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MICROBIOLOGA DE ALIMENTO

Prctica 4. Mtodo para la determinacin de Staphylococcus aureus en alimentos. Objetivos. Cuantificar adecuadamente Staphylococcus aureus en un taco de suadero mediante la tcnica descrita en la Norma Oficial Mexicana. Identificar a Staphylococcus aureus toxignico mediante pruebas bioqumicas. Descripcin El taco se compr por metro Camarones, en un puesto ambulante un poco oxidado en general, el puesto tena botes de basura en los costados, estaba cerca de un charco de agua. El seor que despacho el taco traa un mandil blanco con manchas de grasa y pedazos de carne, uas cortas con pedazos de carne, un segundo seor le pasaba las tortillas tambin tenia un mandil blanco con manchas de grasa, uas cortas y un tercer seor cobraba.

Muestra: taco de suadero

Resultados. Medio Foto Dilucin 10-2 Descripcin Se encontr una colonia negra, circular, brillante, convexa, lisa con un halo claro alrededor de la colonia, el halo ndica hidrlisis de lecitina. Muestra: taco de suadero sin verdura Objetivo: 1000x Observaciones: cocos Gram positivos en agrupacin de racimos y cadenas.

Agar Baird Parker

Tincin Gram

Tubos con crecimiento

Caldo BHI Tubos positivos Prueba de la coagulasa Foto del equipo 9

Se inocularon los 5 tubos de caldo BHI en todos los tubos hubo crecimiento. En los 5 tubos se formo el cogulo, pero en los tubos 1 y 2 al invertirlos el cogulo se mantuvo en el fondo del mismo. La prueba dio negativa ya que al agregarle el HCl a la colonia no se observo un halo transparente a su alrededor. Fermentacin lenta

Prueba de la enzima termonucleasa

Fermentacin de manitol

La prueba dio positiva pero el microorganismo es lento al fermentar el manitol. Formacin de burbujas La prueba dio positiva al formarse burbujas por la descomposicin de H2O2

Prueba de catalasa

Agar Baird Parker Staphylococcus aureus Tubo 1

Dilucin 10-2

Dilucin 10-3

Dilucin 104

1 Coagulasa ++

0 Termonucleasa -

0 Manitol +

Resultado UFC/g 5 Valor estimado

2 3 4 5 Anlisis de resultados.

++ -

+ + + +

Al revisar las colonias en el agar Baird Parker slo hubo una colonia caracterstica de Staphylococcus aureus ya que est fue de color negro, pequea, lisa, redonda, brillosa y con un halo translucido alrededor de la misma indicando la hidrlisis de lecitina, todas estas caractersticas son especficas de Staphylococcus aureus de acuerdo a lo consultado en los libros y en el manual, a esta colonia se le realizo una tincin Gram para verificar que fueran Staphylococcus aureus para eso se deba observar cocos Gram positivos en agrupacin de racimos y cadenas, y fue lo observado en la tincin por lo cual seguimos utilizando la colonia obtenida. Al realizar las pruebas bioqumicas nuestra cepa dio coagulasa y manitol positivo, en coagulasa todos los tubos presentaron cogulo aunque slo tomamos el tuvo uno y dos como positivos ya que presentaba un coagulo grande, y al invertir el tubo el coagulo permaneci en el fondo del tubo, tal y como se describi en el manual para tomar esta prueba como positiva. Mientras tanto hay que resaltar que la fermentacin del manitol de la colonia aislada es lenta ya que slo se aprecio una disminucin en la intensidad del indicador rojo fenol a las 48h y se necesitara ms de tiempo para que se logre la fermentacin total del carbohidrato. En la prueba de termonucleasa, el resultado fue negativo ya que no se observ el halo transparente seguido del precipitado blanco como debera ser para tomarse como positivo, aunque nos quedamos con dudas, ya que al inocular en el gar DNA picamos el agar con el asa bacteriolgica recta obteniendo orificios muy pequeos y juntos uno de otro, de tal forma que cuando se agrego una gota de HCl 0.1N en uno de los orificios tambin cubri a los orificios cercanos a el, esto no permiti que se formara el halo y el precipitado alrededor de un solo orificio como se deseaba, ya que los orificios tenan que ser grandes y separados para poder apreciar la formacin del precipitado blanco alrededor de ellos. Conclusin. De acuerdo a la NOM-SSA1-1994 el taco de suadero sin verdura que se compr en metro Camarones no es una fuente potencial del Staphylococcus aureus enterotoxignico, al dar negativo en la prueba de termonucleasa.

Por ltimo no olvidemos que en la primera dilucin realizada e inoculada en agar Bair Parker fue en donde se encontr la nica colonia representativa, esto nos dice que la carga de Staphylococcus aureus en el alimento probablemente fue por contaminacin postproceso por una superficie sanitizada inadecuadamente, ya que si la contaminacin hubiera sido en el momento de la preparacin del taco Staphylococcus uareus al no tener flora competitiva hubiera crecido exponencialmente y producido la toxina. Por ltimo hay que tomar en cuenta que la concentracin 10 5 UFC/g de alimento se considera potencialmente riesgosa y puede causar la intoxicacin, y nuestra concentracin fue de 5 valor estimado, la cual es muy pequea, por lo que al consumir el taco de suadero no hay riesgo de intoxicacin. Bibliografa: http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/115ssa14.html M Del Rosario Pascual Anderson. Vicente Caldern y Pascual. Microbiologa Alimentara. Metodologa analtica para alimentos y bebi das. 2 edicin. Editorial Diaz de Santos. 2000 Koneman. Diagnstico Microbiolgico. 6 edicin. Editorial Mdica Panamericana. 2008