Carbohidratos 1.- Objetivos Conocer algunas de las propiedades qumicas de los carbohidratos.

Determinar las diferencias entre monosacridos y polisacridos. Determinar las diferencias entre aldosas y cetosas. Determinar las diferencias entre hexosas y pentosas.

2.- Resumen Se utilizaron diferentes carbohidratos (glucosa, fructosa, arabinosa, galactosa, maltosa, sacarosa, lactosa, almidn y goma arbiga) para someterlos a pruebas de identificacin de carbohidratos como: Molish, Antrona, Benedict, Nylander, Barfoed, Saliwanoff, Bial, hidrlisis y prueba de cido mcico, con el fin de determinar las diferencias de reactividad qumica entre los diferentes tipos de carbohidratos. Se encontr que las pruebas de diferenciacin son del tipo colorimtricas y permiten diferenciar entre aldosas y cetosas como la prueba de Saliwanoff; entre hexosas y pentosas como la reaccin de Bial; entre azucares reductores y no reductores como las pruebas de Benedict y Nylander. 3.- Introduccin Carbohidratos Son polihidroxialdehidos o polihidroxicetosas, o compuestos que por hidrlisis se transforman en estas. Los carbohidratos que no puede hidrolizase en compuestos ms simples se denominan monosacridos. Los monosacridos poseen frmula emprica (CH2O)n donde 3 n 6. Se nombran haciendo referencia al nmero de carbonos con terminacin -osa. Los monosacridos son azcares reductores, ya que dan positivo a la reaccin con reactivo de Fehling, a la reaccin con reactivo de Tollens, a la Reaccin de Maillard y la Reaccin de Benedict. Los monosacridos se pueden clasificar de acuerdo a la posicin del grupo carbonilo, por lo tanto pueden ser aldosas o cetosas. De acuerdo al nmero de carbono pueden ser triosas, tetrosas, pentosas y hexosas [1]. Los carbohidratos que por hidrlisis producen dos molculas de monosacridos se conocen como polisacridos. Los polisacridos cumplen funciones diversas, sobre todo de reservas energticas y estructurales. Tienen un peso molecular muy elevado y variable, que depende del nmero de unidades de monosacridos que participen en su estructura, este nmero es casi siempre indeterminado. 4.- Parte Experimental Materiales y equipo: - Placa de calentamiento. - Soporte universal - Pinza para buretas

Bureta de 50 mL Vasos de precipitacin de 400 mL

Tubos de ensayo de 13 mm

Tubos de ensayo de 18 mm

Reactivos: - Reactivo de Molish - Reactivo de Antrona - Reactivo de Benedict - Reactivo de Nylander - Reactivo de Barfoed - Reactivo de Saliwanoff - Reactivo de Bial - Agua destilada - cido sulfrico concentrado - Hidrxido de bario - cido sulfrico 2N - Hidrxido de sodio 2N 4.- Procedimiento PRUEBAS DE IDENTIFICACIN

cido ntrico concentrado Arabinosa Glucosa Galactosa Fructosa Maltosa Sacarosa Lactosa Almidn Goma arbiga Muestra D

Prueba de Molish Colocar en tubos de ensayo aproximadamente 2 mL de las muestras y gotas del reactivo de Molish. Aadir 1 mL de cido sulfrico concentrado. Apreciar el anillo prpura que se forma en la zona de contacto. Prueba de Antrona Repetir el ensayo anterior pero esta vez colocar el reactivo de antrona. Agitar y observar la aparicin de una coloracin verde-azulosa.

PRUEBAS DE CARACTERIZACIN Reaccin de azcares reductores Reactivo de Benedict Colocar de 2 mL del reactivo de Benedict en un tubo de ensayo. Aadir 1 mL de las muestras, mezclar y llevar a bao mara. Anotar el tiempo de reaccin hasta la aparicin de un precipitado rojo. Reactivo de Nylander Repetir el ensayo anterior, esta vez con 2 mL del reactivo de Nylander. Verifique la reaccin en fro y luego a bao mara. La formacin de un precipitado negro de se reportar como positiva.

Diferenciacin entre monosacridos y disacridos Prueba de Barfoed

Colocar en los tubos que contienen las muestra y el blanco, 2 mL del reactivo de Barfoed, mezclar y llevar a bao mara. Tomar el tiempo de reaccin para la formacin de un precipitado rojo Diferencia entre cetosas y aldosas Prueba de Saliwanoff Colocar 2 mL del reactivo de Saliwanoff en los tubos para las muestras y el blanco. Aadir las muestras, agitar y llevar a bao mara. Observar el cambio de coloracin de las cetosas

Conversin de aldosas a cetosas y viceversa en solucin alcalina dbil A 0.5 ml. de una solucin de hidrxido de bario aadir 0.5 ml. de una solucin de fructosa 0.01M A 0.5 ml. de agua destilada aadir 0.5 ml. de solucin de fructosa 0.01M A0.5 ml. de una solucin de hidrxido de bario aadir 0.5 ml. de una solucin de glucosa 0.01M A 0.5 ml. de agua destilada aadir 0.5 ml. de solucin de glucosa 0.01M A 0.5 ml. de una solucin de hidrxido de bario aadir 0.5 ml. de una solucin de lactosa 0.01M A 0.5 ml. de agua destilada aadir 0.5 ml. de solucin de lactosa 0.01M

Agitar y a cada tubo aadir 1 mL de tolueno, tapar con papel de parafina y dejar en reposo hasta por una semana. Hacer ensayos con el reactivo de Saliwanoff con las soluciones de cada tubo.. Prueba para pentosas y polisacridos de pentosas Prueba de Bial Colocar 2 mL del reactivo de Bial en los tubos, aadir las muestras, mezclar y colocarlas a bao mara hirviente por 2 minutos. Retirar los tubos y dejar enfriar a temperatura ambiente. Observar y anotar los resultados.

Hidrlisis cida de un polisacrido Tomar dos tubos de ensayo de 18 cm. y aadir a cada uno 5 ml de una solucin de almidn al 1% y aadir al primer tubo 5ml. de cido sulfrico 2N desde una bureta. Colocar los dos tubos en bao mara por 30 minutos. Enfriar los tubos y aadir al primero 5 ml. de NaOH 2N desde una bureta. Realizar la prueba de Benedict con las soluciones de los dos tubos.

Prueba del cido mcico Colocar respectivamente en tres tubos de ensayo 1 mL de soluciones de galactosa, lactosa y maltosa al 10%. Aadir a cada tubo 1 mL de cido

ntrico concentrado. Calentar los tres tubos a bao mara hirviente por 90 minutos Aadir 5 ml. de agua destilada a cada tubo y dejar en reposo por una semana. Observar los cristales en forma de agujas donde se haya formado cido mcico. 5.- Resultados Pruebas de caracterizacin La Tabla 1 contiene los resultados de las pruebas de caracterizacin de los carbohidratos estudiados indicando (+) para pruebas positivas y (-) para pruebas negativas.
Tabla 1. Pruebas de caracterizacin de carbohidratos
Carbohidrato Arabinosa Fructosa Galactosa Glucosa Maltosa Sacarosa Lactosa Goma arbiga Almidon Agua Muestra problema D Molish + + + + + + + + + + Antrona + + + + + + + + + Prueba Benedict Nylander + 4,59 [min] + + 3,52 [min] + + 7,49 [min] + + 3,30 [min] + + 7,19 [min] + + 7,34 [min] + + 9,00 [min] Barfoed + + + + Saliwanoff + + Bial +

La Tabla 2 contiene las caractersticas fsicas que presentan los diferentes carbohidratos frente a las diferentes pruebas de caracterizacin.

Tabla 2. Caractersticas de las pruebas de caracterizacin

Carbohid rato Arabinos a Molish Anillo violeta en la interfase Anillo violeta en la interfase Anillo violeta en la interfase Antrona Anillo azulverdoso en la interfase Anillo azulverdoso en la interfase Anillo azulverdoso en la interfase Anillo azulverdoso en la interfase Anillo azulverdoso en la interfase Anillo azulverdoso en la interfase Anillo azulverdoso en la interfase Anillo azulverdoso en la interfase Anillo azulverdoso en la interfase Solucin lechosa Benedict Prueba Nylander Barfoed Saliwanoff Bial

Precipitad o rojizo

Solucin amarilla

Precipitad o rojo

-----

Coloraci n azul

Fructosa

Precipitad o rojizo

Solucin amarilla

Precipitad o rojo

Coloracin rosada salmn

-----

Galactos a

Precipitad o rojizo

Solucin amarilla

Precipitad o rojo

-----

TomateAmarillo

Glucosa Anillo violeta en la interfase Maltosa Anillo violeta en la interfase Sacarosa Anillo violeta en la interfase Anillo violeta en la interfase Anillo violeta en la interfase Anillo violeta en la interfase Solucin transpare nte

Transparen te Precipitad o rojizo Solucin amarilla Precipitad o rojo -----

Precipitad o rojizo

Solucin amarilla Transpare nteIncoloro

Coloraci n azul

-----

-----

Coloraci n azul

Coloraci n azul

Coloracin rosada salmn

-----

Lactosa

Precipitad o rojizo

Solucin amarilla

Coloraci n azul

-----

-----

Goma arbiga

Coloraci n azul

Transpare nteIncoloro

Coloraci n azul

----

-----

Almidn

Coloraci n azul

Transpare nteIncoloro Transpare nteIncoloro

Coloraci n azul

-----

-----

Agua

Coloraci n azul

Coloraci n azul

Transparen te

TomateAmarillo

Conversin de aldosas a cetosas La Tabla 3 contiene los resultados de las reacciones de conversin de aldosas a cetosas y viceversa.
Tabla 3.Conversin de aldosas a cetosas
Nmero de tubo 1 2 3 4 5 6 Mezcla Fructosa + hidrxido de bario Fructosa + agua destilada Glucosa + hidrxido de bario Glucosa + agua destilada Lactosa + hidrxido de bario Lactosa + agua destilada Prueba de Saliwanoff + + -

Hidrlisis cida de polisacridos La Tabla 4 contiene los resultados de la reaccin de hidrlisis de polisacridos.
Tabla 4. Hidrlisis cida de polisacridos
Reactivos Almidn + cido sulfrico Almidn Prueba de Benedict + + Hidrlisis + +

Prueba de cido mcico La Tabla 5 contiene los resultados para la prueba de acido mcico.
Tabla n.5: prueba del cido mcico.
Reactivos Galactosa + HNO3 Lactosa +HNO3 Maltosa + HNO3 Observacin Formacin de cristales blancos Formacin de cristales blancos Solucin transparente Reaccin + + -

6.- Discusin de Resultados Prueba de Molish La prueba de Molish es utilizada para la identificacin de carbohidratos en general. Se basa en el hecho en que los azucares al reaccionar con el cido sulfrico forman furfural e hidroximetilfurfural dependiendo si son pentosas o hexosas respectivamente; estos compuestos una vez formados reaccionan con el -naftol para formar el complejo coloreado violeta que se aprecia en la interfase. Debido a que el almidn y la goma arbiga son polisacridos y poseen estructuras ms complejas y deben hidrolizarse primero para formar monosacridos y posteriormente el furfural su tiempo de reaccin es mayor respecto al de los monosacridos, los cuales forman el anillo violeta inmediatamente.

OH H H OH HO H OH OH OH O H O OH H H OH O H H2SO4 OH O H O

2 O

OH

Prueba de Antrona Al igual que la prueba con el reactivo de Molish, la prueba de antrona requiere deshidratar la azcar para formar el furfural, el cual reaccionar con la antrona para formar el complejo coloreado, el cual en este caso es de color azul verdoso.
OH H H OH HO H OH O H OH O O H OH O O H H2SO4 OH O H O

H O O

Reaccin de Benedict La reaccin de Benedict se utiliza para identificar azucares reductores. El reactivo de Benedict consta de una solucin de citrato de sodio con sulfato cprico y medio bsico, resultando en citrato cprico sdico; el cual al reaccionar con aldehdos los se reduce pasando el cobre de su estado de oxidacin +2 a oxido de cobre I. Si la reaccin continua el oxido de cobre puede seguirse reduciendo a cobre elemental. La prueba es positiva debido a la observacin del slido formado de oxido de cobre o cobre elemental.

De las muestras utilizadas dieron positivas todas con excepcin de los polisacridos y la sacarosa, los cuales no reaccionan debido a que el carbn anomrico se encuentra bloqueado formando los enlaces glucosdicos.
O O H HO H H OH H OH OH OH O Cu 2+
+ -

O HO O OH H2O
-

H HO H H

OH H OH OH O OH

Na O

OH

+2

Cu 2O

Na

+ -

O O

OH

En el caso de la fructosa tambin da una prueba positiva debido a que el medio bsico en el que se encuentra la tautomeriza formando glucosa, la cual al ser una aldohexosa puede reaccionar sin ningn problema. O OH
O H OH OH OH H HO H H OH H OH OH OH

HO H H

OH-

Prueba de Nylander La prueba de Nylander tiene el mismo principio de la reaccin de Benedict, con la excepcin que en lugar de cobre el catin a ser reducido es bismuto el cual pasa de su estado de oxidacin Bi+3 a Bi0 formando un precipitado de color negro.
O HO H HO H H OH H OH OH OH H OH H OH OH OH O

Bi

3+

HO H H

Bi

Prueba de Barfoed La prueba de Barfoed se utiliza para diferenciar monosacridos de disacridos, por ende dio positivo solo para las muestras de arabinosa, fructosa, galactosa y glucosa. Una prueba positiva indicar la reduccin del Cu2+ a Cu1+ o Cu0 formando un precipitado de color rojizo.

O H HO H H OH H OH OH OH
H3C

O O
-

HO

O OH H OH OH OH
O

2 H3C

Cu

2+

2 H2O

OH

H HO H H

Cu 2O

H3C OH

Prueba de Saliwanoff La prueba de Saliwanoff permite diferenciar aldosas de cetosas, ambas al deshidratarse en medio cido forman el hidroximetilfurfural, el cual al reaccionar con el resorcinol (reactivo de Saliwanoff) forman una molecula coloreada de color rojo/salmn, con la diferencia de que las cetonas reaccionan de manera mucho ms rpida, siendo esta la forma de diferenciarlas [2]. Este ensayo se realiz con las muestras de fructosa, glucosa y sacarosa, siendo positiva solo para la fructosa y sacarosa debido a que la fructosa es una cetosa y la sacarosa posee fructosa en su composicin.
HO O H H OH H O HO HO OH H+ OH OH O OH OH O H+ OH O HO O O

Cambio de aldosas a cetosas y viceversa Tanto mono como polisacridos no toleran el medio bsico, haciendo que su estructura cambie de aldosa a cetosa y viceversa dependiendo del tiempo de reaccin. Como se puede observar en la Tabla 3. Solo las muestras 1 y 2 dieron resultados positivos, a pesar de que en teora deberan dar positivo las muestras 2, 3 y 5. Esto se debe a que el tiempo en que se dejaron las reacciones permiti no solo el cambio a cetosas, sino tambin una tautomerizacin de nuevo a la forma de aldosas, dando de esta forma resultados negativos.
OH O H OH OH OH HO HO H H O H H OH OH OH

HO H H

OH

Prueba de Bial La prueba de Bial permite diferenciar pentosas de hexosas, ya que el orcinol solo forma el compuesto coloreado de color tomate con furfural mas no con hidroxi metil furfural, por lo tanto de las dos muestras estudiadas como se ve en la Tabla 1 solo la arabinosa dio un resultado positivo
HO H O H HO H OH OH H
CH3 O H+ O OH H+ OH H3C O CH3 HO O OH

+
HO

O HO

Hidrlisis de un polisacrido Los polisacridos como el almidn al tener el carbn anomrico bloqueado no reaccioan con el reactivo de Benedict, por lo que para detectar su presencia se realiza la hidrlisis y posteriormente se lo hace reaccionar con Benedict. Como se observa en la Tabla 4. La hidrlisis fue exitosa sin la necesidad del cido, ya que el calor proporcionado durante el tiempo de reaccin fue suficiente para romper los enlaces glucosdicos. Sin embargo el cido demsotr ser un catalizador ya que el ensayo con Benedict de la muestra 1 fue ms rpido en comparacin con la muestra que solo recibi calor.
OH H H OH H OH O OH H O H OH H OH H OH H OH
OH OH O H H OH HO H OH H OH H O H H OH HO H OH H OH

OH H HO H OH H OH H OH O H O H

HO OH H H OH H OH O OH

O OH H OH O

O OH H O H OH
n

H+

OH OH OH

H OH H

H OH H

Prueba del cido mcico La prueba de cido mcico se la realiza para la deteccin de galactosa en cualquiera de sus formas. De las muestras utilizadas, como se observa en la Tabla 5, solo la galactosa y la lactosa dieron resultados positivos ya que la maltosa no posee galactosa en su estructura.
HO O OH H H OH O

OH HO H H OH H OH H OH OH

HNO 3

H HO HO H HO

Muestra Problema La muestra problema D fue sometida a las diferentes pruebas de caracterizacin de carbohidratos. Con el reactivo de Molish se combrob en efecto que se trataba de un carbohidrato debido a la formacin del anillo violeta en la interfase, con el reactivo de Benedict dio resultado positivo indicando que se trataba de un azucar reductor. Al realizar la prueba de Barfoed dio resultado negativo, indicando que se trataba de un disacrido o un polisacrido, pero debido a que se trataba de un azcar reductor solo poda tratarse de un disacrido reductor, que poda ser maltosa o lactosa, por lo que se realiz la prueba de cido mcico. Como la prueba de cido mcico requiere de largo tiempo para la formacin de cristales, en el plazo de un da no se pudo apreciar ningn cristal, por lo que se concluye que simplemente la muestra problema D se trataba de un disacrido reductor. 7. - Conclusiones Las reacciones de identificacin general de los carbohidratos es la reaccin de Molish y de antrona. Los azcares reductores se los identifica con el reactivo de Benedict o con Nylander. Los tiempos de reaccin para las reacciones de Benedict, Nylander y Barfoed permiten diferenciar los monosacridos de los disacridos, ya que para poder reaccionar los disacridos primero necesitan hidrolizarse. El tiempo de reaccin tambin permite diferenciar cetosas de aldosas en el caso de la reaccin de Saliwanoff Se determin que la muestra problema D era un disacrido reductor, probablemente maltosa o lactosa, y no se pudo determinar exactamente cul era debido a que no se cont con el tiempo necesario para comprobar la presencia de galactosa.

7. - Bibliografa [1] Morrison, R.T. y Boyd. R.N. (1990). Qumica Orgnica, 5 edicin, Addison Wesley Iberoamericana S.A., Mxico. Pginas: 1258, 1259. [2] Guernizo, A., (S/A), Experimentos de Qumica Orgnica con enfoque en ciencias de la vida, Ediciones Elizcom, Colombia. Pginas: 138, 139.