Automatizacin en Hematologa

Mg. Marden Alfaro G.

Centrfuga de Microhematocrito

Cmara de Neubauer o Hemocitmetro

Contador Hematolgico

Reportye numerico

Reporte grafico(Histogramas)

LABORATORIO DE HEMATOLOGIA

ANALISIS DE ELEMENTOS FORMES

ANALISIS DE COAGULACION

HEMOGRAMA
(EXAMEN DE HEMATOLOGIA POR
EXCELENCIA)

RECUENTO DE LEUCOCITOS RECUENTO DE ERITROCITOS RECUENTO PLAQUETAS DOSAJE DE HEMOGLOBINA HEMATOCRITO CONSTANTES CORPUSCULARES FORMULA LEUCOCITARIA OBSERVACIONES DE FROTIS DE SANGRE PERIFERICA (HEMOPARASITOS).

VENTAJAS DE EQUIPOS AUTOMATIZADOS

Velocidad. Reproducibilidad. Mayor contaje en Nro clulas. Reduccin de costos. Obtencin de nuevos parmetros Visualizacin: histogramas - dispersogramas. No necesita experiencia laboral. No tiene sesgos de coloracin, distribucin y extendido .

AUTOMATIZACION DEL HEMOGRAMA POR ETAPAS

SEMIAUTOMATIZADO
1ra GENERACION

AUTOMATIZADO
3ra GENERACION 2da GENERACION FORMULA DE 3 NUMERACION POBLACI ONES 4ta GENERACION FORMULA DE 5 POBLACIONES

GB, GR,PLT, HB,HCT, VCM 1954

7 PAR

8 PAR

18 PAR + HIS.DIF

22 PAR RETIC.

CD4/CD8

1972

1980

1990 1994 1995

5ta GENERACION

PRIMERA GENERACIN DE ANALIZADORES HEMATLOGICOS AUTOMTIZADOS

El contador Coulter Modelo S fue el primer instrumento que de manera automtica proces datos multiparamtricos en sangre : Eritrocitos (RBC) Leucocitos(WBC) Plaquetas (PLT)

TODO CONTEO CELULAR COMPARTE TRES PASOS BSICOS

Dilucin de la sangre Toma de muestra de una cantidad medida Conteo de partculas.

La Clula

Propiedades fisicoqumicas de las clulas

Variedad de tamaos Relacin ncleo citoplasma propio de cada clula. Densidad caracterizable y diferente entre clulas. Malas conductoras de la electricidad Se comportan en forma diferente a la luz: absorben, refractan, difractan y dispersan. Composicin citoqumica diferente y caracterizable para cada una.

VOLUMETRIA
El recuento celular absoluto se realiza conociendo el volumen preciso de sangre total diluida que atraviesa la abertura durante el ciclo de recuento

HASTA DONDE SE PUEDE CONFIAR ?

Mtodos Para el recuento celular

- Impedancia

- Citometra de Flujo

PRINCIPIOS DE MEDICIN DE LOS EQUIPOS AUTOMATIZADOS

IMPEDANCIA ELECTRICA DISPERSION DE LUZ ENFOQUE HIDRODINAMICO RADIOFRECUENCIA O CONDUCTIVIDAD CITOQUIMICA FLUORESCENCIA. CITOMETRIA DE FLUJO

Mtodos Para el recuento celular

Los sistemas por impedancia fueron los primeros utilizados para conteo de partculas, pero tenan varios defectos. Los sistemas por citometra de flujo revolucionaron el conteo celular mediante el enfoque hidrodinmico. El enfoque hidrodinmico tambin se aplico en impedancia.

Equipos automatizados por impedancia.

El principio de impedancia se basa en el aumento de la resistencia producida cuando una clula sangunea con baja conductividad pasa a travs de un campo elctrico. El nmero de intermitencias indica la cifra de clulas sanguneas y la amplitud de cada intermitencia es proporcional al volumen de la clula.

Impedancia elctrica
una clula pasa a travs de una apertura por la cual fluye una corriente elctrica continua y constante en un medio electroltico, generar una variacin en la velocidad de flujo de esta corriente elctrica: IMPEDANCIA ELECTRICA.

Impedancia elctrica
El nmero de pulsos: NMERO DE PARTICULAS

Amplitud del pulso elctrico: VOLUMEN DE LA CLULA - Es directamente proporcional

Enfoque Hidrodinmico

Alineamiento de partculas por medio de dos fluidos de diferentes densidades o velocidades.

Pipeta de muestra

Tubo atrapador

Apertura Reactivo de Cubierta

Histogramas

Definicin Representan una distribucin de frecuencias por la acumulacin de impulsos, que se generan cuando las clulas atraviesan la apertura de los electrodos

Propsito del histograma

Identificar

y clasificar la pauta de variacin Desarrollar una explicacin razonable y relevante de la pauta

HISTOGRAMA

GRAFICO QUE REPRESENTA DOS VARIABLES:

-Volumen de la partcula: Eje de las abscisas (X), en femtolitros. -Nmero de partculas: Eje de las ordenadas (Y):

HISTOGRAMA DE GLOBULOS ROJOS

Para determinar los GR se diluye la muestra en un medio isotnico. La curva de GR es cnica, modal y su tamao es de 60 a 120 fl.

Recuento de Glbulos Rojos

VCM

Zona izquierda Evidencia de fragmentos Citoplasmatico Grandes Plaquetas

Zona derecha : Pasaje de coincidencia Agregados celulares Globulos blancos

ALTERACIONES EN HISTOGRAMAS
Izquierda: clulas microciticas, esquistocitos, dacriocitos de registro menor de 60 fl. Derecha: clulas macrociticas, macro ovalocitos, eliptocitos Curva Bimodal: existe dos poblaciones celulares, en pacientes transfundidos, anemias una vez iniciado el tratamiento.

Histogramas
De Glbulos Rojos

.
Desplazamiento a la Izquierda: Microcitosis

VCM

Histogramas
De Glbulos Rojos

.
Desplazamiento a la Derecha: Macrocitosis

VCM

Histogramas
De Glbulos Rojos

RDW Mayor de 15%: Anisocitosis

RDW

Recuento de Globulos Rojos

(Los Parmetros Calculados)

Ht = Hematocrito

Ht = (GR x VCM)/10

HCM = Hemoglobina Corpuscular Media

Hb CMH = RBC 10 6/mm3 x 10

CHCM = Concentracin de Hemoglobina Corpuscular Media

Hb l CHCM = HTO 10 6/mm3 x 1000

MEDICION DE HEMOGLOBINA
Photodtecteur

Source lumineuse

Cuve de mesure

Filtre

CIANMETAHEMOGLOBINA

SULFATO LAURIL DE SODIO

HISTOGRAMA DE GLOBULOS BLANCOS

Se diluye la sangre en un medio que lisa los eritrocitos, a su vez desprender el citoplasma de los GB dejando libres los ncleos, los cuales sern medidos y contados. Los GB se agrupan formando 3 curvas : Linfocitos 50 a 100 fl. Mixtos o Intermedios 100 a 150 fl. Granulocitos 150 a 380 fl.

Anormalidades
CURVA DE LINFOCITOS: Perdida de altura: disminucin del numero de linfocitos. Arranque extenso en Y: clulas o restos celulares de menor tamao que un linfocito pequeo (macroplaquetas, ncleos de hemates).

Anormalidades
CURVA DE LINFOCITOS: Distribucin no normal a la derecha: linfocitos atpicos, aumento de monocitos o de linfocitos grandes.

CURVA DE GRANULOCITOS
Curva plana o no existente: granulocitopenias, acompaada de linfocitosis. Curva extendida a 400 fl con extensin a mononucleares: neutrofilia, clulas de lneas mas inmaduras (mielos y metas).

Histogramas de Plaquetas

La curva normal es cnica, modal y su tamao es 2 a 20 fl.

Zona de Macroplaquetas, Agregados plaquetarios, microcitos

Alarmas en el histograma

PRINCIPALES ALARMAS:
.

PLTR: Indica que el recuento de plaquetas est por debajo del rango de normalidad. LRI: Indica interferencia en la regin baja de plaquetas. micro plaquetas inclusiones eritrocitarias fragmentos celulares hemlisis URI : Indica interferencia en la regin alta de plaquetas. microcitos Fragmentos de eritrocitos macroplaquetas satelitismo plaquetario agregados plaquetarios

Alarmas por encima del histograma

Indica interferencia en la regin entre 20 y 40 fl. Se activa por alguna de las siguientes causas: Macroplaquetas Esquistocitos Microcitos Satelitismo plaq. Agregados plaquetarios

Anormalidades
No arranque en x: numero de plaquetas esta disminuido.

Extendida 25-30 fl: aumento en el tamao de las plaquetas y estn aumentadas.

MTODOS DE DISPERSIN DE LUZ

BASADOS EN CITOMETRIA DE FLUJO

Equipos automatizados por dispersin ptica. Principio

Est basada en las mediciones de la dispersin de la luz obtenidas de una sola clula sangunea que pasa a travs de un haz de luz (ptico o lser). Estas clulas crean una dispersin hacia delante y lateral las cuales se detectan mediante fotodetectores .El grado de dispersin hacia delante es una mediacin del tamao de la celular mientras que el lateral es una medicin de la granularidad de la clula..

Seales de Dispersin

La dispersin resulta de la interaccin de la luz con una partcula que produce un cambio de direccin) en todas las direcciones del espacio. Determinan: Tamao celular, la membrana, el ncleo y el material granular del interior de la clula, llamado complejidad.

Mtodo de radio frecuencia

Corriente directa Radio frecuencia

Mide tamao

Mide densidad celular

Sistema ptico de la dispersion de luz

Dispersogramas

Son grficas analticas, que en base a la metodologa de medicin celular, logra ubicar bi y tridimensionalmente los distintos componentes celulares de la sangre. Permite determinar la densidad celular de cada poblacin Las alarmas son altamente especficas

Son los ms ampliamente estudiados Enorme contribucin en el esclarecimiento de las series comprometidas con la patologa Son dependientes de la metodologa de medicin.

Dispersogramas de Leucocitos

Beckman Coulter: VCS

Volumen Conductividad Scatter Light

VOLUMEN Y DISPERSION DE LUZ

MAPSS
Multi Angle Polarized Scatter Separation
0 10 90 90D

Tamao Complejidad (Estructura Interna) Lobularidad (Estructura Nuclear) Refringencia de los Grnulos

Informacin de la dispersion de luz en diferentes ngulos

90Pol/ 90dep

Granulations

Faisceau laser
P o l a r i s a t i o n

10 Structure

1/3 (0) Taille

1/3 (0) Taille 10 Structure

Medida a 0 sirve para medir el tamao celular Medida a 10 mide la complejidad celular Medida a 90 mide la superficie celular y la estructura interna ( lobularidad ) Medida a 90D mide determinados tipos de granularidad celular

Dispersogramas
0
TAMAO NEUTROFILOS MONO EOSINOFILOS BASO LINFOCITOS

COMPLEJIDAD 10

Dispersogramas
90
LOBULARIDAD

POLINUCLEARES

MONONUCLEARES

10
COMPLEJIDAD

Dispersogramas
90D
GRANULARIDAD CELULAS CON GRANULOS REFRINGENTES

CELULAS SIN GRANULOS REFRINGENTES

LOBULARIDAD

90

Dispersogramas
90D
GRANULARIDAD EOSINOFILOS

NEUTROFILOS

LOBULARIDAD

90

Dispersogramas
90
LOBULARIDAD POLI

MONO

ZONA DE BLASTOS

TAMAO 0

Sysmex: ACAS

Adaptative Cluster Anlisis System

Principios y Tecnologa
Escategrama: Areas de Celulas Anormales en el Canal IMI RF

IMI

Desviacion a la izquieda?

Cumulos de Plaquetas?

Fantasmas (WBC, RBC, PLT, NRBC) HPC ?

Imm Gran?

Blastos ?

CD

Dispersograma para granulocitos inmaduros

Siemmens - Bayer: PANDA

Peroxidase Actity Nuclear Density Analisis

Dispersograma para reticulocitos y plaquetas opticas

Citoqumica
Reacciones desarrollas en el proceso de automatizacin para evidenciar enzimas y otras molculas que permitan diferenciar una clula de otra. Puede darse a nivel de membrana, citoplasmtico y ncleo.

Ejemplos de dispersogramas

Sysmex

Ejemplos de dispersogramas

Cell Dyn 3500 - 3700

DISPERSOGRAMA ABBOT

Ejemplos de dispersogramas
1 Ruido electrnico

2 NRBCls 3 P laquetas 4 Linfocitos y Basfilos 5 Clulas Grandes no teidas (LUC) 6 M onocitos 7 Neutrfilos 8 Eosinfilos
Advia

Dispersograma para basfilos

Dispersograma para basofilos

Autoanalizadores con diferencial de 5 partes SYSMEX XE ADVIA 210

CELLDYN

COULTER

DISTRIBUCIONES NORMALES

REGIONES DE ALARMA

Autoanali zador con diferencial de 3 partes

parmetros de medicin
HISTOGRAMAS DE WBC

Tipo de clula Linfocitos Mononuclea res Granulocito s

Tamao en fL 35 - 90 90 - 160 160 - 450

Clulas presentes en el rango Linfocitos normales y atpicos Mo, Prom, Mye, plasmocitos, blastos Segm, Abast, Metas, eos, basfilos

Canal DIFF

(informacin del RNA/ DNA)

FLUORESCENCIA

D(

Estructura Celular Interna )

FLUORESCENCIA (Informacin del RNA/DNA)

Escatergrama DIFF Anormal

RADIOFRECUENCIA ( Conductividad )
La conductividad de las ondas de radio A travs de las clulas, nos revelan su composicin interna

SYSMEX SF - 3000

SE - 9500

Beckman Coulter

Beckman Gen-S with slidemaker