Relationship of secondary metabolism to growth in oregano (Origanum vulgare L.

) shoot cultures under nutritional resumen Micropropagacin de Origanum vulgare L. por disparar capullos, como un posible modelo de sistema para el estudio de carbono esqueleto de la desviacin del crecimiento al metabolismo secundario de adaptacin como respuesta a la deficiencia de nutrientes, se ha han realizado. Adems, los antioxidantes compuestos fenlicos, en virtud de brotes producidos por la nutricin estrs o en respuesta a la prolina exgena aadido, se han estudiado. cido cafeico, cido rosmarinic, y lithospermic cido B ha sido aislado en organo disparar por las culturas de fase inversa de alto rendimiento cromatografa lquida, y sus estructuras han sido aclaradas por la espectrometra de masas en tndem. Ambos estrs nutricional, que a su vez provoca un incremento moderado de la libre constitutiva prolina y exgenos prolina afectar el crecimiento y el contenido de antioxidantes fenlicos organo brotes, en comparacin con el control. El papel de la prolina, y el correspondiente ciclo redox, como una forma de sealizacin metablica basada en una transferencia de potencial redox de clulas que interactan entre las vas, que a su vez obtener a travs de estimular el metabolismo de compuestos fenlicos flujo de carbono a travs de la va oxidativa pentosa fosfato, se discute. Adems, el uso potencial de organo y tejidos callo culturas, como una nueva estrategia para que la produccin de tiles secundaria metabolitos en una escala comercial tambin es discutido. . 1. Introduccin Cada vez hay ms pruebas que implican la existencia de una sistema general de respuesta de estrs en las plantas y esto sugiere algunas comn las respuestas de adaptacin de las plantas a los agentes medioambientales condiciones de tal. En este sentido, las plantas son ubicuas fenlicos metabolitos secundarios en las plantas que funcionan para regular la respuesta de estrs. La acumulacin de compuestos fenlicos en los tejidos de las plantas es una caracterstica distintiva de la planta de estrs: compuestos fenlicos puede ser aumentado o sintetizados de novo en las plantas como respuesta a diversos biticos y abiticos, incluidos los dficit de nutrientes - cia. Tanto la va oxidativa pentosa fosfato (OPPP) y Ciclo de Calvin pueden proporcionar esqueletos de carbono en forma de erythrose-4 - fosfato, que junto con fosfoenolpiruvato, formado a partir de glicolisis, sirve como un precursor de fenilpropanoides metabolismo shikimic cido a travs de la va. Bajo condiciones de estrs, disminucin de tasas de fotosntesis puede exigir mayores tasas de OPPP a proporcionar esqueletos de carbono para el metabolismo de compuestos fenlicos (V. Lattanzio). varios estudios han sugerido que OPPP es la fuente de reduccin de la cin equivalentes para la biosntesis de compuestos fenlicos, y que su actividad se incrementa en condiciones de aumento de flujo en fenilpropanoides el itinerario. La comprensin de la reglamentacin y mecanismos bioqumicos que controlan los tipos y cantidades de sintetizado compuestos fenlicos en condiciones diferentes, con sigue siendo una alta prioridad para la investigacin con vistas a la cosecha plantas que pueden ser diseados para overproduce antioxidante fenmeno nolics ( Robbins et al., 1985; Lattanzio et al., 1994; Dixon y Paiva, 1995; M ahrendorf et al., 1995; Hace et al., 1999; Winkel-Shirley, 2002). En muchas plantas, gratis prolina tambin se acumula en respuesta a una amplia gama de biticos y abiticos, incluidos los nutrientes deficiencia. La acumulacin de prolina puede ser debido a la sntesis de novo - sis, la disminucin de la degradacin, o ambos. La mayora de los intentos de dar cuenta de el fenmeno se han centrado en la capacidad de la prolina a medi - comi ajuste osmtico, recoger los radicales libres, y actuar como un fuente de poder reductor y una fuente de carbono y / o nitro - gen. Prolina acumulado ha sido propuesta para proteger a las enzimas, membranas, y el medio ambiente polyribosomes durante perturba - ciones ( Kiyosue e t al., 1996; Hace et al., 1998; Kavi Kishor et al. 2005). 0098-8472 / $ - vase el asunto frente 55 Adems, se ha sugerido que, dado que el principal capital tura de fotones de energa es sensible al estrs, en virtud de las plantas perjudiciales las condiciones son a menudo expuestos a intensidades de luz en exceso de aquellas que pueden ser utilizados para la asimilacin de carbono. En estas condiciones ciones de la limitada regeneracin de NADP + resultados en redox celular desequilibrio. Por lo tanto, se ha propuesto que el estrs inducido por un aumento de la transferencia de la reduccin de equivalentes en sntesis-prolina sis (citoslico) y degradacin (mitocondrial) ciclo podra permitir sensibles a la regulacin de potencial redox celular en el citosol. Alto los niveles de prolina citoslico sntesis, catalizada por dos enzimas, 1 -pyrroline-5-carboxilato-sintetasa (P5CS) y 1 -pyrroline - 5-carboxilato-reductasa (P5CR), ambos utilizando NADPH como cofactor, durante el estrs tambin pueden mantener NAD (P) + / NAD (P) H coeficientes en los valores com - patible con el metabolismo en condiciones normales. Adems, el aumento de NADP + / NADPH relacin, mediada por la biosntesis de prolina, es probable que mejorar la actividad de la OPPP: esto sera pre - cursores para apoyar la demanda de aumento de metabolito secundario produccin, tales como compuestos fenlicos, durante el estrs (Merrill electrnico no al., 1989; Hare y Cress, 1997; Hace et al., 1998). Un

estrecho vnculo entre la sntesis y la prolina OPPP actividad tiene varios varios precedentes en los sistemas de los animales y las plantas (Smith et al., 1980; Yeh e t al., 1984; Phang, 1985; Yeh y Phang, 1988; Kohl et al., 1990; Shetty, 1997; Shetty, 2004). Los dos responsables dehydrogenases para la transformacin de la glucosa-6-fosfato en ribosa-5-fosfato se principalmente regulada por el NADP + / NADPH relacin, tanto con las enzimas siendo fuertemente inhibida por NADPH. Deshidrogenasa reacciones que consumen y producen NADPH NADP + interferir de manera positiva OPPP con actividad: la alternancia de la oxidacin de NADPH por prolina sntesis y la reduccin de NADP + por los dos pasos de la oxidacin OPPP unira estas dos vas ( Hace una segunda Berro, 1997; Kavi Kishor e t al., 2005). La justificacin de esta investigacin se basa en los estudios de Shetty y compaeros de trabajo que demuestre que los metabolitos fenlicos en las plantas producidos de manera eficiente a travs de un modo alternativo de metabolismo, vinculacin con la sntesis de prolina oxidativo pentosa fosfato va y que las tcnicas de cultivo de tejidos vegetales pueden utilizarse para aplicar la control de produccin de antioxidantes fenlicos til en la demanda (Shetty, 1997; Yang y Shetty, 1998; Zheng et al., 2001; y Shetty McCue, 2 003; Shetty, 2004). Produccin de metabolitos secundarios por las plantas, de hecho, no siempre es satisfactoria. A menudo se limita a una especie o de gnero y puede ser activado slo durante un determinado crecimiento o etapa de desarrollo, o en determinadas estacionales, el estrs o condiciones de disponibilidad de nutrientes. Por estas razones en los ltimos aos un gran esfuerzo se ha puesto en cultivos de clulas vegetales como un posible mtodo de produccin de metabolitos secundarios de las comunicaciones inters (Grotewold et al., 1998; Verpoorte et al., 1999, 2002, Zhang y un l., 2004). En el presente trabajo, organo (Origanum vulgare L.) brotes han cultivados en medio Murashige y Skoog, con o sin prolina exgeno aadido, con el fin de estudiar los efectos de la nutricin ent deficiencia y / o metablica exgena prolina en los flujos de esqueletos de carbono entre el metabolismo primario y secundario, en relacin con el metabolismo de compuestos fenlicos. Los resultados presentados en este estudio podran ser objeto de mejorar la produccin de compuestos de inters o para el diseo de alimentos funcionales. Ms en general, esta investigacin se ha llevado a cabo con el fin de entender las relaciones entre la enseanza primaria y secundaria metabolismo y sus respuestas a las condiciones ambientales. La investigacin hace hincapi en la comprensin fundamental cin de las rutas metablicas y sus reglamentos, y sobre la interacciones entre empresas y / o complementarias vas con el objetivo final de un desarrollo racional de la prctica tecnologas que utilizan las vas de biosntesis de la planta-tis temas para la produccin de metabolitos secundarios tiles en demanda. 2. Materiales y mtodos 2.1. Organo disparar cultura Organo disparar culturas fueron obtenidos de acuerdo con Yang y Shetty (1998). Origanum vulgare L. ssp. hirtum genotipo de un 2-aos de cultivo de organo se utiliz para establecer la micropropagacin. Organo yemas axilares, 4-5 mm de longitud, explantes fueron inducidas para producir mltiples brotes adventicios disparar a travs de la formacin en medio basal (BM), con un contenido de acuerdo con los macronutrientes Medio Murashige y Skoog (MS) ( Murashige una segunda Skoog, 1962), los micronutrientes de Nitsch y Nitsch medio ( Nitsch y Nitsch, 1969), 25 mg / l Fe-EDTA, 0,4 mg / l, tiamina HCl, 1 mg / l 6 -- benzilaminopurina (BAP), 30 g / l de sacarosa, 7 g / l de agar. El pH de la medio se ajust a 5.6-5.8. Esterilizacin de medios de cultivo se realiz en autoclave a 121 C durante 20 minutos; la cultura de la explantes lugar se llev a cabo en virtud de un flujo laminar horizontal campana para garantizar la necesaria condiciones estriles. Durante la expe - iment, organo explantes se mantuvieron en una cmara de cultivo en 24 1 C con un fotoperodo de 16 h luz bajo una intensidad luminosa de 30 Em -2 s -1 Despus de 45 das de rodaje de multiplicacin, uninodal micro cortes (5-6 mm) se subcultivados dos veces a intervalos de aproximadamente 3 semana utilizando el mismo medio condiciones. Para probar los efectos de la deficiencia de nutrientes exgenos y pro lnea en el contenido de antioxidantes fenlicos, organo brotes (tres nodales microtallos) fueron transferidos y se cultivan durante 15 das en BAP (hormona) libre MS medio, ms de 0,5 mm o sin prolina, y BAP (hormonas), sin fuerza de medio a medio MS, ms o sin 0,5 mM prolina. MS medio sin prolina se utiliz como control. El da 15, el contenido de prolina libre, el contenido total de fenlicos, rosmarinic acidez, y el peso fresco de los brotes se midieron organo. Organo hojas provenientes de plntulas in vitro se utilizaron como explantes primaria en el establecimiento de calles en las culturas medio basal (BM) que consta de macronutrientes (Murashige y Skoog, 1962) y micronutrientes (Nitsch y Nitsch, 1969), Fe - EDTA (30 mg / l), tiamina HCl (0,4 mg / l); myo-inositol (100 mg / l); sacarosa (30 g / l) y agar (7 g / l). Para la induccin de callo BM se enriquecido con 2,2 mg / l de cido 2,4-diclorofenoxiactico (2,4 D). Las placas fueron incubadas en la oscuridad a 24 1 C. Despus de 4 meses, callos derivados de hojas individuales fueron separados de la explante de tejido y se transferirn a medio, con 2,2 aadido mg / l de 2,4 D y 21,5 g / l para el callo de la cultura. Subcultivo se auto cabo en intervalos de 2 meses con la transferencia de slo el rigor porciones cada vez mayor de nuevas calles en medio.

2.2. Contenido de prolina Contenido de prolina libre se determinar de acuerdo con los mtodos de Bates e t al. (1973). 100 mg de material vegetal fue homogeneizado en 2 ml de 3% acuosa de cido sulfosaliclicos. El homogenado se se centrifuga a 13.000 g durante 10 min y 1 ml de sobrenadante fue colocado en un tubo de ensayo de reaccin. La muestra se ha reaccionado con 1 ml de cido ninhydrin (1,25 g de ninhydrin en 30 ml de cido actico glacial y 20 ml de 6 M de cido fosfrico) y 1 ml de cido actico glacial durante 1 h a 100 C, la reaccin y termin en un bao de hielo. La reaccin mezcla se extrae con 2 ml de mezcla de tolueno y enrgicamente con un vrtice por 15-20 s en una campana extractora. El tubo de ensayo se le permiti reposar al menos 10 minutos a temperatura ambiente para que la sepa - racin de tolueno y la fase acuosa, la fase de tolueno aspiracin de la fase acuosa. La absorbancia del cromforo que contienen tolueno se midi a 520 nm, utilizando como el tolueno en blanco. Curvas estndar se prepararon con cada ensayo utilizando nor - prolina en la norma del 3% sulfosaliclicos solucin de cido. Prolina contenido expresado en micromoles por gramo de FW de materias primas vegetales. Lattanzio V. et al. / Ambiental y Experimental Botnica 65 (2009) 54-62 2.3. Aislamiento y caracterizacin de derivados del cido cafeico en extractos de organo Cualitativos y cuantitativos para la determinacin de compuestos fenlicos com - libras, organo brotes (1 g) fueron homogeneizadas durante 3 min con 30 ml de MeOH caliente-EtOH (1:1) y, a continuacin, reflujo durante 30 minutos (2 ). Despus de la centrifugacin y la puesta en comn de los extractos, la combinacin de soluciones se concentran en vaco y con el particionado ter de petrleo (40-70 pb C). La fraccin acuosa se analiz contenido total de fenlicos, actividad antioxidante, y la determinacin por HPLC - nacin de oligmeros de cido cafeico (rosmarinic cido clorhdrico, cido lithospermic, y cido lithospermic B). Se realizaron anlisis de HPLC con una serie de Hewlett Packard 1100 cromatgrafo de lquidos equipado con una bomba de gradiente binario G1312A, G1315A espectrofotomtrico un fotodiodo detector de matriz, G1316A termostato y la columna de 45 C. El Hewlett Packard Chem. Estacin (Rev. A. 06,03) se utiliz el software y los datos de los espectros transformacin. Un anlisis Phenomenex (Torrance, CA, EE.UU.) Luna C18 (5) la columna (4,6 mm 250 mm) se utiliz a lo largo de este trabajo. El sistema constaba de disolvente (A) MeOH y (B) en cido actico-agua (5 / 95, v / v). El perfil de elucin segn lo reportado por Lattanzio y Van Sumere (1987). La tasa de flujo fue de 1 ml / min. Muestras de 25 l se aplicado a la columna por medio de una vlvula de 25 l bucle. HPLC-MS/MS anlisis se realizaron sobre una QTrap MS / MS-sistema ma, de Applied Biosystems (Foster City, CA, EE.UU.), equipado con ESI una interfaz de serie 1100 y un micro-sistema de LC una bomba y un binario microautosampler de Agilent Technologies tecnologas (Waldbronn, Alemania). ESI se ha utilizado en la interfaz de iones positivos modo, con los siguientes valores: temperatura (TEM) 350 C, pro - cin de gas (CUR), de nitrgeno, 30 psi; nebulizador de gas (GS1), el aire, 10 psi; calentador de gas (GS2), el aire, 30 psi; ionspray voltaje 4500 V. exploracin completa cromatogramas fueron adquiridas en el rango 100-800 uma masa, MS / MS cromatogramas fueron adquiridos en colisin la energa de 20 V. LC condiciones que para los anlisis de HPLC-DAD. 2.4. Contenido total de fenlicos Contenido fenlico total de organo disparar extractos se determi minadas mediante un modificado de FolinCiocalteau espectrofotomtrico mtodo (Marigo, 1973). 20 litros de extracto de organo disparar fue colocado reaccin en un tubo de ensayo a los que 1,58 ml de agua y 100 l de Reactivo Folin-Ciocalteau (Sigma) se han aadido. El tubo de ensayo se dejar reposar entre 30 s y 8 minutos, y luego a 300 l 20% Na 2 CO 3 Se aadi. Despus de 20 min a 40 C, se midi la absorbancia a 750 nm. Contenido fenlico total, expresada en mg rosmarinic equivalentes de cido / g de peso fresco. 2.5. Actividad antioxidante Quelatos de hierro, como la mioglobina, pueden formar ferryl especies en Fenton sistemas. Adems, la incubacin de una protena con hema exceso de H 2 O 2 puede causar hema desglose de liberar los iones de hierro. Ambos ferryl formacin y la liberacin de iones de hierro en hidroxilo rad ical formacin. La actividad antioxidante de extractos de organo disparar en contra de estos radicales se midi como se describe por Miller e t al. (1993). Espectrofotomtrico Este ensayo se basa en la reduccin de la el azul-verde ABTS + (2,2-azinobis-(3ethylbenzothiazoline-6 - sulfnico)) radicales de hidrgeno-cin por la donacin de antioxidantes, que se mide por la supresin de su larga onda de absorcin espectro. ABTS + cin radical es generado por incubando los siguien siguientes reactivos en un volumen final de 1,5 ml de 6 minutos: KH 2 PO 4 KOH - tampn de pH 7,4 (50 mM), NaCl (145 mM), muestra de la prueba, se reuni - mioglobina (1,67 M), ABTS (100 M) y, por ltimo, H 2 O 2 (50 M) (concentracin final). De perxido de hidrgeno se agrega para iniciar la reaccin cin. La absorbancia se mide a

734 nm. Control de reaccin fue Fig. 1. Respuesta de organo brotacin a los tratamientos. preparado por la adicin de disolventes en lugar de la solucin antioxidante (muestra). Trolox, una soluble en agua-tocoferol analgica, se utiliz como control positivo. La actividad antioxidante se calcula como por - ciento de inhibicin de la velocidad de reaccin y de control, expresado como yo 50 como interpolados por la curvas de dosis-respuesta. IC 50 es la cantidad de antioxidantes fenlicos (microgramos) que causaron 50% de inhibicin de control de reaccin, en el volumen de reaccin, en las condiciones descrito. 3. Resultados El organo es una especie de la familia Lamiaceae utilizados tradicionalmente por la industria alimentaria debido a sus propiedades antioxidantes y aromticas - erties vinculados a su metabolitos fenlicos, como cido rosmarinic (O-caffeoyl-3 ,4-dihydroxyphenyl-cido lctico; AR). Estas propiedades vnculos han suscitado el inters en el desarrollo de estudios relativos a la estimulacin de antioxidantes fenlicos en disparar en las culturas de las especias para desarrollar procesos biotecnolgicos para la industria en favor de los produccin de tales productos de qumica fina ( Petersen y Simmonds, 2003). Los resultados de esta investigacin muestran que tanto la deficiencia nutricional (EM 1 / 2 ), Que a su vez provoca un incremento moderado de la constituyente prolina libre, prolina y exgenos afectan negativamente, en comparacin con de control (MS), peso fresco de brotes de organo crecido 15 das en agar medio de cultivo (Fig. 1). La adicin de prolina exgenos resultados en niveles muy altos de prolina libre intracelular. Al mismo tiempo el crecimiento de brotes en MS organo medio se inhibe el 60% en 5 mM prolina exgenos. Este efecto est probablemente relacionado con la edad y la manipulacin de los tejidos de las plantas, as como a la concentracin de exoge nously aadido prolina. Es probable que el estado fisiolgico de tejidos determina su respuesta a la prolina exgenos, tal vez por diferencial de eficiencia de absorcin de la prolina 1 (Handa et al., 1986; Rodrguez una segunda Heyser, 1988; Hu et al., 1992). En contraste con esta reduccin del crecimiento de brotes de organo, el contenido fenlico total (base de carbono, metabolitos secundarios) es mejorara considerablemente con exgenos prolina (+120%), as como por la alimentacin 1 De hecho, en una serie de experimentos (datos no mostrados) el crecimiento de organo brotes, en ausencia de estrs, se ha mejorado (un 40% con respecto a clulas sin tratar) de la exgena suministrada prolina 5 mm. Tabla 1 Organo disparar peso fresco (FW) y no el contenido de prolina, el contenido total de fenlicos, rosmarinic acidez, y la actividad antioxidante del extracto de organo disparar con diferentes tratamientos Muestra Disparar el peso (mg) Prolina (moles / g FW) Rosmarinic cido (mg / g de FW) Fenoles totales (mg RA / g FW) 58 Fig. 2. (Continuacin). ent deficiencia (+120%), y este aumento se ve estimulado por accin sinrgica de agotamiento de los nutrientes del medio de cultivo y exgena aadido prolina (+220%) ( Tabla 1). El aumento total de hizo hincapi en el contenido en compuestos fenlicos organo brotes corre paralela con la aument el contenido de prolina libre intracelular: la acumulacin de prolina libre es una tpica respuesta de estrs inducido en los tejidos de las plantas por distintos problemas ambientales (biticos y abiticos) se subraya. El mo generar aumento de prolina constitutiva organo destac en los tejidos podra justificarse por la utilizacin de los aminocidos en el aumento de el flujo neto a travs de la prolina ciclo (vase la Seccin 4, Fig. 3). El efecto de ambos, exgena aadido prolina y el estrs provocados prolina, sobre el metabolismo de compuestos fenlicos es, probablemente, ligadas a la reposicin de el NADP + la oferta a la va oxidativa pentosa fosfato que, a su vez, es una fuente de NADPH y esqueletos de carbono (erythrose - 4-fosfato que, junto con fosfoenolpiruvato formado por glicolisis, sirve como un precursor de la biosntesis de fenilalanina shikimic cido a travs de la va) para la biosntesis fenilpropanoides (Stewart e t al., 1977; Hagedorn et al., 1982; Fahrendorf et al., 1995; Maggio et al., 1997). Como consecuencia del aumento total del contenido de compuestos fenlicos, una mayor actividad antioxidante (medida como CI 50 ), De organo extractos se pueden disparar tambin observ ( Tabla 1). Desde un punto de vista cualitativo punto de vista, la fraccin fenlica de organo disparar extractos, como determi minadas por medio de HPLC-MS, se caracteriza por la presencia de cido cafeico, cido rosmarinic, B y cido lithospermic, un dmero de rosmarinic cido, adems de otros componentes menores (Fig. 2 a y c). Rosmarinic cido clorhdrico y cido lithospermic B MS / MS espectros, as como espectro de lithospermic cido identificados en callo (vase la Seccin 4), mostrar un fragmento de pico de m / z 181,0 diagnstico de la presencia de la CAF - FEIC cido fraccin. Las ms abundantes compuestos fenlicos presentes en extractos de organo disparar es rosmarinic cido cafeico un ster de cido 3,4 dihydroxyphenyllactic con cido, que se considera responsable de la mayora de la actividad antioxidante observada de la no terpenoid componente en las especias de la familia Lamiaceae ( Dorman e no al., 2003). Los datos presentados en el cuadro 1 s la forma en que existe una fuerte co relacin entre el nivel de cido inducido rosmarinic y antioxidante actividad de los extractos de brotes tratados organo. Ambos nutricional el estrs

y la prolina exgenos inducir un aumento significativo de la actividad antioxidante de extractos de organo disparar, y este aumento es esencialmente relacionado con el aumento del nivel de cido rosmarinic, cuya nivel se ve reforzada por el estrs nutricional (+158%) y exgenos pro - lnea (+234%) ms que el total de contenido fenlico (+120%). Esto significa rosmarinic que el cido es ms probable que sea responsable de la mayora de los observ actividad antioxidante de extractos de organo. Por lo tanto, tanto estrs nutricional y exgenos prolina puede representar dos posi - ble en el fomento de enfoques antioxidantes fenlicos, especialmente rosmarinic cido, organo en cultivos de tejidos. 4. Discusin Metabolismo primario es una importante fuente de precursores para la sntesis de los metabolitos secundarios fenlicos, que tienen un rango de funciones en el metabolismo, la sealizacin, y la defensa contra abiticos biticos y el estrs. Central metabolismo requiere altos niveles de los limitados los recursos vegetales y de intenso crecimiento durante la sntesis de compuestos fenlicos metabolitos pueden ser sustrato y / o de energa limitada. Por otro mano, ya sea bitico o abitico destaca desviar importantes cantidades de sustratos de primaria en el metabolismo secundario de defensa la formacin de producto y esto podra dar lugar a limitaciones en el crecimiento. Plantas, de hecho, disponen de recursos limitados para apoyar a su condicin fisiolgica procesos, por lo tanto, todos los requisitos no pueden cumplirse simultneamente y las compensaciones se produzcan entre el crecimiento y la defensa ( Coley e t al., Fig. 3. Esquema mostrando las relaciones entre el metabolismo primario y secundario y el papel de la prolina endgenos y exgenos en el fomento de fenilpropanoides itinerario. Las enzimas son las siguientes: 1: La glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (EC 1.1.1.49, G6PDH), 2: 6-deshidrogenasa fosfogluconato (CE 1.1.1.44, 6PGDH); 3: 1 1985; Herms y Mattson, 1992). Por lo tanto, una caracterstica principal de la el metabolismo de la planta es la flexibilidad para dar cabida a desarrollo cambios y responder al medio ambiente. En un breve plazo de tiempo, regulacin metablica se puede lograr a travs de mecanismos tales como la cintica de la enzima alterada en respuesta a la concentracin de metabolito ciones o secundaria a travs de modificaciones de la estructura de la protena, incluyendo fosforilacin y regulacin redox. En una escala de tiempo ms largo, de genes transcripcin tambin ha demostrado tener un papel en la regulacin metabolismo ( Logemann et al., 2000; Henkes et al., 2001; Nakane et al., 2003, y Lloyd y Zakhleniuk, 2004; Leser y Treutter, 2005; Fritz e t al., 2006). 4.1. Metablica de los costes de adaptacin a respuestas adversas las condiciones ambientales Varias hiptesis se han propuesto para explicar los efectos de los factores ambientales en el trade-off entre crecimiento y relacionados con la resistencia de compuestos secundarios. Tanto el carbono / nutrientes equilibrio (Bryant e t al., 1983) la diferenciacin y el crecimiento equili - cin (Herms una segunda Mattson, 1992) sugieren que las hiptesis es un equilibrio entre el crecimiento y la diferenciacin (la produc - de base de carbono, metabolitos secundarios, tales como compuestos fenlicos). Plantas de responder a la variacin en la disponibilidad de recursos mediante la modificacin asignacin de los esqueletos de carbono entre la enseanza primaria y secundaria metabolismo en condiciones de alta disponibilidad de recursos es el crecimiento dominante, pero, cuando la deficiencia de nutrientes y sombreado (o cualquier otro limitacin de recursos) limitar el crecimiento de ms de la fotosntesis, plantas se prev que el exceso de uso de esqueletos de carbono para producir defensiva fenlicos (Lerdau una segunda Coley, 2002). La protena com - modelo de competencia (Margna, 19 77; Margna et al., 1989; Jones y Hartley, 1999) sugiere que la sntesis de protenas y sntesis de fenilpropanoides tesis de competir por el uso de la fenilalanina y la fiscalizacin de precursores que, por consiguiente, cualquier factor ambiental que afecta el crecimiento de las plantas y la sntesis de protenas tambin pueden afectar a la disponibilidad de phenylala - nueve para la biosntesis de compuestos fenlicos. Por ltimo, Cerrar y McArthur (2002) h ave sugiri que cualquier factor que aumenta la presin oxidativa que puede causar un aumento de los compuestos fenlicos y que el nivel de primaria funcin de muchos fenlicos es proteger a los tejidos de la planta de photodamage no herbvoros. Esta propuesta plantea la cuestin relativa a la costes de la resistencia en las plantas, en relacin a las demandas de photosyn - thates por otras funciones metablicas, y las implicaciones de tal costes. La mayora de las plantas producen una amplia variedad de metabolitos secundarios satlites que son txicas para los herbvoros y patgenos, ya sea como parte de su programa normal de crecimiento y desarrollo o en respuesta a estrs bitico. Ambos rasgos de la tolerancia y la resistencia a exigir la reasignacin de recursos de acogida, por lo tanto, los productos qumicos son la defensiva que se consideran costosos para las plantas, porque los genes de resistencia pueden metablica imponer costes (por ejemplo, la reduccin de las tasas de crecimiento que sus sensibles homlogos), debido a la desviacin de la energa y los recursos limitados fuera de la primaria metabolismo. Una forma de una planta para reducir estas gastos de defensa es para sintetizar compuestos slo se ha producido despus de algn grado de dao inicial por un patgeno o insecto: esta estrate - estrategia es de por s arriesgada, porque el ataque

inicial puede ser demasiado rpido o demasiado grave para una defensa eficaz respuesta. Por lo tanto, las plantas que es probable que sufren frecuentes y / o daos graves puede ser mejor principalmente en la inversin fuera constitutiva de defensa antiarea, mientras que las plantas que rara vez son atacados puede basarse principalmente en defensas inducidas (Kombrink y Hahlbrock, 1990; Herms y Mattson, 1992; Purrington, 2000; Wittstock y Gershenzon, 2002, Brown, 2003). 4.2. Va de transduccin entre el agotamiento de los nutrientes y mayor contenido de polifenoles Los resultados de este estudio son coherentes con el plan propuesto en la fig. 3, lo que implica un continuo ciclo de prolina y pro - sugiere un vnculo entre la libertad de prolina (inducida por el estrs o exgena aadido) y el aumento de metabolismo de compuestos fenlicos, estimulada a travs de carbono flujo a travs de la va oxidativa pentosa fosfato. Este sistema se basa en el hecho de que las clulas vegetales es un sistema altamente integrado sistema, que garantiza un estricto reglamento de la interaccin de las vas su acoplamiento a travs de intermediarios, incluyendo piridina nucletidos ( Hace una segunda Berro, 1997). Tras la imposicin de un estrs nutricional, el crecimiento de brotes de organo se reduce (-40%), en comparacin con el control, y esta reduccin parece estar relacionada con un energtico de drenaje que participan en la construccin de un aumento del nivel de los fenmenos compuestos pblico que desva recursos de la produccin de biomasa. Debe ser aqu de nuevo hincapi en que hacer la fotosntesis y el crecimiento no responden de igual forma al gradiente de nutrientes. Procesos de crecimiento son disminuido considerablemente, incluso moderada por falta de nutrientes, mientras que fotosntesis neta no es tan sensible a la limitacin de recursos. As, cuando la deficiencia de nutrientes fregadero impone limitacin en cuanto a crecimiento, auto bohydrates se acumulan en exceso las necesidades de crecimiento y, en su vez, se podran desviar hacia el metabolismo secundario ( Hsiao, 1973; Chapin, 1980; Herms y Mattson, 1992). Al mismo tiempo, como un consecuencia del impuesto estrs nutricional, exposicin de los tejidos de las plantas un (moderado) aumento de la prolina, que mejora la tolerancia de la cel - lular componentes a especies reactivas de oxgeno (ROS), sintetizado po condiciones de estrs que experimentan las plantas (Smirnoff, 1993). Aqu hay que destacar que OPPP es la fuente de la reduccin de y esqueletos de carbono equivalentes, a travs de la va shikimic cido, fenilpropanoides de biosntesis y que su actividad debe ser aumento en las condiciones del aumento en el flujo de fenil - propanoid va ( Fahrendorf et al., 1995). Adems, el aumento de los niveles de sntesis de prolina en condiciones de estrs nutricional mayo cuenta, al menos en parte, para la reduccin de las tasas de crecimiento asociado a exposicin a condiciones adversas. En estas condiciones, el aumento de sntesis de la prolina mantiene NAD (P) + / NAD (P) H ratios en valores compatible con el metabolismo en condiciones normales, ser pro - lnea de sntesis acompaada de la oxidacin del NADPH, y esto puede constituir una forma de respuesta metablica, desencadenado en la seal va de transduccin entre la percepcin de estrs nutricional y la respuesta fisiolgica, dentro de la clula vegetal. El aumento de NADP + / NADPH relacin, mediada por la biosntesis de prolina, es probable que aumentar la actividad oxidativa de la va pentosa fosfato ( Chandler una segunda Thorpe, 1987, Chen y Kao, 1995; Hare y Cress, 1997). El aumento en el total de fenlicos y RA contenido en respuesta a prolina exgenos sugiere que la oxidacin mitocondrial de prolina podra impulsar la oxidativo pentosa fosfato por la va de reciclado cido glutmico en el citosol de generar un ciclo de prolina redox ( Zheng et al., 2001). Adems, la fig. 3 s hows que citoslico glutmico cido puede ser tambin utilizado para el reciclaje de iones de amonio, producido en el primer paso de la biosntesis fenilpropanoides, mediante de la glutamina sintetasa y glutamato sintasa (GS / GOGAT) ciclo. Se ha sugerido que el amonio liberado durante cin activa el metabolismo fenilpropanoides no es disponible para general de aminocidos / la sntesis de protenas. Sino que es rpidamente reciclado volver a la regeneracin de fenilalanina, proporcionando as una efectiva medios de mantener activo el metabolismo con fenilpropanoides ningn requisito adicional de nitrgeno. La libertad de iones de amonio durante lisis se metaboliza a travs de la SG / GOGAT ciclo para generar glu-tamate permitiendo as arogenate sntesis, a travs de prephenate transamination que, a su vez, se regenera fenilalanina (vanHeerden et al., 1996).En cuanto al desarrollo de una nueva estrategia para que la produccin de metabolitos secundarios tiles a escala comercial se refiere, todos los progresos realizados en la comprensin bsica de las rutas metablicas y mecanismos reguladores pueden ser dirigidas para explotar la planta de cultivo de tejidos y clulas para producir potenciales aditivos alimentarios, como los antioxidantes fenlicos. Los resultados de este estudio muestra que el potencial de los cultivos de tejidos en el uso de la tecnologa de tejidos vegetales para la produccin de organo disparar culturas con un mayor contenido de antioxidantes fenlicos es no es satisfactorio a causa de su disminucin de la produccin de biomasa, en comparacin con el control, en tanto hizo hincapi en los cultivos tratados y prolina. Adems, los resultados de esta investigacin sugieren tambin que, como un alternativa a los cultivos de tejidos, organo callo culturas se pueden utilizar suspensin celular para formar culturas que pueden

ser cultivadas en biorreactores para producir antioxidantes fenlicos. De hecho, de lquidos de alto rendimiento cromatografa / espectrometra de masas en tndem de extractos de hoja de callo han demostrado que el organo calles, adems de cido cafeico, cido rosmarinic, B y cido lithospermic identificados en extractos de brotes de organo, tambin lithospermic contienen cido (Fig. 2b), un cido cafeico, cido rosmarinic conjugada, con antioxidantes, antibacterianas y antivirales actividades