IMPLANTES SCAFFOLDS PARA REGENERACIN SEA.

MATERIALES, TCNICAS Y MODELADO MEDIANTE SISTEMAS DE REACCIN-DIFUSIN RESUMEN El presente trabajo hace una revisin de los biomateriales usados en implantes seos y sus aplicaciones clnicas y propone la hiptesis que un sistema reaccin-difusin puede ser usado para regular el porcentaje de porosidad, el tamao de poro y la interconectividad de los mismos en cementos seos inyectables. En la primera parte se describen los biomateriales en la ingeniera de tejidos seos, en la segunda se detallan las propiedades mecnicas y geomtricas necesarias para el proceso de regeneracin sea, en la tercera se explican los mtodos de conformacin y aplicacin de implantes, en la cuarta se hace una revisin de las tcnicas de modelado computacional aplicadas a los procesos de manufactura de implantes y al proceso de regeneracin sea y por ltimo se propone la idea de que un sistema reaccin-difusin puede servir para modular la porosidad de un cemento seo inyectable. INTRODUCCIN La ingeniera de tejidos usa los principios y mtodos de la ingeniera, la biologa y la bioqumica para la comprensin de la estructura y la funcin de los tejidos normales y patolgicos de los mamferos y el consecuente desarrollo de sustitutos biolgicos para restaurar, mantener o mejorar su funcin. 1 Los sustitutos hacen uso de tres metodologas que pueden actuar solas o combinadas para recuperar la biofuncionalidad: biomateriales, factores de crecimiento y cultivos celulares. En el campo de los sustitutos seos es de especial importancia el primer factor, pues los huesos son los elementos estructurales del cuerpo humano y su funcin se determina principalmente por las propiedades mecnicas del material del que se componen. En Estados Unidos se llevaron a cabo cerca de 500 000 procedimientos con implantes seos en el ao 2000, mientras que la empresa consultora de mercados Kalorama estima que el mercado de implantes seos en el 2010 ser de $ 3 500 millones USD.2 Es evidente que el desarrollo de implantes seos cermicos, polimricos o compuestos en forma de estructuras slidas porosas (scaffolds, matrices o andamios) o como cementos seos inyectables es importante. Los mtodos de fabricacin de scaffolds buscan controlar la arquitectura de los mismos a diferentes niveles pues tanto la forma externa como la estructura interna son parmetros de diseo de ingeniera necesarios para lograr la regeneracin de tejido. Entre dichas caractersticas est la forma externa del scaffold, adecuada al sitio donde ser colocado y la porosidad. A mayor porosidad e interconectividad mayor facilidad de proliferacin y migracin celular, adems de mayor transporte de nutrientes. El tamao del poro que para aplicaciones en hueso se estima que debe estar entre 100 y 500 m. En la actualidad los mtodos de fabricacin convencionales como el lechado de partculas logra buenas caractersticas de porosidad pero no hay control de la forma externa y hay gran variabilidad de las propiedades fisicoqumicas entre cada implante hecho an con los mismos procedimientos. Por otro lado, los mtodos de forma libre o prototipado rpido controlan la forma externa pero aun no tienen la resolucin para lograr detalles del orden de micras. Una tercera alternativa a los implantes seos la constituyen los cementos seos inyectables. Estos cementos seos tienen su aplicacin principal en la fijacin de prtesis y en el relleno de cavidades seas como en los tratamientos de kifoplastia. Como ventaja su aplicacin requiere procedimientos mnimamente invasivos pero su porosidad es muy baja tanto en porcentaje de porosidad como en tamao del poro. Adems de hacer una revisin sobre materiales y fabricacin scaffolds como sustitutos seos este artculo presenta una propuesta de modulacin del porcentaje de porosidad, tamao de poro e interconectividad de un cemento seo a partir de la teora de reaccin-difusin propuesta por Turing hacia 1952. Desde entonces, dicha teora se aplica en muchos campos de la qumica y la biologa, en especial para modelar patrones en seres vivos. Los sistemas reaccin-difusin como modelos matemticos representan uno o ms reactivos distribuidos espacialmente que cambian debido a reacciones qumicas y se difunden en dicho espacio. Esto permite una configuracin estable en el que las concentraciones de las sustancias que componen el sistema no son uniformes en un dominio y genera singularidades que conforman patrones. Esta capacidad de lograr patrones o distribuciones espaciales es lo que permite pensar en un proceso que permita regular la geometra interna de un implante seo que se obtiene por cemento seo inyectable, mientras se desarrolla el proceso de curado de este material en la cavidad o defecto seo donde se aplica.

DESARROLLO Biomateriales Un biomaterial se define como: "un material ideado para interaccionar con los sistemas biolgicos para evaluar, tratar, aumentar o substituir cualquier tejido, rgano o funcin del cuerpo" segn la Second Consensus Conference on definitions in Biomaterials (Segunda Conferencia para el Consenso de definiciones en Biomateriales), que tuvo lugar en el Reino Unido en 1992.1 Un rea de inters para la ingeniera tisular es el desarrollo de materiales que contribuyan en los procesos de regeneracin sea. Estos son necesarios pues las patologas de los huesos representan una porcin importante de las causas de incapacidad fsica sin importar la condicin de las personas. En un principio, en el enfoque dado a los implantes seos solo se buscaba aplicar o desarrollar materiales capaces de soportar los esfuerzos mecnicos que originalmente deba soportar el hueso daado y que no provocaran una reaccin de rechazo por parte del organismo en el que se implantaban. En esta categora de materiales encontramos metales como los aceros inoxidables y aleaciones de titanio en los sistemas de fijacin de huesos que con fracturas. Sin embargo, estos sistemas tienen el inconveniente de que requieren intervenciones quirrgicas para su extraccin luego del tratamiento, lo que implica mayores costos y potencializa la infeccin. Adems, todo material que se inserta en un tejido vivo provoca una respuesta, aunque sea leve, por parte de este. En las ltimas dcadas se desarrollaron biomateriales para cumplir requerimientos especficos en diferentes aplicaciones clnicas. Autores como Ikada,3 Meyer,4 Estrada5 yBarrere6 describen que los materiales para implantes seos deben observar las siguientes propiedades: Biocompatibilidad: integrarse al organismo hospedero sin que haya efectos citotxicos, genotxicos o respuesta inmune. Esta es una propiedad fundamental de los biomateriales. Biodegradabilidad: degradarse (mediante hidrlisis) a tasas que sean lo ms cercanas posibles a las tasas de formacin de nuevo hueso. Esto constituye un reto a la biocompatilidad debido a que los productos de la degradacin no deben ser txicos. Resistencia y compatibilidad mecnica: resistir cargas mecnicas segn sea la posicin del tejido seo que reemplaza. Las propiedades mecnicas como el mdulo de elasticidad, la resistencia a la traccin, a la fractura, a la fatiga y porcentaje de elongacin, entre otros, deben ser lo ms cercanas posibles a las del tejido que se reemplaza (compatibilidad mecnica) para evitar la osteopenia que se asocia al uso de implantes seos o "stress shielding". Osteoinductividad: promover la fijacin de la formacin de clulas especficas del tejido seo. Esto se logra al reclutar clulas madre mesenquimales y osteoprogenitoras para que posteriormente proliferen y se diferencien hacia la lnea osteognica. Osteoconductividad: actuar como soporte estructural en la formacin y crecimiento de nuevo hueso. Esta propiedad se combina con la biodegradabilidad pues el material del implante debe ser reabsorbido para dar espacio al nuevo tejido que inicialmente ayud a soportar. Radiolucidez: diferenciarse radiogrficamente con respecto al tejido donde se implant. El desarrollo de la ingeniera de tejidos en el rea de biomateriales exhibe materiales que cumplen en mayor o menor grado estas propiedades. Existen familias de materiales con caractersticas que les hacen tiles para un rango especfico de aplicaciones clnicas por lo que segn sea la aplicacin se debe seleccionar el biomaterial. Los materiales delscaffold se clasifican segn sean metlicos, cermicos, polimricos u orgnicos. Puede haber materiales compuestos como cermico-metal o cermico-polimrico. Tambin pueden clasificarse en slidos o hidrogeles (si el contenido de agua es mayor al 30 %). Orgnicos

Los materiales naturales son los que usan tejido seo del mismo individuo (autoinjertos), de individuos de la misma especie (aloinjertos) o de especies distintas (xenoinjertos). Son los autoinjertos los que cumplen las tres propiedades de osteoinductividad, osteogenicidad y osteoconductividad deseables en el implante. Su inconveniente radica en el costo y complejidad de los procedimientos quirrgicos requeridos para obtener el tejido como implante, adems de las complicaciones postoperatorias propias de cirugas invasivas. Los aloinjertos requieren de tratamientos como liofilizacin, irradiacin, lavado con cidos, entre otros para evitar el rechazo por parte del receptor y eliminar posibles infecciones en el tejido a implantar. Los xenoinjertos, como los de hueso bovino tambin presentan el inconveniente de enfermedades contagiosas. Cermicos Los materiales cermicos que se usan en la regeneracin sea, como la hidroxiapatita (HA) y fosfatos de calcio en general, se caracterizan por tener las siguientes propiedades: composicin qumica semejante con el componente mineral del hueso, propiedades mecnicas semejantes a las exhibidas por los huesos y propiedades bioactivas. En esta categora de material cermicos el ms usado es la hidroxiapatita la cual es un fosfato de calcio cristalino (Ca10) (PO4)6 (OH)2). Este material, de tipo cermico, es el componente mineral principal de los huesos en los mamferos pues entre el 60 y el 70 % del peso del tejido seo seco es este compuesto. En dependencia de su fuente puede presentar una estructura muy similar al tejido seo, lo que provee caractersticas de osteoconductividad que permite que el tejido conectivo del hueso que le rodea le penetre y realice un proceso de osificacin del material.7,8 Luego de estudiarse profundamente la osteoconductividad, comenzaron a realizarse experimentos para establecer adems como es que el material del implante promueve la osteoinductividad. Los estudios de Okumura9 muestran cmo la osteognesis comienza sobre la superficie de los poros del implante y crece en el espacio disponible en los poros por lo que una adecuada densidad de estos es muy importante. La medicin de las propiedades mecnicas del implante in vivo se estudiaron por Trecant,10 quien en 1994 dise un estudio que mostr como aunque los implantes de fosfato de calcio tienen bajas propiedades mecnicas al momento de colocarse en el organismo, posteriormente mejoran sus propiedades debido al crecimiento de tejido seo y gracias a la formacin de colgeno y apatita biolgica. Si bien diferentes tipos de fosfatos de calcio o variaciones de la HA pueden tener diferentes grados de biodegradabilidad, Kitsugi y Cols.11 mostraron que no hay cambios significativos en las propiedades osteoinductivas del material. En 1996 Zongjian y Cols.12 realizaron implantes en distintos animales y demostraron que la hidroxiapatita y fosfato de calcio pueden generar procesos de ontognesis aun cuando el implante no se coloque en tejido seo, sino de manera intramuscular o subcutnea. La velocidad y forma de la generacin de tejido vara segn sea el tipo de animal. En perros se mostr el crecimiento de tejido vascular conectivo a los 15 das, alojamiento de clulas mesenquimales a los 30, generacin de matriz sea a los 45 das y remodelado del tejido seo a los 60 das. La reactividad en la superficie del implante se estudiada por Ducheyne y Qiu13 pues afecta la fijacin, proliferacin, diferenciacin y mineralizacin de las clulas del tejido seo.Cerroni y Cols.14 llevaron a cabo estudios con hidroxiapatitas sintticas y expusieron cmo se generaba el tejido seo en los poros de la cermica sinttica. Polmeros En el caso de los polmeros reabsorbibles las investigaciones se centran en los derivados del cido poligliclico (PGA) y del cido polilctico (PLA). El primer uso de los mismos se report en 1960 con el desarrollo de las suturas biodegradables. De los anteriores el que recibe mayor atencin es el PLA, polmero termoplstico, amorfo y semicristalino, pues aparte de su aplicacin en suturas tambin se estudia su papel en la liberacin controlada de frmacos e implantes seos reabsorbibles. Hasegawa y Cols.15 comprob que la velocidad de degradacin de los implantes se relaciona con el sitio en donde es implantado, pues las cargas mecnicas que debe soportar el tejido influyen en la cantidad formada de este. Compuestos

La revisin bibliogrfica muestra en los ltimos aos una fuerte tendencia en el desarrollo de scaffolds hechos de materiales compuestos cermico/polmero. Esto se debe a que cermicos como los fosfatos de calcio tienen excelentes propiedades osteoinductivas pero una baja degradabilidad, baja resistencia mecnica y dificultad en sus procesos de conformacin para controlar las caractersticas fsicas y geomtricas requeridas del scaffold. Por otro lado, los polmeros como el cido polilctico exhiben baja osteoinductividad pero mejores propiedades mecnicas y de degradabilidad, adems de que se pueden conformar mediante varios procesos que permiten controlar mejor sus caractersticas geomtricas. El desarrollo de compuestos cermico/polmero permite obtener un material biodegradable, de buena resistencia mecnica, osteoinductivo, osteoconductor y conformable al combinar las propiedades de los materiales base que lo componen como se ve en la tabla 1. Un resumen de los biomateriales y sus aplicaciones se describe en la tabla 2. Tabla 2. Materiales para implantes seos. Extractado y adaptado de Ikada.3 Composicin Tipo Origen Fosfatos de calcio Ej.: hidroxiapatita, fosfato Cermico Sinttico tricalcico, fosfato de octacalcio Fosfatos de calcio base Vidrios Sinttico silcio (biovidrios) cermicos Aplicaciones clnicas Regeneracin sea, de sitios sin carga mecnica, relleno de defectos seos (cementos, grnulos, recubrimientos) Regeneracin sea, de sitios sin carga mecnica, relleno de defectos seos (grnulos, recubrimientos) Propiedades Adhesin de tejido seo (bioactividad), biodegradable, tasa de degradacin variable Adhesin de tejido seo (bioactividad), biodegradable Alta resistencia a la tensin, resistencia a la fatiga, sin adhesin de tejido seo, alta resistencia a la fatiga, baja friccin Adhesin de tejido seo (bioactividad) en algunos casos. Resistente a la corrosin. Alta resistencia mecnica Corrosin a largo plazo

Alumina aluminio)

(xido

de

Cermico Sinttico

Reemplazo de articulaciones (rodilla, hombro)

Titanio y sus aleaciones

Metal

Sinttico

Reemplazo de hueso en sitios con carga mecnica. Prtesis dentales o de cadera, vertebras Reemplazo de hueso en sitios con carga mecnica, prtesis dentales y de cadera, vrtebras y fijaciones Reemplazo de hueso en zonas con carga mecnica, relleno de defectos seos (cemento seo). Fijacin de prtesis de cadera y vertebroplastia Fijacin degradable de hueso, hilo de sutura, relleno de defectos seos, regeneracin tejido blando y liberacin controlada de frmacos Componente de prtesis articulares en la zona de movimiento relativo (junta) Cemento y relleno defectos seos. de

Acero inoxidable, aleaciones de cobalto y Metal cromo

Sinttico

Polimetilmetacrilato

Polmero

Sinttico

No degradable

Poliesteres como el cido polilactico, cido poligliclico, Polmero policaprolactona y poliuretano. Polietileno de ultra alto Polmero peso molecular Tereftalato de polietileno Polmero

Sinttico

La tasa de degradacin y las propiedades mecnicas se pueden controlar variando su peso molecular Capacidad de lubricacin La tasa de degradacin y las propiedades mecnicas se pueden controlar

Sinttico

Sinttico

variando su peso molecular. Bioactivo Polietilenglicol Coral Matriz desmineralizada Colgeno sea Polmero Mineral Protena Protena Excipiente en frmacos y Gel acuoso inyectable y alimentos. Reparacin de degradable tejidos duros y blandos Natural Alta interconexin, Relleno de defectos seos (animal) biodegradable Biodegradable, fuente Natural Relleno de defectos, natural de protenas (humano) regeneracin de cartlago osteoinductivas (BMPs) Natural Reparacin de tejidos duros Biodegradable (bovino) y blandos Sinttico

En 1999, las bondades del uso de compuestos de HA y cido polilctico se muestran en el estudio de Shikinami17 quien realiza compuestos de estos materiales que son conformados por presin y luego maquinados. Los materiales obtenidos muestran propiedades mecnicas cercanas a las del hueso cortical adems de reabsorbibilidad, bioactividad y osteoconductividad. En 2004 Ignjatovic y Uskokovic18 desarrollaron compuestos de HA y acido polilctico que conformaron por presin en caliente. Al variar la presin del proceso se obtuvo diferentes grados de porosidad en los materiales que se implantaron en ratones, con buena biocompatibilidad y adhesin del tejido al implante. Tambin los efectos de los procesos de esterilizacin de cido polilctico fueron estudiados por Weir y Cols.19 pues cambios en la cristalinidad y el peso molecular que se generan por los procesos de este tipo alteran de manera importante las propiedades mecnicas del material polimrico. Manufactura de scaffolds Los procesos de fabricacin de scaffolds para tejido seo buscan controlar la arquitectura de los mismos a diferentes niveles pues tanto la forma externa como la estructura interna son parmetros de diseo de ingeniera necesarios para cumplir los requerimientos clnicos especificados en la primera seccin. La arquitectura tiene diferentes propiedades y caractersticas segn sea la dimensin de un elemento del scaffold. Para describirla se consideran tres escalas bsicas que se describen a continuacin: La macroescala-mesoescala describe la geometra que se mide en mm. Entre sus caractersticas estn la forma externa del scaffold segn el sitio donde ser colocado, las propiedades mecnicas, la densidad y la porosidad: como porcentaje de volumen del scaffold que es vacio. A mayor porosidad mayor facilidad de proliferacin y migracin celular adems de mayor transporte de nutrientes. La microescala: est compuesta por caractersticas del orden de m como: tamao del poro, interconexin de poros y degradabilidad. La nanoescala: caractersticas en nm, trata de factores como: topologa de la superficie de los poros y la fisicoqumica superficial.

Diversos mtodos de manufactura se usan para lograr propiedades determinadas a diferentes escalas. Estos mtodos se clasifican en convencionales y de prototipado rpido. Los convencionales hacen uso de fenmenos fsicos-qumicos para lograr estructura internas con un tamao de poro de entre 100-500 m mientras logran porosidades hasta del 90 %, tienen como desventaja que la estructura interna est compuesta por trabculas dispuestas aleatoriamente, el espesor de los scaffolds que se obtienen alcanza hasta unos 8 mm y hay gran variabilidad en propiedades fsicas como la permeabilidad en scaffolds hechos de la misma manera. Por su parte, los mtodos de prototipado rpido (RP), tambin llamados modelado de forma libre (SFF), logran scaffolds de mayor tamao y con estructuras orientadas pero no logran porosidades elevadas ni poros de pequeo tamao. Un listado de las tcnicas de manufactura de scaffold se da en la tabla 3.

Modelamiento computacional de scaffolds En cuanto a modelamiento de los procesos de regeneracin sea, se ve que en la ltima dcada se desarroll un trabajo tendiente a caracterizar el comportamiento delscaffolds segn sea el material y geometra del mismo. Una revisin hecha por Sengers y Cols.20 muestra que las principales reas de estudio son: Transporte de nutrientes, proliferacin y la sntesis de matriz extra celular (ECM) : esta rea trata sobre el metabolismo de nutrientes, transporte y utilizacin, la cintica de formacin de la ECM, la proliferacin celular y las limitaciones de nutrientes, las interacciones mecnicas y el crecimiento volumtrico y la proliferacin y diferenciacin de clulas madre. Adhesin y migracin celular: se considera la colonizacin de scaffolds, el medio en que se implanta y la diferenciacin celular, la movilidad y migracin celular, se consideran las interacciones entre las clulas y el scaffold como las de tipo mecnico. Formacin de colonias: ya sea mediante modelos continuos o de autmatas celulares. Estructura del scaffold y la adaptacin del tejido: se simula el material de los scaffolds, el transporte de sustancias y el tamao de los poros, la arquitectura de losscaffolds. La tcnica de anlisis predominante para esto es el anlisis por elementos finitos (FEM). Por ltimo tambin se estudia la diferenciacin de tejidos y la remodelacin adems de la migracin de clulas en superficies del scaffold. A continuacin se consideran algunos trabajos hechos en las reas mencionadas. Adachi y Cols.21 en su estudio proponen que para el cumplimiento de los requisitos de diseo, la eleccin del material del scaffold y su microestructura es muy importante. La resistencia mecnica y la permeabilidad estn en funcin de estas y otras variables. La microestructura tambin afecta el proceso de regeneracin sea a lo largo del tiempo. Es por esto que analiza el scaffold a nivel de microescala (una celda cbica porosa) para proponer una estructura metodolgica para el diseo de scaffolds con aplicaciones clnicas. Liu y Cols.22 usa el algoritmo de diferenciacin de tejido por regulacin mecnica con algunas variaciones con respecto al modelo original propuesto por Lacroix. Frente a otros modelos de crecimiento de tejido seo este distingue el tipo de tejido que crece (conectivo, cartilaginoso u seo segn sea el esfuerzo al que est sometido el tejido y a los movimientos que ocurren sobre su superficie. Esto ayuda a comprender los resultados experimentales que otros modelos no predijeron. El modelo se basa en la teora mecanoesttica de Frost. En esta teora el hueso de adapta segn sea el esfuerzo al que est sometido o su deformacin. Se demuestra que el estmulo genera una mineralizacin del hueso que a su vez modifica el mdulo elstico del mismo. Sanz-Herrera y Cols.23 modelan in-silico el efecto que el porcentaje de porosidad, tamao del poro, rigidez inicial del material y cantidad de clulas cultivadas tiene en el mdulo de elasticidad, cintica de remodelamiento y crecimiento de tejido dentro de un scaffold. Se muestra que el porcentaje de porosidad es factor que afecta de manera importante los procesos de flujo en el scaffold as como las propiedades mecnicas del mismo. Porosidades del 75 al 90 % muestran ser las mejores para facilitar la proliferacin celular. El tamao del poro afecta los procesos de velocidad de migracin celular. Tambin es importante por afectar la difusin de nutrientes y evacuacin de desechos del metabolismo celular. Se encuentra que poros de ms de 100 m son recomendables. Tambin se concluye que la rigidez del material afecta los procesos de remodelacin sea pues zonas con poca deformacin muestran reabsorcin. Ruimerman y Cols.24 Hacen una revisin de las teoras sobre adaptacin sea. Muestran que en general todas las teoras propuestas mencionan que la densidad sea vara por la accin de variables de tipo mecnico debido a la aplicacin de cargas externas. Afirman que algunos de los mecanismos o factores ms relevantes del proceso de remodelacin ya fueron identificados pero aun falta trabajo por realizar pues los modelos existentes dejan de lado aspectos importantes desde el punto de vista biolgico. Milan y Cols.25 presentaron el modelamiento de un scaffold hecho de polmero de cido polilctico (PLA) y fosfato de calcio, para ello emplearon las tcnicas de FEM y CFD para simular las condiciones de un

birreactor en donde est sometido a la accin de un medio de cultivo. Las cargas que se aplican son compresivas y variables pues se relacionan con las condiciones reales de carga de los huesos en mamferos. Frente a otros modelos tiene como particularidad que la malla o modelo geomtrico se realiza con base en la reconstruccin 3D de un scaffold real. Se obtuvo que la compresin dinmica es un mtodo que permite la estimulacin de la proliferacin celular que podra funcionar mejor que las cargas estticas y frente a la perfusin tiene la ventaja de estimular reas ms amplias del scaffold. Galbusera y Cols.26 presenta el modelamiento numrico del comportamiento de un scaffold de hidroxyapatita portador de frmacos. El implante fue probado in-silico en diferentes posiciones dentro de un femur humano. Se comprob la resistencia mecnica (segn el criterio de falla de Tsai-Wu para materiales cermicos) y la mxima porosidad del scaffoldpara la cual no ocurre la falla. Se prob el riesgo de desmineralizacin por blindaje de esfuerzo (en ingls: stress-shielding) y se model la cintica de liberacin de la droga. Sistemas de reaccin-difusin en biologa La organizacin o estructura de los tejidos es un aspecto de inters para la mecanobiologa. Se tiene por consenso que los mecanismos de organizacin de un tejido responden esencialmente a estmulos fsicos y qumicos. En el tejido seo se identificada un fenmeno de remodelacin sea donde la mineralizacin del hueso es secundaria a estmulos mecnicos de esfuerzo y deformacin, as como a estmulos de hormonas como cuya inestabilididad puede ocasionar procesos como la osteoporosis. Hay que notar que existen mltiples mecanismos que afectan la forma y estructura del tejido seo por lo que un rea de trabajo en la biologa computacional es la determinacin mediante simulacin de los procesos dominantes y la validez de las suposiciones en que se basan los modelos de dichos procesos. Dentro de los mecanismos qumicos que se estudian estn los sistemas de reaccin-difusin donde uno o ms qumicos, llamados morfogeneradores, se difunden en un espacio reaccionando entre s hasta que un patrn estable de concentraciones qumicas es alcanzado. A su vez, dichas concentraciones actan como un estmulo o seal que activa procesos celulares como la diferenciacin o proliferacin e influye de esta manera en la organizacin tisular como lo muestra el trabajo de Garzn27 sobre osificacin endocondral. Un sistema reaccin-difusin bsico se compone de dos sustancias a y b que se difunden en el espacio a diferente velocidad y reaccionan entre s. En un espacio unidimensional la forma general de un sistema reaccin-difusin puede ser como aparece en la siguiente ecuacin:

La ecuacin expresa que la concentracin de la sustancia a en un tiempo dado depende de una funcin F que depende de las concentraciones de a y b ms la difusin de adesde la vecindad. La constante Da mide la velocidad de difusin de a mientras que el laplaciano describe la concentracin de a en un punto con respecto a la concentracin de la misma sustancia en la vecindad; as, si la concentracin de a en la vecindad de un punto es mayor que en el punto el laplaciano es positivo y la difusin se da hacia el punto mientras que si la concentracin es menor en la vecindad el laplaciano es negativo y la difusin se da hacia la vecindad. La formacin de patrones en los sistemas reaccin difusin ocurre si una variacin de las concentraciones iniciales de las sustancias hacen que el sistema, inicialmente inestable, alcance un estado estable en el que la concentracin de las sustancias reactivas o los morfogeneradores varen en el espacio. La figura 1 muestra un patrn de Turing generado en un espacio bidimensional. Ntese que la sustancia a toma la forma de puntos. En este sistema hay altas concentraciones de b donde la concentracin de a es baja. A la sustancia b se le llama inhibidor por que altos valores de b en un punto evitan que otros puntos con altas concentraciones de bse formen alrededor. En un sistema reaccin-difusin de dos sustancias el inhibidor es aquella sustancia que se difunde ms rpidamente. Hay que notar que existen otros sistemas que pueden tener ms reactivos con los que se obtienen distintos patrones de tal manera que se puede variar la geometra resultante. En la figura 2 se compara el hueso esponjoso humano, el coral y un patrn que se

obtuvo mediante un sistema reaccin-difusin que se inspir en el trabajo de Turing, donde se puede notar cierta similitud entre el patrn que se genera y la estructura de los tejidos mineralizados.

La ingeniera de tejidos tiene el reto de desarrollar scaffolds que cumplan la funcionalidad del hueso e imite sus propiedades y proporcione un soporte temporal que ayude al proceso de regeneracin sea. Existen muchas alternativas de materiales, tcnicas de procesamiento y uso en combinacin con otras tcnicas de ingeniera de tejidos. Esta investigacin permite entender los procesos biolgicos, fsicos y qumicos y cules son sus mecanismos dominantes para as poder hacer un adecuado desarrollo y seleccin de materiales y tcnicas de fabricacin de scaffolds para obtener implantes que sean sustitutos seos tiles en aplicaciones clnicas.