TECNICAS DE BIORREMEDIACION DE SUELOS CONTAMINADOS CON PETROLEO Escudero Banda Ana1, Henrquez Anaya Caroline2, Martnez Quispialaya Adriana3

RESUMEN En la presente investigacin se aplic la tcnica de biorremediacin de suelos en muestras contaminadas con petrleo DB5. Se utilizaron en ella los mtodos de bioestimulacin (con compost y biol) y bioumentacin (con una solucin bacteriana), los cuales estn basados en la capacidad degradativa de los microorganismos que habitan el suelo, por un periodo de 27 das. Posteriormente, se analiz su eficacia en la biodegradacin del contaminante con el uso de bioindicador Lactuca sativa (lechuga). Para ello se cuantifico el ndice de germinacin de esta en el lapso de 100 horas (tiempo de germinacin de la lactuca sativa), obtenindose un mayor ndice en las muestras tratadas con biol (I.G = 0.74). Con lo que se puede concluir que para esta investigacin, la tcnica de bioestimulacin con biol fue el mejor tratamiento para el suelo contaminado con petrleo DB5. PALABRAS CLAVE: Biorremediacin, bioestimulacin, bioaumentacin, biol y compost.

1 2

Estudiante de pregrado de la especialidad de Ingeniera Ambiental (3er ciclo) Estudiante de pregrado de la especialidad de Ingeniera Ambiental (3er ciclo) 3 Estudiante de pregrado de la especialidad de Ingeniera Ambiental (3er ciclo)

INTRODUCCIN Debido a los crecientes casos de derrames de petrleo en suelos, en la actualidad, existen diversas tcnicas que buscan solucionar el problema de contaminacin ocasionado; sin embargo, estas tcnicas incluyen procesos

composta madura, es una solucin de bajo costo y tecnolgicamente efectiva para

remediar suelos contaminados por residuos orgnicos peligrosos como los hidrocarburos totales de petrleo.(Eweis et al. 1998) Investigaciones de biorremediacin en el occidente de Tabasco (Mxico) demostraron una descomposicin en medios de cultivo de casi 70% de hidrocarburos durante un periodo de 17 das por estimulacin de bacterias nativas, resultando en un incremento de bacterias de 70 000 veces (Wilson et al., 1993)4. Lserentant y De Sloover (1976), en su investigacin, se refieren a un bioindicador como: " ser vivo, organismo o comunidad, que es reflejo fiel del medio en el que crece y se desarrolla. La observacin de un ser vivo puede de esta forma ser un indicador de la calidad o de las caractersticas del medio". Evaluaciones sobre la fitoxicidad de

qumicos y/o fsicos que pueden aminorar el dao causado, pero tambin generar estragos en el ambiente, siendo necesario la aplicacin de procesos que mejoren la calidad del suelo a travs de medios biolgicos. Es por ello que la biorremediacin viable para constituye con una solucin de

suelos

problemas

contaminacin de petrleo. No son muchos los estudios realizados sobre este tema, pero algunos definen a la

biorremediacin como una tecnologa que utiliza el potencial metablico de los

microorganismos

(fundamentalmente

bacterias, pero tambin hongos y levaduras) para transformar contaminantes orgnicos en compuestos ms simples, poco o nada contaminantes, y, por lo tanto, se puede utilizar para limpiar terrenos o aguas

hidrocarburos sealan que la respuesta a la presencia de hidrocarburos durante la

germinacin varia de una especie a otra, reportndose la resistencia de las semillas en el siguiente orden (Chaineau et al. 1997): Girasol>Frejol>Trigo>Trbol>maz>cebada>l echuga. Por consiguiente las semillas de Lactuca sativa en son buenos indicadores en suelos

contaminadas (Glazar y Nikaido, 1995). Existen as tcnicas de biorremediacin utilizando compost, biol y bacterias cuya efectividad es comprobada por indicadores biolgicos o bioindicadores. Los investigadores a nivel de laboratorio, piloto y a gran escala, han demostrado que el proceso de composteo, as como el uso de

biolgicos,

especial

contaminados con hidrocarbutos.

4

Bartolo Santiago, Jaime Isidro (2008), p.12

Actualmente hay preocupacin por este tema. PETROPER S.A. contrat al consorcio HAZCO-Sagitario, para remediar los pasivos ambientales de los suelos contaminados por hidrocarburos, S.A.5 En este sentido, el objetivo del presente estudio es determinar el mtodo ms eficiente de biorremediacin en muestras de suelos de la UNALM contaminados con petrleo, a travs de la aplicacin de tcnicas de biorremediacin mediante el uso de compost, biol y bacterias; debido a que constituyen una opcin sencilla, barata y viable por no causar efectos adversos en el ambiente. Donde se evaluara la efectividad de la biorremediacin durante un periodo de 27 das mediante el uso de semillas de Lactuca sativa como utilizando la tcnica de

concentraciones: 1ml, 3ml y 5ml. Luego se procedi a preparar los tratamientos a aplicar en cada muestra: -Tratamiento A: 102 ml de solucin de biol (15ml/ litro de agua) -Tratamiento B: 100 gramos de Compost -Tratamiento C: 15 ml de solucin bacteriana extrada de un biorreactor de aguas

biorremediacin, de la Refinera La Pampilla

contaminadas con petrleo. La aplicacin de los tratamientos de compost y biol se realizaron con el propsito de bioestimular; y la aplicacin de la solucin bacteriana, con el fin de bioaumentar. Preparacin de muestras control .- Se prepararon 4 muestras de suelo (500 g. c/u) como control del experimento, cada muestra se deposit en un recipiente de plstico; a tres de ellas se le aplico petrleo a diferentes concentraciones; y la ltima no fue alterada.

bioindicador. MATERIALES Y METODOS

Aireacin y humedad del suelo.- Durante el Toma de Muestras.- Las muestras de suelo fueron recolectadas en Octubre del 2011 en La Molina, Lima, Per; segn el mtodo de muestreo de suelo descrito por Jackson (1976). Preparacin de ensayos .- Se colocaron 9 muestras de suelo, cada una de 500 g. en recipientes de plstico. Posteriormente se aplic
5

periodo de tratamiento de los ensayos (27 das) se aplic 4ml de agua (volumen a capacidad de campo), y se favoreci la aireacin del suelo a travs de la remocin diaria de cada muestra de suelo con el fin de mantener las condiciones adecuadas para la biodegradacin de petrleo. Germinacin.- Despus de 27 das de aplicados los tratamientos se procedi a traspasar las muestras de suelo contenidas en

Petrleo

DB5

diferentes

Ibdem, p. 13

cada ensayo a bandejas de germinacin, con la finalidad de probar la eficacia de cada tcnica biorremediadora mediante la germinacin de semillas de Lactuca Sativa. Luego se sembr 27 semillas de Lactuca sativa a una profundidad no mayor a 5mm.de la superficie del suelo por cada ensayo realizado; se dieron las condiciones

(20 % en germ volumen de muestra de suelo) IG=0 .74 1 TRATA MIENT OC semil la germ

germ

germ

germ

inada inada s

inada inada s s

la s

IG=0

IG=0

1 semil la germ inada IG=0 .18

0 semil las germ inada s IG=0

2 semil las germ inada s

necesarias para la adecuada germinacin, como el mantenimiento de la humedad del suelo y el aporte de luz solar. Finalmente se cuantifico el ndice de

BACTER inada IAS IG=0 .18

germinacin, despus de 100 horas del sembrado; luego se registraron los resultados para su posterior anlisis y discusin. PETROLEO 1 ml RESULTADOS MUESTRAS TRATA MIENT OS TRATA MIENT OA COMPO ST PETRLEO 1ml 1 semil las germ inada 3ml 5ml TOT AL 1 semil la germ inada 0 semil 2 las germ semil las CONTROL

3ml

3ml 0ml 2 semillas

germinadas IG=0 IG=0 IG= 0 IG=0.37

El tratamiento que obtuvo un mayor ndice de crecimiento durante el tiempo de 100 horas (4 das) tiempo de germinacin de Lactuca Sativa (lechuga)- fue el del biol, con un IG = 0.74. DISCUSION

(20% en s peso de la muestra de suelo) TRAMI ENTO B BIOL IG=0 .18 4

inada germ s inada s IG=0 0 5

IG=0 .18 1

1. Los

resultados

de

los

ndices

de

germinacin son bajos, esto se debe a que: Las muestras de suelo fueron extradas de parcelas cercanas a los laboratorios

semil semil las las

semil semil las las

de Suelos de la UNALM. Segn anlisis fsicos durante el mes de Junio del 2011 la textura encontrada fue franco arcillo arenosa6, es decir

germinacin. Representando tambin este suelo dificultades en ese aspecto, pues en el mes de Junio del 2011 se determin la conductividad elctrica de las parcelas de suelo cercanas a los laboratorios de suelos de la UNALM fue 26,9857 ds/m8. La FAO califica este valor como extremadamente

presenta los siguientes porcentajes de partculas de suelo: arena: 49, 78 % , limo: 25,62 % , arcilla: 24,60 %7 El alto porcentaje de arcilla de las muestras de suelo no es adecuado para una correcta degradacin del petrleo, pues a pesar de que propicia la absorcin tambin de altas nutrientes, retiene de

salino, lo cual no es beneficioso si se desea germinar semillas de lechuga, sin embargo las muestras de suelo recolectadas se encontraban cerca de reas de cultivo de algodn, donde el riego es continuo, produciendo as un adecuado lavado de sales que

concentraciones como el

contaminantes

petrleo,

haciendo ms difcil su degradacin y acceso por los microorganismos del suelo (Porta et al., 1994). Estas altas concentraciones de arcilla constituyen tambin dificultades en la germinacin de las semillas de Lactuca sativa, pues su germinacin es de mayor eficiencia en suelos de textura areno- limosa. Las semillas de Lactuca Sativa son sensibles a las altas concentraciones de sales, en especial en el periodo de

disminuyo dicho valor. Debido a lo mencionado anteriormente los valores de ndice de germinacin obtenidos en nuestros tratamientos son bajos, pero son lo suficientemente significativos para poder concluir y comparar la eficiencia de las tcnicas de biorremediacin. De esta manera, estas tcnicas podran aplicarse en suelos que poseen propiedades que dificultan su biorremediacin, como algunos suelos de selva, donde se han registrado los mayores casos de

Se tom en cuenta los datos del mes de Junio, debido a que la textura de un suelo es una propiedad fsica invariable a travs del tiempo.
7

derrames de petrleo. Otro factor importante que influye en el experimento es la viabilidad y

Departamento acadmico de suelos. Manual de prcticas de edafologa.

Ibi dem p.57

madurez

de

las

semillas

ml de petrleo tratada con biol, pensamos que es debido a que provee de vitaminas, aminocidos y adecuadas proporciones de nutrientes al suelo que estimulan el desarrollo y actividad de las bacterias; y a diferencia del compost provee a las semillas de Lactuca Sativa las mejores condiciones crecimiento para y su germinacin, de sus

(Salisbury,2001) de Lactuca Sativa para germinar, no todas las semillas alcanzan un completo estado de

desarrollo morfolgico y fisiolgico al momento de germinar, aun necesitan experimentar transformaciones una serie de para

fisiolgicas

poder hacerlo (Salisbury, 2001).

desarrollo

actividades fisiolgicas. 2. El ndice de germinacin arrojo el valor de cero en todas las muestras de suelos que fueron contaminadas con 5ml de petrleo, esto se debe al corto tiempo de aclimatacin del metabolismo de las bacterias a los hidrocarburos del petrleo 5. Los resultados obtenidos en los

tratamientos con compost fueron menores que los del obtenidos por el biol, debido a que la cantidad agregada fue

relativamente alta (20% en peso). Esto ocasion un incremento inmediato de los

3. Las muestras control contaminadas con las cantidades de 1 ml, 3ml y 5ml de petrleo, obtuvieron un ndice de

sitios de adsorcin, una disminucin de los espacios de aireacin (fase gaseosa del suelo), as como tambin su transporte y biodisponibilidad. afectada por La dos adsorcin factores: es la

germinacin cero. Ello se debi a que estas no tuvieron tratamientos de

bioestimulacin o bioaumentacin que contribuyeran a mejorar las condiciones del medio para acelerar la

hidrofobicidad del contaminante (es la dificultad para disolverse en agua) y la fraccin de la materia orgnica en el suelo (contenido de carbono orgnico). Muchos de los compuestos hidrofbicos pueden ser altamente adsorbidos, de acuerdo a varios estudios de campo (Mackay et al., 1985).

biorremediacin, indicando as que los microorganismos del suelo, en

condiciones naturales, tardan un largo tiempo en degradar contaminantes como hidrocarburos.

4. De los tres tratamientos aplicados, el mayor ndice de germinacin registrado se dio en la muestra contaminada con 1

6. Los resultados de germinacin con el tratamiento con la tcnica de

bioaumentacin son bajos. Ello se debe a

que la biorrecuperacin de las muestras de suelo contaminado se realiz durante un lapso de 27 das, tiempo durante el cual la degradacin del hidrocarburo (petrleo) es baja (EPA, 1983). Esto se da porque es extremadamente dificultosa la adaptabilidad de microorganismos

viabilidad y madurez de las semillas de Lactuca sativa sembradas en la muestra control hayan sido bajas. CONCLUSIONES El mtodo ms eficiente en

biorremediacin de muestras de suelos de la UNALM contaminados con petrleo a diferentes concentraciones durante un periodo de 27 das es la bioestimulacin.

exgenos inoculados en un medio tan hostil como es un suelo contaminado. Adems, estos deben competir contra los microorganismos autctonos por los -

escasos recursos del suelo, estando los ltimos ms adaptados a las condiciones ambientales del suelo. En el experimento, el biol presenta un mayor potencial como bioestimulador.

7. El valor del ndice de germinacin de las muestras contaminadas con 1ml de petrleo y tratadas con biol, fue el doble del registrado en la muestra control 0ml. Esto se podra haber generado como consecuencia de las difciles

La degradacin del petrleo ha de ser mayor, si se alarga el tiempo de biorrecuperacin.

Los suelos con altos contenidos de arcilla, favorecen la retencin de contaminantes superficial. por su alta carga

caractersticas que presenta las muestras de suelo, las cuales en la muestra control 0ml no se pudieron mejorar, como en el caso de la muestra tratada con biol. Esta, durante el experimento, mejor las -

La germinacin de semillas de Lactuca Sativa es inhibida por altos valores de salinidad en el suelo.

propiedades fsicas y qumicas de la muestra de suelo gracias su aporte de nutrientes, propiciando as las condiciones necesarias para que las semillas puedan germinar con mayor eficiencia en este. Tambin cabe la posibilidad de que la -

La bioaumentacin requiere de un mayor anlisis y estudio a detalle para su aplicacin

AGRADECIMIENTOS Al bilogo Juan Juscamaita Morales, profesor del rea

nativas que degradan hidrocarburos: Biorremediacin en suelos

contaminados con borras mediante la tcnica de compostaje. Tesis para optar el grado de MAGISTER SCIENTIAE. Lima, Peru. UNALM Gruiz, K y Kriston, E. (1995). In

microbiologa de la UNALM por sus grandes consejos y motivacin para el desarrollo de nuestra investigacin. BIBLIOGRAFIA -Bartolo Santiago, Jaime Isidro (2008). Bioensayos de toxicidad en Zea mays y Helianthus annuss en suelos

situ bioremediation of hydrocarbon in soil. Journal of Soil Contamination. 4(2): 163-173. - Jackson, M.L. 1976. Anlisis qumico de suelos. 3ra ed. Traducido del ingls. Ediciones Espaa. Life biosol. BIOSOL. Proyecto Omega S.A., Barcelona,

contaminados con aceite lubricante residual sometidos a un proceso de biorremediacin por composteo. Tesis para optar el ttulo de Bilogo. Lima, Peru. UNALM - Departamento acadmico de suelos de la facultad de agronoma UNALM. (2000) Manual de prcticas de

Life de demostracin de la tecnologa de biorremediacin con compostaje para la recuperacin y gestin urbanstica sostenible de zonas contaminadas en desuso. Disponible en:

Edafologa. Lima - Per - Eweis, JB. Ergas, S.J., Chang, DPV y Schreeder, E.D (1998). Principio de biorrecuperacin. Madrid. Frank B. Salisbury, Cleon W. Mc Graw Hill.

http://www.lifebiosoil.com/ca_tecnologi a.asp. Revisado el: 25/11/11 - Porta , Jaime. Edafologa para la agricultura y el medio ambiente. 1994. Editorial Mundi-Prensa. Captulo 3, 8, 12 y 27. Shmaefsky, B.R. (1999).

Ross. FISIOLOGA VEGETAL. 2001. Grupo Editorial Iberoamrica, 1994 759 pag. - Guillen Zubiate, Pierina Elizabeth (2010). Identificacin de bacterias

Bioremediation: Panacea or fad? Access Excellence. Museum The National Health