UNIVERSIDADE DE SO PAULO IB DEPARTAMENTO DE ECOLOGIA LABORATRIO DE ECOLOGIA DE MACRFITAS AQUTICAS

DETERMINAO DO TEOR DE FOSFATO INORGNICO DISSOLVIDO

MTODO:
Strickland, J.D.H & Parsons, T.R. A manual of sea water analysis, with special reference to the more common micronutrients and to particulate organic material . Fisheries Research Board of Canada, Bull n. 125, second edition. Ottawa, 1965, 203.

PRINCPIO DO MTODO
Existem descritos na literatura vrios mtodos utilizados na determinao do teor de fsforo na forma de fosfato inorgnico dissolvido, o mtodo recomendado neste trabalho o descrito em Strickland & Parsons (1965). A determinao da concentrao de uma substncia por espectrofotometria baseada na transformao qumica dessa substncia num complexo colorido (Carmouze, 1994). O espectrofotmetro mede a transmitncia de um feixe de luz num determinado comprimento de onda aps atravessar a soluo numa cubeta de quartzo ou vidro. Com a relao da transmitncia e concentrao da soluo, por intermdio de uma srie de diluies obtidas a partir de soluo padro, pode-se determinar de maneira satisfatria uma curva relacionando a concentrao com a absorbncia. Para determinar a concentrao de fsforo na amostra, so relacionadas concentraes conhecidas, confeccionadas com a soluo padro , e suas respectivas absorbncias determinadas em espectrofotmetro, por meio de uma equao linear simples (y = a+ bx). Por intermdio de pipetas analticas de alta preciso, diluir em gua destilada e deionizada diferentes alquotas da soluo padro estoque. Essas solues diludas devem ser preparadas no momento da determinao da curva padro.

PREPARAO DOS REAGENTES

a) soluo padro estoque de fosfato monobsico de potssio (KH2PO4 - 40 g de P-PO -3/ml) 4 Dissolver 0,1757 g de fosfato monobsico de potssio (seco a 110 0C e esfriado em dessecador) a 1l de gua destilada, armazenar em frasco de vidro mbar na geladeira. b) cido clordrico 1 N Diluir 85 ml de HCl P.A. (12 N, 37,2%, densidade de 1,18 g/cm 3) a 1 l de gua destilada. c) molibdato de amnio ((NH4)6Mo7O24.4H20) Dissolver 15 g de molibdato de amnio em 500 ml de gua destilada, estocar em frasco de plstico e no escuro. Essa soluo poder ser utilizada enquanto permanecer clara. d) cido sulfrico (H2SO4) Dissolver 140 ml de cido sulfrico P.A. (36 N, 96~97%, densidade de 1,18 3 g/cm ) em 900 ml de gua destilada. Guardar em frasco mbar fora da geladeira.

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e) cido ascrbico (C6H8O6) Diariamente, dissolver 1,35 g de cido ascrbico P.A. em 25 ml de gua destilada. f) tartarato de antimnio e potssio (K(SbO)C6HO6) Dissolver 0,34 g de tartarato de antimnio e potssio P.A. em 250 ml de gua destilada e estocar em frasco de vidro. Essa soluo poder ser utilizada enquanto permanecer clara. Confeco do reagente misto
Adicionar, nos volumes sugeridos, os reagentes listados na tabela abaixo.
Reagente Quantidade 1 Quantidade 2 Quantidade 3 Quantidade 4

Molibdato H2SO4 c. Ascrbico(*) Tartarato Volume final (ml)

Quantidade de tubos

25 ml 62,5 ml 25 ml 12,5 ml 125

75

20 ml 50 ml 20 ml 10 ml 100
55

10 ml 25 ml 10 ml 5 ml 50
25

5 ml 12,5 ml 5 ml 2,5 ml 25
12

(*) Preparao do cido ascrbico (C6H8O6): diariamente dissolver 1,35 g de cido ascrbico em 25 ml de gua destilada.

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FOSFATO INORGNICO DISSOLVIDO

CONFECO DA CURVA DE CALIBRAO

soluo estoque (ml) (40 gP-PO4+3/l)

Volume para diluio (litros)

Concentrao esperada (gP/l)

Absorbncia

Absorbncia

Absorbncia mdia

0,2 0,2 0,4 0,4 0,8 0,6 1,0 2,0

1,0 0,5 0,5 0,25 0,25 0,100 0,100 0,100

8 16 32 64 128 240 400 800

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DETERMINAO DO TEOR DE FOSFATO INORGNICO DISSOLVIDO

PROCEDIMENTO COM AS AMOSTRAS
PARA CUBETA DE 10 mm DE PASSO PTICO

A) Colocar 10 ml da amostra de gua filtrada em tubos de ensaio; B) Adicionar 1,0 ml do reagente misto, agitar; C) Aps 20 minutos ler a absorbncia contra o menor branco a 882 nm.

Confeco do reagente misto

Adicionar, nos volumes sugeridos, os reagentes listados na tabela abaixo.
Reagente Quantidade 1 Quantidade 2 Quantidade 3 Quantidade 4

Molibdato H2SO4 c. Ascrbico(*) Tartarato Volume final (ml)

Quantidade de tubos

25 ml 62,5 ml 25 ml 12,5 ml 125

75

20 ml 50 ml 20 ml 10 ml 100
55

10 ml 25 ml 10 ml 5 ml 50
25

5 ml 12,5 ml 5 ml 2,5 ml 25
12

(*) Preparao do cido ascrbico (C6H8O6): diariamente dissolver 1,35 g de cido ascrbico em 25 ml de gua destilada.