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MICROBIOLOGIA GERAL AULA PRTICA PREPARO E ESTERILIZAO DE MEIOS DE CULTURA INTRODUO Os meios de cultura destinam-se ao cultivo artificial dos microrganismos, fornecendo os principais nutrientes necessrios ao seu crescimento. As principais exigncias nutritivas dos microrganismos esto relacionadas a fontes de carbono, nitrognio, energia e sais minerais. Entretanto existem alguns microrganismos que tambm necessitam de outros fatores de crescimento, como vitaminas e aminocidos. O preparo do meio de cultura deve levar em considerao as condies de pH, presso osmtica, grau de umidade e temperatura necessrias ao desenvolvimento de um meio adequado espcies que se quer cultivar. Portanto necessrio conhecer o microrganismo que se est trabalhando. Caso voc esteja iniciando um trabalho de microbiologia e no tenha ideia de quais indivduos voc ir isolar, deve-se utilizar um meio de cultura dito meio padro que poder sustentar a grande maioria de microrganismos, fungos ou bactrias por exemplo. Nesta aula iremos preparar meios de cultura padro para o crescimento de bactrias e fungos. OBJETIVOS - Conhecer os principais equipamentos e vidrarias utilizados em microbiologia; - Realizar a preparao de meio de cultura; - Realizar a esterilizao de vidrarias e meios de cultivo; - Realizar armazenamento correto do meio de cultura; - Reconhecer fatores que podem interferir na preparao do meio de cultura. MTODO DE PREPARO DE MEIOS DE CULTURA 1. BDA - batata, dextrose e Agar (usado para fungos) Descasque as batatas e pese 200 g, cortando as batatas em fatias. Acrescente 500 ml de gua destilada s batatas e ferva at o cozimento, obtendo 500 ml de caldo. Acrescente 20 g de dextrose e 15 g de gar a um segundo frasco erlenmeyer contendo 500 ml de gua destilada, colocando em um micro-ondas at liquefazer o agar (o lquido ficar cristalino), Junte o caldo de batata mistura de Agar e dextrose. Coloque um tampo de algodo e cubra a boca do frasco de erlenmeyer com papel alumnio.

2. NA - meio gar nutriente (usado para bactrias) Seguir as especificaes do fabricante quanto pesagem do material e a quantidade adequada de gua destilada adicionada para suspenso do meio. Levar o conjunto ao micro-ondas at dissoluo total com posterior autoclavagem (120C por 15 min.). Aps a esterilizao deixar o meio em temperatura ambiente at completa solidificao, estocando adequadamente. MTODOS DE ESTERILIZAO DE MATERIAIS A melhor maneira de garantirmos a destruio de microrganismos presentes em qualquer ambiente mediante a esterilizao. Ao serem expostos a altas temperaturas os microrganismos so destrudos. Entretanto alguns microrganismos produzem esporos, que so formas de resistncia, podendo permanecer inativos por longos perodos e voltar ao estgio inicial de infectividade. Portanto as tcnicas de esterilizao devem destruir tanto clulas quanto os esporos. Existem diversos mtodos de esterilizao e os mais empregados utilizam o calor mido (autoclave) ou seco (estufa, ou forno de Pasteur). 1. Esterilizao por calor seco (Estufa ou forno de Pasteur) Este tipo de esterilizao realizado a temperaturas de 140C a 180C, com tempo de exposio de 60 a 120 minutos, e levam desnaturao e oxidao das protenas, resultando na morte dos microrganismos. indicado para esterilizar vidrarias, instrumentos de corte e materiais impermeveis como ceras, pomadas e leos. 2. Esterilizao pelo Calor mido O calor mido pode ser utilizado para destruir microrganismos presentes em materiais, sendo o vapor dgua sob presso o procedimento mais eficiente. - Vapor dgua: vapor dgua sob presso a mais prtica e segura aplicao do calor mido. Utiliza a autoclave, sendo um processo mais eficiente para destruir os microrganismos e os esporos, que o calor seco. A autoclavagem feita a 121C com tempo de exposio de 15 a 30 minutos e a penetrao do vapor no material garante maior nvel de destruio dos microrganismos, sendo por este motivo um procedimento mais rpido. Controle da Esterilizao imprescindvel o controle de qualidade nos processos de esterilizao. O controle pode ser realizado atravs da utilizao de uma fita especial que mostra, atravs da mudana de cor, se a temperatura desejada foi atingida e tambm atravs do uso de vidrarias com cultivo da bactria Bacillus subtilis, que por ser produtora de esporos, uma eficiente indicadora da qualidade do processo. BIBLIOGRAFIA CONSULTADA: MADIGAN, M. T.; MARTINKO, J. M.; PARKER, J. Microbiologia de BROCK . 10 Edio 2004.