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FLAGELLS INTESTINAUX

Dr. Fatma Saghrouni Laboratoire de Parasitologie CHU F. Hached Sousse

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Flagells

Phylum des Protozoaires : Microorganismes unicellulaires.

Classe des Flagells : Parasites munis de flagelles.


Flagells digestifs Flagell uro-gnital

2
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Flagells sanguicoles: Leishmanies + Trypanosomes

Les flagells intestinaux

Un flagell: 2 Formes =

Forme vgtative = trophozote: - Forme active; se dplace, se nourrit et se reproduit (division binaire). - Responsable de la maladie .

Forme kystique = Kyste:

Forme quiescente, rsistante survie dans lenvironnement responsable de la dissmination et la transmission. Cycle gnral:

Monoxne = cycle direct: flagell a 1 seul hte Cycle fco-oral.

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Cycle fco-oral

FV Kystes

4
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Identification des flagells

Forme vgtative:

Taille. Flagelles: nombre, emplacement, direction. Forme: caractristique quand le flagell est vivant et mobile (37C). Temp. ambiante: simmobilise et sarrondit (sauf Giardia et Trichomonas) Selles fraches (liquides et pteuses ++). Acheminement rapide et examen immdiat. Culture.

Examen direct ltat frais ++ Colorations ne sont pas ncessaires.

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Identification des flagells

Kyste:

Dans selles moules Forme et taille. Coloration au Lugol.

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Flagells intestinaux:

Giardia duodenalis Dientamoeba fragilis = Pathognes

Duodnum

Chilomastix mesnili Penta-trichomonas intestinalis Enteromonas hominis Embadomonas intestinalis = Non pathognes Colon

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GIARDIA LAMBLIA
Synonymes:

Giardia intestinalis Giardia duodenalis Lamblia intestinalis


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Giardia lamblia

Flagell intestinal cosmopolite, trs frquent, responsable dune grande morbidit.

Protozoose intestinale la plus rpandue dans le monde. Prvalence: 5% des examens parasitologiques des selles (EPS). Enfant > Adulte

Forme vgtative:

++ Duodnum: la surface de la muqueuse o elle se X par division binaire. Liquide du tubage duodnal.

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Girdia lamblia: formes vgtatives


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Giardia lamblia: FV

Dans selles diarrhiques + acclration du transit. Trs fragiles, simmobilisent trs vite. De face: Mesure: 10-20 m/ 6-10 m.

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Giardia lamblia: FV

4 paires de flagelles:

Trs longs Dirigs vers la partie postrieure Mouvements en chute de feuilles

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Giardia lamblia: FV

Corps parabasaux: corps mdians


Nombre: 1-2 Mdians En virgule pais et courts Rfringents

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Giardia lamblia: FV

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Giardia lamblia: 3 formes vgtatives. La forme vgtative a 2 gros noyaux situs au niveau de la partie antrieure et un ( 2) corps parabasal en position mdiane en forme de virgule, pais et rfringent.
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Giardia lamblia:
formes vgtatives.
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Giardia lamblia: 3 formes vgtatives.

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Giardia lamblia: formes vgtatives vues de face.


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Giardia lamblia: FV en division (coloration trichrome)


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Giardia lamblia: FV

De profil: A cause de la dpression, le profil de Giardia est en cuillre, en croissant trs caractristique.

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Giardia lamblia: FV vue de profil


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Giardia lamblia: Kyste

Formation: (dans jjunum, + sels biliaires): FV simmobilise, diminue de taille, sentoure dune membrane de + en + paisse. Les 2 noyaux se divisent Kyste mur 4 noyaux contient 2 entits.

Kystes abondants dans les selles (++ moules).


Formation varie dans le temps: nombre progressivement Disparition pendant 7-10 jours: Priode NEGATIVE = muette. EPS doit tre rpt 3x 3-4 jours dintervalle.

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Giardia lamblia: Kyste


Taille: 10-14 m Ovale, contour lisse, mince, rfringent. Cytoplasme se rtracte et se dcolle de lenveloppe un vide qui donne limpression dune double coque.

Flagelles: reliquats flagellaires sous forme dune cloison longitudinale en S allong.

4 noyaux dans 1 kyste mur. Corps parabasaux en virgule rfringents.

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Giardia lamblia: kystes

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Giardia lamblia: kyste Coloration au Lugol

Giardia lamblia: kyste Coloration au Lugol


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Giardia lamblia: kyste


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Giardia lamblia: kyste Coloration au Lugol

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Giardia lamblia: kyste Coloration au MIF

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Giardia lamblia: kystes Coloration au MIF

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Giardia lamblia: kyste (coloration trichrome)


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Giardia lamblia: kyste (coloration trichrome)


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Coloration lhmatoxyline ferrique


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CYCLE

Kyste

Trophozote

Kyste
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PIDEMIOLOGIE

Giardiase est une parasitose intestinale cosmopolite et trs frquente. Protozoaire le plus frquent dans les infections intestinales. 6% des EPS chez lenfant. Rares avant 6 mois (IgA lait maternel). 2% des EPS chez ladulte. Contamination : Directe: interhumaine: mains sales, pidmies dans les crches (couches-culottes). Indirecte: eau de boisson ++ crudits souilles par kystes. Dorigine animale: mammifres (chat, chien, bovins, ovins).

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PIDEMIOLOGIE

Les facteurs de risque de la giardiase sont :


les voyages dans les pays hyperendmiques la mauvaise hygine des mains, la consommation deau du robinet, la consommation de vgtaux crus (salades), la natation dans les rivires et lacs, le contact avec de jeunes enfants portant des couches (personnel des crches).

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PHYSIOPATHOLOGIE
Ingestion daliments souills par kystes Kystes FV multiplication par division binaire: Duodnum Fixation des FV sur muqueuse duodnale Altration entrocytes Atrophie villositaire FV utilisent nutriments et acides biliaires Malabsorption: graisses et vitamines liposolubles (Vit B12)

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CLINIQUE

Charge parasitaire faible Portage asymptomatique: frquent. Charge parasitaire importante Syndrome diarrhique: 1-3 semaines aprs contamination: Diarrhe modre. Douleurs abdominales hautes = pigastralgies. Nauses, anorexie.

Perte de poids, selles malodorantes, distension abdominale. volution: TTT gurison rapide. Sans TTT chronicit + syndrome de malabsorption atrophie villositaire: perte de poids et carence vitaminique (B12): Enfant +++

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DIAGNOSTIC

EPS +++:

FV et/ou Kystes.

Rpt 3 fois 3-4 jours dintervalle (Priode ngative) ED ltat frais, coloration Lugol Concentration Immunofluorescence: sensibilit et spcificit ++, kit commercialis

Recherche dAg spcifiques dans les selles: ELISA Immunochromatographie rapide Enqutes pidmiologiques

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DIAGNOSTIC

FV dans liquide duodnal : parasite pur. tubage duodnal capsule Enterotest (appele aussi String test).

Biopsie jjunale: indique devant un syndrome de malabsorption et EPS ngatif: prsence de Giardia et atrophie villositaire. Culture : possible mais pas pour la routine.

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Entrotest: String test


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Immunofluorescence directe: kyste de Giardia


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PCR avec primers JW1/JW2


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TRAITEMENT

Mtronidazole (Flagyl)
500 mg x 3/j pd 5 10 jours

Tinidazole (Fasigyne )
Dose unique (2 g)

Nitazoxanide
500 mg x 3/j pd 3 jours

EPS de contrle aprs 1 mois est ncessaire.


EPS ngatif: gurison EPS positif: rinfestation, chec TTT

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PROPHYLAXIE

Lutte contre le pril fcal:


Traitement des eaux uses. Installation et utilisation des latrines. Tout lgout.

Hygine des mains et des aliments. TTT des sujets parasits.

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DIENTAMOEBA FRAGILIS

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Dientamoeba fragilis: flagell trs particulier

Dcrit en 1918 par Jepps et Dobell: nouvelle espce dun nouveau genre Nom propos: Dientamoeba fragilis qui sous-entend:

Cest une amibe digestive (entamoeba) Binucle (Di) Trs fragile; dgnrant trs rapidement aprs excrtion dans les selles (fragilis)

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Taxonomie:

DF class dabord dans Famille des Entamoebidae (50 ans) Dobell: DF ressemble Histomonas meleagridis: flagell qui perd ses flagelles en culture ou lors de lenvahissement des tissus DF nest pas une amibe mais plutt un flagell inhabituel

1953, DF et Histomonas dans une nouvelle Famille: Dientamoebidae Analyse structure antignique 1974, Camp et al. ont montr, en microscope lectronique, lexistence de composants dun appareil parabasal connu chez les Trichomonadids et les Hypermastigotes 1980, DF reclass dans lOrdre de Trichomonadida (Histomonas, Monocercomonas et Trichomonas)

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Taxonomie:

1996: techniques molculaires pour prciser la position taxonomique de DF et confirmer que DF est un flagell

Squence du gne codant ARNr de la petite sous-unit ribosomale Toutes les constructions phylogntiques: lien troit de DF avec les Trichomonadae

DF et H. meleagridis sont trs proches et les 2 proviennent dun rcent anctre commun.

DF: 2 gnotypes (1 et 2) avec une distance gntique de 2%

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Taxonomie:

Actuellement:

DF: Parabasalidae Ordre: Tritrichomonadida Famille: Dientamoebidae Genre: Dientamoeba Questions:


Genre Dientamoeba contient une seule espce (DF de lHomme)? DF est une seule espce ou un taxon htrogne avec plusieurs espces (pathognes et non pathognes)?

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Morphologie:

Pas de kyste connu Forme vgtative: trophozote

Taille:

trs variable ++ dans une mme prparation. 4-20 m. moyenne 10-12 m confondu avec les formes minuta et les kystes damibes.

Forme:

Temp. ambiante: simmobilise, arrondie Rchauff, selle fluide, culture: trs actif; met des pseudopodes larges , clairs, en ailes de ventilateur.

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Morphologie:

Noyau:

Typiquement 2 noyaux 10 80% des DF sont uninucls Rarement: 3 ou 4 noyaux Non visibles ltat frais ni avec le Lugol Visibles sur des frottis colors (hmatoxyline ferrique, trichrome) Membrane nuclaire fine peu colorable, sans chromatine priphrique Caryosome form par des grains de chromatine: 4 ou 8 Quand DF a 2 noyaux, ceux-ci sont souvent relis par un filament : paradesmose

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DF: des pseudopodes, un cytoplasme granuleux et 2 noyaux relis entre eux par un filament; paradesmose.
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DF: 2 noyaux Coloration: trichrome


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DF: un ou 2 noyaux. Coloration: trichrome.


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DF: 2 noyaux relis entre eux par un filament; paradesmose. Coloration trichrome.
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DF: 2 noyaux relis entre eux par un filament; paradesmose. Coloration trichrome.
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DF: peut avoir 1 ou 2 noyaux. Coloration: hmatoxyline ferrique.


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DF: trophozote 2 noyaux. Coloration: MGG

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DF au MIF: parasite cytoplasme granuleux et noyaux difficilement visibles.

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Epidmiologie:

Parasite cosmopolite, largement rpandu, pays dvelopps et en voie de dveloppement

Zones rurales et villes Incidence: 1,4% 52% selon les sries Divergence/ Pays, rgion Techniques utilises pour le diagnostic, comptence observateur

Le diagnostic de DF par un laboratoire est un moyen sensible et fiable pour valuer la qualit de lEPS

Touche surtout les enfants et les femmes Plus rare au printemps et en t

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Epidmiologie:

DF parasite principalement lHomme Mais, DF a t m.e.e chez dautres primates (macaque,..), mouton, porc.

Le faible taux dinfestation de ces animaux suggre quils ne jouent aucun rle dans la transmission de DF chez lHomme

En plus, les essais dinfestation exprimentale chez lanimal ont chou: pas de modle animalier pour linfestation/DF

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Cycle volutif

Pas de kyste + FV trs fragile Transmission? 1) Oro-fcale directe ou indirecte par aliments et eau souills:

DF est trs fragile, ne peut pas survivre longtemps (quelques h) Elle dgnre dans leau Essais de transmission interhumaine directe ont chou

2) DF ressemble dautres flagells animaux comme Histomonas qui utilise les ufs de nmatodes comme vecteur

Dobell: DF peut tre transmis par les ufs dAscaris et de Trichuris

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Cycle volutif

Burrows et Swerdlow (1956): lments amibodes, petits, uninucls DF, lintrieur des ufs doxyure rcuprs sur des appendices hbergeant des DF. Mais, images pas trs nettes Nombreuses tudes: Incidence observe de la co-infection DF/Oxyure > incidence thorique (9-20x) DF a mme distribution que loxyure (enfants, femmes ++) Ockert avec 2 autres adultes ont ingr des ufs doxyure rcuprs chez des enfants co-infects par DF/oxyure Ils ont dvelopp une infestation /DF

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Cycle volutif

Efforts pour cultiver DF partir des ufs et des larves doxyure de patients infects par DF PCR pour dtecter ADN de DF partir des ufs doxyure Ont chou Etudes ont montr labsence doxyurose chez des patients infects par DF: Rsolution spontane de loxyurose, Alors que infection/DF peut perdurer pendant des annes

Infestation /ufs doxyure na pas aboutit: infection abortive Labsence doxyure: faux ngatifs (scotch test mal fait, TTT)

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Cycle volutif

Le rle de loxyure comme vecteur pour DF est controvers Aprs 92 ans de sa dcouverte, le mode de transmission de DF = une nigme

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Pathognicit:

Depuis sa description, DF a t considr comme non pathogne Malgr sa m.e.e chez des patients symptomatiques A cause de son apptit pour les bactries commensales Sa nutrition ressemble beaucoup celle de E. coli et diffre de celle de E. histolytica DF se nourrit par phagocytose des bactries commensales, inclusions alimentaires, grains damidon et non des tissus de lhte. Pendant des dcennies, DF a t considr comme un commensal, non pathogne

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Pathognicit:

Puis de nombreuses tudes:


Association frquente DF et signes digestifs Amlioration des signes cliniques sous traitement

Actuellement, dans de nombreux pays, DF est un pathogne potentiel traiter

Qualifi par:

agent nglig de diarrhe , pathogne intestinal mergeant

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Clinique:

Infection par DF Asymptomatique Symptomatologie digestive: 20 58% des sujets infests syndrome aigu ou chronique (30%) Diarrhe souvent modre Douleur abdominale Nauses, anorexie Flatulence, fatigue

Evolution chronique syndrome du colon irritable !!

Expression clinique: ++ enfant > adulte Etudes rcentes: DF > Giardia dans les infections gastro-intestinales

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DIAGNOSTIC

EPS:

ED ltat frais: les noyaux caractristiques sont invisibles Ncessit des colorations++ Les plus fiables: coloration trichrome, hmatoxyline ferrique: mal adaptes la routine

Hmatoxyline ferrique

Coloration trichrome

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DIAGNOSTIC

EPS:

MIF: parasite arrondi, finement granuleux, noyaux non visibles, contrairement aux amibes.

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DIAGNOSTIC:

EPS: Le plus souvent les selles sont trs riches (jusqu 15 30/ champ x40) Mais le diagnostic nest pas toujours vident la temp. du labo, dans selles molles : DF arrondis, immobiles Pour un il non averti, les DF peuvent tre confondues avec des kystes ou des formes minuta damibes. DF en voie de lyse ressemble Blastocystis

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DIAGNOSTIC:

Culture: Nombreuses tudes: cultures sont plus sensibles que lEPS aprs coloration Il faut que linoculation de lchantillon soit rapide car le refroidissement affecte DF Les chantillons ne doivent pas tre rfrigrs De nombreux milieux sont proposs Pas de milieu axnique pour DF La culture des protozoaires digestifs est difficile, longue Pas pour le diagnostic de routine

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DIAGNOSTIC

PCR: Conventionnelles et temps rel ADN cible: ADNr ++ Sensibilit et spcificit ++ Rapidit (PCR temps rel: 2 h) Pour le diagnostic, pidmiologie, taxonomie et la biologie de DF

Problme de dgnrescence rapide de DF dans les selles: extraction < 24h Problme avec les inhibiteurs dans les selles: ncessit dun contrle interne PCR sur des prparations de conservation ne marche pas

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Traitement:

Iodoquinol ++ Paromomycine ++ Tetracycline ++ Metronidazole

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PENTA-TRICHOMONAS INTESTINALIS
Trichomonas intestinalis

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T. intestinalis
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T. tenax

T. vaginalis

Trichomonas spp

Pas de kystes Membrane ondulante

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Trichomonas intestinalis

Flagell cosmopolite Frquence: pays tropicaux ++ Na pas de kyste Les FV survivent longtemps dans le milieu extrieur plusieurs jours dans les selles humides , ce qui permet leur transmission.

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Cycle

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Morphologie:

Taille: 10-15 / 7-10 m. Forme en amande, pointue aux 2 extrmits. Lun des bords latraux dform par les mouvements continuels de la membrane ondulante caractristique du genre Trichomonas.

5 flagelles antrieurs: 4 se dirigent vers lavant. 1 flagelle antrieur se dirige vers larrire formant avec le corps une membrane ondulante longue plisse qui dpasse lextrmit postrieure.

Un axostyle: pointe extrmit postrieure.

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T. intestinalis: forme vgtative

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T. intestinalis: forme vgtative.


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Trichomonas intestinalis:

T. intestinalis est considr comme commensal, non pathogne Diagnostic:


EPS: ++ Recherche des trophozotes dans selles fluides ou pteuses Jamais dans selles moules ou conserves au rfrigrateur

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TRICHOMONAS TENAX
Flagell de la bouche

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Trichomonas tenax

Parasite cosmopolite. Nexiste que sous la FV : Taille : 6 12 m. Morphologie proche de Trichomonas intestinalis mais sa membrane ondulante sarrte aux 2/3 du corps. Frquemment isol au niveau des collets dentaires et cryptes amygdaliennes.

Transmission interhumaine directe par le baiser ou indirecte par objets souills.

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Trichomonas tenax

Pathognicit discute:

les pyorrhes alvolo-dentaires. la congestion des gencives qui saignent facilement au brossage. les gingivites.

DIAGNOSTIC : Recherche par prlvement la base des dents ou au niveau des cryptes amygdaliennes ( des crachats ou des pvemts bronchiques).

TRAITEMENT : Flagyl + antibiotiques

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TRICHOMONAS VAGINALIS
Flagell uro-gnital

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Trichomonas vaginalis

Parasite des voies gnito-urinaires. Responsable de la trichomonase uro-gnitale: IST Nexiste que sous la forme vgtative: meurt rapidement en milieu ext ne peut passer dun sujet un autre que dans un milieu humide. Il survit 1-2h sur surface humide, 24h dans urines ou sperme Proche de Trichomonas intestinalis mais :

taille variable (8 35 m) et en moyenne plus grande. 4 flagelles antrieurs. membrane ondulante plus courte.

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Trichomonas vaginalis: n'existe que sous la forme vgtative. De taille variable (8 35 m), elle a 4 flagelles antrieurs et une membrane ondulante ne dpassant les 2/3 du corps.
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Trichomonas vaginalis:microscope contraste de phase


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Trichomonas vaginalis: 2 formes vgtatives.


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Trichomonas vaginalis: forme vgtative.


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Trichomonas vaginalis

Cosmopolite, trs frquent. Transmission :


Vnrienne +++ Linge de toilettes, siges et eaux des WC ou du bain ?

Souvent associ Candida et autres agents de IST. La mnopause et la priode suivant les rgles favorisent la trichomonose: pH vaginal alcalin

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CLINIQUE
Chez la femme : Vulvo-vaginite :

++ leucorrhes abondantes, spumeuses, ares, jaune verdtre, souvent malodorantes. prurit vulvaire, brlures, dyspareunie lexamen : vagin rouge et oedmati. Introduction spculum trs douloureuse

Peut atteindre les annexes. Peut tre asymptomatique. Priode dincubation: 7 10 jours

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CLINIQUE
Chez lhomme : Le parasite se localise: glandes urtrales, prostate et vsicules sminales Difficile mettre en vidence. homme: souvent porteur asymptomatique

parfois une urtrite subaigu: mission par le mat urtral de scrtions blanchtres brlures du mat et de brlures la miction. absence de signes cliniques Dissmination de la maladie.

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DIAGNOSTIC

Chez la femme:

Prlvement de la glaire cervicale, au niveau des culs-de-sac vaginaux. Avant traitement Pas de rapport sexuel 24-48h avant couvillon strile + srum physio

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DIAGNOSTIC

Chez lhomme: Prlvement avant toute miction matinale Premire srosit matinale au niveau du mat et les urines du 1er jet Le massage de la prostate augmente la sensibilit du prlvement En dehors du labo, utiliser un couvillon humide

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DIAGNOSTIC

++ Recherche du parasite dans les scrtions :


Examen direct: le plus rapide possible (eau physiologique) Frottis colors (MGG, Gram). Culture : rcupre les faux ngatifs de lexamen direct (24-48h).

Peut tre rencontr dans les urines: recherche dans le culot de centrifugation.

Rechercher autres agents de IST (++ Dpistage).

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30/03/2010

TRAITEMENT

Drivs Nitro-Imidazols: Flagyl, Fasigyne, Secnol ++ Traitement local insuffisant traitement gnral indispensable.

Flagyl : 2 g en dose unique (OMS++)

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PROPHYLAXIE

Celle de toute IST:


Rapports sexuels protgs Traitement simultan du ou des partenaires

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CHILOMASTIX MESNILI

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Chilomastix mesnili

Parasite cosmopolite. Frquence trs variable. Diagnostic:

FV: plus frquentes, plus faciles voir (mobilit ++).

Kystes: rares et petits difficiles voir.

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Chilomastix mesnili
Morphologie:

FV:

Taille : 12-20 / 5-6 m Extr. ant arrondie. Extr. post effile. Sillon de torsion caractristique. Cytostome avec un flagelle court et pais 3 flagelles en avant du noyau, se dirigent vers lavant. Un gros noyau.

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Chilomastix mesnili: forme vgtative.


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Chilomastix mesnili: forme vgtative avec 3 flagelles visibles () et un gros noyau ().

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Chilomastix mesnili: forme vgtative

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Chilomastix mesnili: forme vgtative avec 3 flagelles visibles et un gros noyau antrieur.

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Chilomastix mesnili: forme vgtative avec un cytostome contenant un flagelle court et pais bien visible sur cette photo.

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Chilomastix mensnili: forme vgtative.


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Chilomastix mensnili: forme vgtative.


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Chilomastix mensnili: 2 formes vgtatives.


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Chilomastix mesnili

Kystes: Il ny a pas de division du noyau: 1 kyste 1 FV Rares << FV Trs rsistants: coque trs paisse rsistance dans le milieu ext Dissmination Contamination orale Morphologie:

Piriforme, en forme de poire Petite taille (7-10 m). Coque lisse et paisse, trs rfringente. Pole rtrcit: aplatisement et paississement de la coque Lugol: un gros noyau + les flagelles + cytostome

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Chilomastix mesnili: le kyste

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Chilomastix mesnili: kyste.

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Chilomastix mesnili: kyste.

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Chilomastix mesnili: forme vgtative en haut, un kyste en bas.


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Chilomastix mesnili : kyste


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ENTEROMONAS HOMINIS

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Enteromonas hominis

Flagell cosmopolite. FV: la plus petite (3-6 m) repre grce sa mobilit ovalaire ou arrondie noyau petit et antrieur 3 flagelles antrieurs ne sont presque jamais accompagnes de kystes Kystes: Taille: 6-8 m Trs peu rfringents difficiles reprer dans les selles Noyaux: 4 disposs 2/2 1 kyste donne 4 FV au maximum

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Enteromonas hominis: forme vgtative.

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Enteromonas hominis: kyste.

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Enteromonas hominis: kyste. Petit de taille (6-8 m), trs peu rfringents , il est difficiles reprer dans les selles. Il a 1 4 noyaux disposs 2/2.

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Enteromonas hominis: kyste.

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