LABORATORIO 1 MICROORGANISMOS EFICIENTES DEL SUELO

Microorganismos

Eficaces

Microorganismos

benficos

(Effective

Microorganisms) es un coctel de microorganismos empleados para designar algunos tipos de inoculantes microbianos que interaccionan favorablemente sobre el suelo y plantas; para representar efectos favorables sobre ellos. Fueron

descubiertos y desarrollados por el Doctor Teruo Higa, profesor de la Universidad de Ryukyus en Japn en la dcada de 1980 (Higa, 1980). El Doctor Higa estuvo investigando la eficacia microorganismos individualmente sin xito alguno. Pero en 1977, al final de una investigacin en su laboratorio mezcl los residuos de los microorganismos y los desech en el jardn. Luego de varios das observ un crecimiento anormal de las plantas justo en el lugar donde haba adicionado la mezcla, concluyendo que estos microorganismos producan efectos positivos en el crecimiento de las plantas. De all naci el desarrollo de la tecnologa de microorganismos benficos (Fujisawa, 1999).

Entre los usos que actualmente se han dado a los microorganismos eficientes en la agricultura estn: la capacidad de fijar nitrgeno, corregir la salinidad del suelo al hacer intercambio de iones de Cloro y sodio y aguas duras, facilitando el drenaje y lavado de estas sales txicas para los cultivos. Facilitan la descomposicin de los desechos orgnicos (Compost, Bocashi) por medio de procesos de fermentativos, favorecer la desintoxicacin con plaguicidas, la suspensin de enfermedades en pantas; el aporte de nutrientes al suelo y la produccin de compuestos bioactivos como vitaminas y hormonas que estimulan el crecimiento de las plantas, adems se actuar como desbloqueador de suelos: pues permite solubilizar ciertos minerales tales como la cal y los fosfatos. (Martnez, 2002).

El xito de los microorganismos eficientes se logra cuando se dan las condiciones ptimas para metabolizar los sustratos, como disponibilidad de agua, pH, temperatura, Oxigeno; as como la disponibilidad de fuentes energticas. Dentro de estos microorganismos benficos, se encuentran los siguientes grupos: Bacterias acido lcticas: Las bacterias acido lcticas producen cido

lctico de azcares y otros carbohidratos, producidos por las bacterias fototrpicas y levaduras. Por eso, algunas alimentos y bebidas como el yogur y encurtidos son hechas con bacterias acido lcticas desde tiempos remotos. El cido lctico producido por estas bacterias, es un compuesto bactericida que suprime microorganismos patgenos y facilita la remocin de la materia orgnica no descompuesta. Las bacterias acido lcticas tienen la habilidad de suprimir enfermedades incluyendo microorganismos como Fusarium, que aparecen en programas de cultivos continuos; adems ayudan a solubilizar la cal y el fosfato de roca. En circunstancias normales, especies como Fusarium debilitan las plantas, exponindolos a enfermedades y poblaciones grandes de plagas como los nematodos. El uso de bacterias cido lcticas reducen las poblaciones de nematodos y controla la propagacin y dispersin de Fusarium, y gracias a ello induce un mejor ambiente para el crecimiento de los cultivos (Sharifukkin, 1993).

Levaduras: degradan protenas complejas y carbohidratos, produciendo

sustancias bioactivas como vitaminas, hormonas, enzimas entre otros metabolitos que pueden estimular el crecimiento y actividad de otras especies as, como de plantas superiores. Bacterias Fotosintticas: Las bacterias fototrpicas son un grupo de

microorganismos independientes y autosuficientes. Estas bacterias sintetizan sustancias tiles de secreciones de races, materia orgnica y/o gases dainos como el cido sulfhdrico (H2S) con el uso de luz solar y calor del suelo como fuentes de energa. Estas sustancias tiles son aminocidos, cidos nuclicos,

sustancias bioactivas y azcares, los cuales promueven el crecimiento y desarrollo de la planta. Los metabolitos de estos microorganismos son absorbidos directamente por las plantas y actan como sustrato para el incremento poblacional de

microorganismos benficos. Por ejemplo, en la rizsfera las micorrizas vesicular arbuscular (VA) se incrementan gracias a la disponibilidad de compuestos nitrogenados

(aminocidos) que secretados por las bacterias fototrpicas. Las micorrizas VA en respuesta incrementa la solubilidad de fosfatos en el suelo y, por ello, otorgan fsforo que no era disponible a las plantas. Las micorrizas VA tambin pueden coexistir con Azobacter y Rhizobium, incrementando la capacidad de las plantas para fijar nitrgeno de la atmsfera. Actinomicetos: Ellos producen metabolitos como antibiticos con efectos

biostticos y biocidas considerndose antagonistas de algunas bacterias y hongos patgenos de las plantas. Benefician el crecimiento y actividad del azotobacter y de las micorrizas. (Franco, 2008) Usos generales y aplicacin Tratamiento pre-siembra en los suelos. Aplicaciones foliares. Inoculante para semillas y trasplantes. Inoculante para cultivos de vivero y plantas de maceta. Inoculante para hortalizas, frutales, vegetales, flores, forrajes, cereales y

cultivos inundados como el arroz. Inoculante para hacer varios tipos de abonos. Inoculante parta renovar aguas residuales y aguas de superficie

contaminada (estanques)

1. Aplicaciones actuales de los Microorganismos eficientes Agricultura

La tecnologa microorganismos benficos est siendo utilizada para reemplazar agroqumicos y fertilizantes sintticos en varios cultivos, los microorganismos benficos para la agricultura se enfoca para el mejoramiento de la calidad del suelo construyendo una microbiota balanceada con la mayora de especies de microorganismos benficos. A travs de esto, es posible transformar cualquier enfermedad suelo inductor de enfermedades en un suelo supresor de enfermedades. Cuando las plantas tienen un mejor ambiente para su crecimiento y desarrollo, los niveles de produccin se incrementan y aumentan la resistencia a enfermedades. Sin contar con la calidad de los productos que provienen de fincas donde los microorganismos benficos es utilizado son de mejor apariencia y

sabor y tienen una vida de anaquel ms larga (Okinawa,1998).

Germinacin y formacin de sistema radicular

La utilizacin de microorganismos benficos en la propagacin de plantas, ya sea por semilla o por estacas, tienen como objetivo generar una barrera protectora con microorganismos benficos para que el momento de entrar en contacto con el suelo, o sustrato, se reduzca considerablemente el efecto nocivo que pueden provocar algunos de los microorganismos patgenos encontrados en el medio. Adems con el empleo de microorganismos eficientes se busca promover la germinacin rpida de la semilla por el efecto de algunos metabolitos como hormonas, aminocidos y sustancias antioxidantes.

Mantenimiento de cultivos La utilizacin de microorganismos benficos en el mantenimiento de cultivos, tienen como objetivo establecer los microorganismos en el rea de la rizsfera favoreciendo la: Solubilizacin de nutrientes. Generacin de sustancias bioactivas.

Proteccin de los cultivos frente al desarrollo de las enfermedades del suelo. Promover el desarrollo el crecimiento de las plantas y proteger el follaje contra patgenos.

Actividad pecuaria Los microorganismos benficos son una gran herramienta para la produccin

animal especialmente porque estos microorganismos pueden tener efecto probitico y sanitizador. La tecnologa microorganismos eficientes se emplean directamente en el agua para beber, alimentacin y aplicacin en las instalaciones.

Avicultura La aplicacin de los microorganismos benficos para la produccin avcola se orienta bsicamente a la reducir los malos olores, mejorar la actividad sanitaria de las aves.

Acuacultivo Los microorganismos benficos tienen un efecto positivo por servir como iniciadores en procesos a escala industrial de acuicultivos especialmente por que disminuyen el consumo proteico de los animales en produccin.

Objetivo Aislar e identificar microorganismos eficientes de diferentes sustratos orgnicos.

Metodologa El proceso se inicia 15 das antes de la realizacin del laboratorio mediante el entierro de material orgnico (Celulosa y almidn) en un tarro plstico tapado con un pedazo de nylon y bien amarrado. Para esto se realiza un hueco en la tierra de 50cm aproximadamente se mete el tarro y se deja durante 2 semanas, vigilando que permanezca hmedo.

Aislamiento de Microorganismos benficos De los tarros previamente enterrados se realizaran los aislamientos de diferentes gneros de microorganismos en medios selectivos, para tal fin se emplear el mtodo de las diluciones: Cada grupo dispondr de su muestra y realizar diluciones sucesivas de la muestra hasta 10-6 teniendo en cuenta que la dilucin 10-1 se realiza pesando 10 gramos de la muestra original as: Marcar con 10-1 el frasco tapa rosca que contiene 90mL de agua, pesar 10 de gramos del arroz; mezclarlos en los 90 mL de agua; homogeneizndolo suavemente durante 1 minuto. Se tomar 1mL de la mezcla y se llevar a un tubo de ensayo con 9mL de agua y posteriormente se realizar la misma tcnica hasta obtener diluciones de 10-6 Una vez se tengan la 6 diluciones se proceder a inocular los medios de cultivo para los aislamientos de los microorganismos eficientes. Los medios de cultivo se inocularan por el Mtodo de siembra en Superficie tomando 0.2 ml. de cada una de las diluciones. Para Hongos y Levaduras horas. Nota : Con las diluciones 1 y 2 se aslan las colonias de hongos y 4 y 5 levaduras Tomar de a 0.1mL de la diluciones 1, 2, 4 y 5. Adicionar sobre la superficie del agar OGY y en CMC (Carboxi metil

celulosa) Tomar la esptula de vidrio mojarla con alcohol al 96% Flamearla con la llama del mechero Enfriarla en la tapa de la caja de petri Esparcir suavemente la muestra en la superficie del medio de cultivo, hasta

que quede seca. Envolver en papel kraft las cajas de petri que contienen las diluciones 1 y 2 Incubar a temperatura ambiente durante 8 das Incubar las cajas de petri que contiene las diluciones 4 y 5 a 37C/24-48

Actinomycetos Tomar de a 0.1mL de la diluciones 3 y 4 Adicionar sobre la superficie del agar ZSAPECK

Toma la esptula de vidrio mojarla con alcohol al 96% Flamearla con la llama del mechero y se enfriaen la tapa de la caja de petri Esparcir suavemente la muestra en la superficie del medio de cultivo, hasta

que quede seca. Incubar las cajas de petri a 30C/.

Bacilos esporulados Para realiza esta metodologa se tendrn en cuenta especialmente los sustratos de almidn enterrados. Se realizaran dos diluciones solo 10 1 y 10 2 Tomar el frasco tapa rosca con la dilucin 10 2 Calentar a 80C durante 10 minutos, con el fin de destruir las clulas

vegetativas y obtener bacterias esporuladas. Adicionar sobre la superficie del agar Mossel, Agar almidon y Agar protena Tomar la esptula de vidrio mojarla con alcohol al 96% Flamearla con la llama del mechero Enfriarla en la tapa de la caja de petri Esparcir suavemente la muestra en la superficie del medio de cultivo, hasta

que quede seca. Incubar las cajas de petri a37C/24 horas

Los microorganismos se purificarn en los mismos medios y posteriormente se realizar el diagnostico morfolgico de los microorganismos por coloracin de Gram y Esporo y en el caso de los hongos observacin de estructuras fngicas. Es importante adems guardar los aislados purificados en crioviales con aceite mineral estril y guardarse en congelacin.

Bibliografa 1. HIGA, T. Effective microorganisms and their role in kyusei nature farming and sustainable agriculture.1980 2. FUJISAWA, A. et al. Kyusei nature farming and the technology of effective microorganisms: guidelines for practical use. Editado por SANGAKKARA, R. 2a ed. Atami (JP) :INFRC, 1999. 44 p. 3. MARTINEZ, V.R. Biofertilizacion y produccin Agrcola sostenible. Retos y perspectives. XIII Congreso Cientifico de INCA. Programa y resmenes. La Habana. 2002 4. SHARIFUKKIN, H., ANUAR, A. y SHAHBUDDIN, M-. Effective

microorganisms and their role in kyusei nature farming and sustainable agriculture. In. (eds.). Saraburi (TH), Proceedings of the 2nd Conference on Effective Microorganisms (EM).November 1993. Atami (JP) : INFRC, 1994. p. 1 6. 5. OKINAWA (JP) : -. A preliminary study of the suppressing effect of microorganismos beneficos on methane microorganismos beneficos issions in paddy fields. Department of Agriculture University of Ryukyus, 1998. 7 p. 6. FRANCO-CORREA, M. 2008. Evaluacin de caracteres PGPR en actinomicetos e interacciones de estas rizobacterias con hongos formadores de micorrizas. Tesis Doctoral, Director: Dr. Jos Miguel Barea N.

Departamento de Fisiologa Vegetal. Facultad de Ciencias. Universidad de Granada. pp. 266