilizacin de la luz solar, adems de que les confiere su caracterstico color verde. Es gracias a los cloroplastos que se obtiene la sustancia llamada clorofila . Las clulas vegetales realizan entonces la funcin de fotosntesis, que es un proceso puramente vegetal. Ninguna clula animal es capaz de hacer la fotosntesis osea tienen nutricin auttrofa

Imagen 19. Comparacin clula animal y vegetal.


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Imagen 20. Diferencias resaltantes.

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Imagen 21. Clula animal y clula vegetal 2. Realice un cuadro comparativo entre todos los tipos de clulas observados.

Clula de epitelio bucal +Hematoxilina Se observa ncleo y membrana plasmtica no tiene forma definida Clula de epitelio bucal Hematoxilina + Eosina

Glbulos blancos Se observan los diversos tipos de glbulos blancos con formas y granulocitos segn el tipo Clula de peciolo de geranio + safranina Presenta xilema y floema que no se encuentran en las clulas animales. Por ser una clula vegetal tiene color propio y forma definida.

Se observa ncleo citoplasma y membrana plasmtica hay un contraste en las muestras

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Imagen 22. Clula de epitelio bucal

Imagen 23. tipos de globulos blancos

Imagen 24. Xilema Floema

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CUESTIONARIO N2 1. Explicar el mecanismo de tincin de los colorantes en los tejidos.

Mecanismos de Coloracin: La coloracin celular y tejidos son una combinacin de fenmenos fsicos y qumicos de absorcin: los fenmenos fsicos de absorcin, capilaridad y smosis participan en cierto grado. La afinidad de colorantes bsicos por los tejidos cidos y viceversa indican que hay reaccin qumica. 2. De qu depende la unin de los colorantes? La unin de los colorantes depende del rgano(tejido) con el que tenga afinidad para la tincin, se realiza principalmente por uniones electrovalentes entre grupos anionicos y cationicos del tejido con restos cationicos y anionicos del colorante respectivamente aunque existen otros 3. Cmo favorece el ph cido en la tincin con colorantes aninicos? Las reacciones de los componentes celulares y tisulares con los colorantes cidos no son ni tan especficas ni tan precisas como las reacciones con los colorantes bsicos. Aunque el PH es el principal factor en la unin primaria de un colorantes nionico con el tejido, no es el nico; debido a ello, los colorantes cidos a veces se utilizan combinados para teir en forma selectiva distintos componentes de los tejidos.

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