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RuBisCO es la forma abreviada con que normalmente se designa a la enzima cuyo nombre completo es ribulosa-1,5-bisfosfato carboxilasa oxigenasa (EC 4.1.1.39). Esta enzima tiene un doble comportamiento que justifica su nombre, catalizando dos procesos opuestos. Primero la fijacin del CO2 a una forma orgnica, lo que justifica su clasificacin como carboxilasa. Segundo, la fotorrespiracin, en la que acta como oxigenasa del mismo sustrato. La RuBisCO es la protena-enzima ms abundante en la biosfera.

Las histonas son de dos tipos: H1 ( H5) y las histonas nucleosmicas. Las histonas nucleosmicas son mas pequeas ( 102 a 135 aminocidos) y forman los nucleosomas al enrollar ADN sobre un grupo de ellas. Las histonas nucleosmicas son la H2A, H2B, H3 y H4 y estn muy conservadas a lo largo de las diferentes especies.eucariotas. En el ncleo de la clula hay un gran nmero de ellas (alrededor de 60 millones de cada tipo). Las histonas pueden ser modificadas tras la traduccin lo que les cambia sus propiedades de unin al ADN y a protenas nucleares. Las histonas H3 y H4 tienen largas colas N-terminales hacia el exterior del nucleosoma que son susceptibles de ser modificadas covalentemente. Las modificaciones que pueden sufrir las histonas son: acetilacin, metilacin, fosforilacin y mono-ubicuitinacin y sumoilacin. Estas modificaciones pueden ser heredadas, influyen en la expresin gnica, cambian la arquitectura local de la cromatina y podran tambin reclutar otras protenas que reconozcan modificaciones especficas de las histonas segn la hiptesis llamada el `cdigo de las histonas`. Existe una correlacin entre la acetilacin de histonas y aumento de transcripcin que parece debido a que tras acetilarse la histona se une menos al ADN. Por otra parte parece haber activadores de la transcripcin que se unen especficamente a acetil-lisina mediante un mdulo llamado `Bromo`. La metilacin de histonas puede tanto activar como reprimir la transcripcin dependiendo de qu residuos de lisina en qu histonas son metilados. Estos residuos de metil-lisina parece que reclutan protenas que contienen un dominio de unin a ellas llamado `Cromo`. La acetilacin de las histonas regula la expresin de genes relacionados con la inflamacin y tambin parece tener un papel en diversas funciones tales como reparacin de ADN y proliferacin celular, por lo que se plantea usar inhibidores de la histona deacetilasa como nuevos agentes antiinflamatorios. La deacetilasa de histonas acta como represor de la transcripcin a travs de interacciones con otras protenas lo que lleva a remodelacin de la cromatina. Hoy da parece claro que determinados patrones de modificacin de histones conducen a determinadas patologas entre las que podran encontrarse, adems de patologas tumorales, patologas inflamatorias de localizacin broncopulmonar como el asma. La huntingtina es una protena mutada que contiene una zona de poliglutamina aumentada y es responsable de la enfermedad de Huntington. Esta protena mutada altera la actividad de la acetiltransferasa de histona lo que podra ser el mecanismo por el que altera la transcripcin gnica, fenmeno clave en la patogenia de la enfermedad. En los seres humanos hay cinco tipos principales: la histona H1 y las histonas H2A, H2B, H3 y H4. Estas ltimas se denominan tambin histonas nucleosomales y forman un octmero con dos histonas de cada; alrededor de este ncleo se enrolla dos veces un hilo de ADN. Este complejo ADN-histona recibe el nombre de nucleosoma y constituye el componente primario del cromosoma.2

El ADN gira unos 147 pares de bases alrededor del ncleo de la histona y a continuacin se desplaza unos 20-70 bp en un giro hacia la izquierda hasta alcanzar el siguiente nucleosoma. La pieza intermedia, tambin denominada ADN de conexin est desnuda, es decir, no est equipada con histonas. La histonas H1 se coloca como pieza de cierre en cada nucleosoma y al mismo tiempo toma contacto con las agrupaciones vecinas. De esto modo, las protenas H1 van grapando los nucleosomas para formar un hilo denso: la fibra de cromatina.

Tipos de ARN interferente Los ARN interferentes son molculas pequeas (de 20 a 25 nuclotidos) que se generan por fragmentacin de precursores ms largos. Se pueden clasificar en tres grandes grupos de moleculas:2 Mecanismo de RNAi / ribointerferencia mediado porsiRNA. El acrnimo siRNA proviene del ingls small interfering RNA: en espaol, ARN interferente pequeo. Son molculas de ARN bicatenario perfectamente complementarias de aproximadamente 20 o 21 nucletidos (nt) con 2 nucletidos desemparejados en cada extremo 3'. Cada hebra de ARN tiene un grupo fosfato 5' y un grupo hidroxilo (-OH) 3'. Esta estructura proviene del procesamiento llevado a cabo por Dicer, una enzima que corta molculas largas de ARN bicatenario (dsRNA, double stranded RNA) en varios siRNA.3 Una de las hebras del siRNA (la hebra 'antisentido') se ensambla en un complejo proteico denominado RISC (RNA-induced silencing complex), que utiliza la hebra de siRNA como gua para identificar el ARN mensajero complementario. El complejo RISC cataliza el corte del ARNm complementario en dos mitades, que son degradadas por la maquinaria celular, bloqueando as la expresin del gen. Los siRNA pueden ser tambin introducidos de forma exgena en las clulas utilizando mtodos de transfeccin basndose en la secuencia complementaria de un gen en particular, con la finalidad de reducir significativamente su expresin. Artculo principal: MicroARN. Los microARN (en ingls, micro-RNA o miRNA) son pequeos ARN interferentes que se generan a partir de precursores especficos codificados en el genoma, que al transcribirse se pliegan en horquillas (hairpins) intramoleculares que contienen segmentos de complementariedad imperfecta. El procesamiento de los precursores ocurre generalmente en dos etapas, catalizado por dos enzimas, Drosha en el ncleo y Dicer en el citoplasma. Una de las hebras del miRNA (la hebra 'antisentido'), como ocurre con los siRNA, se incorpora a un complejo similar al RISC. Dependiendo del grado de complementariedad del miRNA con el ARNm, los miRNA pueden bien inhibir la traduccin del ARNm o bien inducir su degradacin. Sin embargo, a diferencia con la va de los siRNA, la degradacin de ARNm mediada por miRNA se inicia con la eliminacin enzimtica de la cola de poli(A) del ARNm. Artculo principal: ARNs asociados a Piwi. (Piwi-interacting RNAs, ARN asociados a Piwi4 ): se generan a partir de precursores largos monocatenarios, en un proceso que es independiente de Drosha y Dicer. Estos ARN pequeos

se asocian con una subfamilia de las protenas 'Argonauta' denominada protenas Piwi. Se han identificado decenas de miles de piRNA, pero su funcin es desconocida (2008). Sin embargo, se sabe que conjuntamente con las protenas Piwi, son necesarios para el desarrollo de las clulas de la lnea germinal.

Los plsmidos son molculas de ADN extracromosmico circular o lineal que se replican y transcriben independientes del ADNcromosmico. Estn presentes normalmente en bacterias, y en algunas ocasiones en organismos eucariotas como las levaduras. Su tamao vara desde 1 a 250 kb. El nmero de plsmidos puede variar, dependiendo de su tipo, desde una sola copia hasta algunos cientos por clula. El trmino plsmido fue presentado por primera vez por el bilogo molecular norteamericano Joshua Lederberg en 1952.1 Las molculas de ADN plasmdico, adoptan una conformacin tipo doble hlice al igual que el ADN de los cromosomas, aunque, por definicin, se encuentran fuera de los mismos. Se han encontrado plsmidos en casi todas las bacterias. A diferencia del ADN cromosomal, los plsmidos no tienen protenas asociadas. En general, no contienen informacin esencial, sino que confieren ventajas al hospedador en condiciones de crecimiento determinadas. El ejemplo ms comn es el de los plsmidos que contienen genes de resistencia a un determinado antibitico, de manera que el plsmido nicamente supondr una ventaja en presencia de ese antibitico. Hay algunos plsmidos integrativos, es decir, que tienen la capacidad de insertarse en el cromosoma bacteriano. Estos rompen momentneamente el cromosoma y se sitan en su interior, con lo cual, automticamente la maquinaria celular tambin reproduce el plsmido. Cuando ese plsmido se ha insertado se les da el nombre de episoma. Los plsmidos se utilizan en ingeniera gentica por su capacidad de reproducirse de manera independiente del ADN cromosomal as como tambin porque es relativamente fcil manipularlos e insertar nuevas secuencias genticas. Los plsmidos usados en Ingeniera Gentica suelen contener uno o dos genes que les confieren resistencia a antibiticos y permiten seleccionar clones recombinantes. Hay otros mtodos de seleccin adems de la resistencia a antibiticos, como los basados en fluorescencia o en protenas que destruyen las clulas sin uso de antibiticos. Estos nuevos mtodos de seleccin de plsmidos son de uso frecuente en agrobiotecnologa, debido a la fuerte crtica de grupos ecologistas contra la posibilidad de presencia de antibiticos en los organismos modificados genticamente.

Resistencia a los antibiticos Los plsmidos a menudo contienen genes o paquetes de genes que le confieren una ventaja selectiva lo cual les da la habilidad de hacer a la bacteria, resistente a los antibiticos.

Cada plsmido contiene al menos una secuencia de ADN que sirve como un origen de replicacin u ORI (un punto inicial para la replicacin del ADN), lo cual habilita al ADN para ser duplicado independientemente del ADN cromosomal. Los plsmidos de la mayora de las bacterias son circulares, pero tambin se conocen algunos lineales, los cuales reensamblan superficialmente los cromosomas de la mayora de eucariotes. [editar]Epsomas Un epsoma es un plsmido que puede integrarse por s mismo al ADN cromosomal del organismo husped. Por esta razn, puede mantenerse en contacto por un largo tiempo, ser duplicado en cada divisin celular del husped y volverse parte bsica de su mapa gentico. Este trmino no se usa ms en plsmidos, debido a que ahora est claro que una regin homologa con elcromosoma elabora un plsmido dentro de un epsoma. Los plsmidos usados en ingeniera gentica son llamados vectores. Estos son usados para transferir genes desde un organismo a otro y tpicamente contienen un marcador gentico confiriendo un fenotipo el cual puede ser seleccionado a favor o en contra. La mayora tambin contienen un polivinculador o sitio de clonado mltiple (MCS), el cual es una pequea regin que contiene los sitios de restriccin ms comnmente usados, permitiendo una fcil insercin de fragmentos de ADN en ese lugar. [editar]Tipos Una forma de agrupar plsmidos es por su habilidad de transferirse a otra bacteria. Los plsmidos conjugativos contienen tra-genes, los cuales ejecutan complejos procesos de conjugacin, como la transferencia sexual de plsmidos a otra bacteria. Los plsmidos noconjugativos, son incapaces de iniciar una conjugacin, de all que ellos pueden transferirse nicamente con la asistencia de los plsmidos conjugativos y lo hacen por accidente. Una clase intermedia de plsmidos son los movilizables los cuales llevan solo un subtipo de genes requeridos para la transferencia. Ellos pueden parasitar un plsmido conjugativo, transfirindose a una alta frecuencia solo en su presencia. Es posible para plsmidos de diferentes tipos el coexistir en una celular simple. Siete tipos diferentes de plsmidos han sido encontrados en la E.Coli. Pero normalmente plsmidos relacionados son incompatibles, en el sentido de que solo uno de ellos sobrevive en la lnea celular, debido a la regulacin de las funciones vitales de los plsmidos. Por lo tanto, los plsmidos pueden ser diferenciados de acuerdo a grupos de compatibilidad. Otra forma de clasificar plsmidos es por funcin. Hay 5 clases principales:

Plsmidos de fertilidad: los cuales contienen tra-genes, son capaces de conjugarse. Plsmidos de resistencia: los cuales contienen genes que pueden constituir resistencia contra antibiticos o venenos. Histricamente conocidos como Factores R, antes de que se entendiera la naturaleza de los plsmidos. Col-plsmidos: los cuales contienen genes que codifican (determinan la produccin de) colinas y protenas que pueden matar a otra bacteria.

Plsmidos degradativos: los cuales habilitan la digestin de sustancias inusuales como tolueno o cido saliclico. Plsmidos virulentos: los cuales convierten la bacteria en un patgeno.

Los plsmidos pueden pertenecer a ms de uno de estos grupos funcionales. Los plsmidos solo pueden coexistir como una o ms copias en cada bacteria, debido a la divisin celular pueden perderse en una de las bacterias segregadas. Algunos plsmidos incluyen un sistema de adicin o Sistema de Muerte Postsegregacional (PSK: Postsegregational Killing System). Ellos producen en conjunto un veneno de larga vida y un antdoto de vida corta. Las clulas hija que retienen una copia del plsmido sobreviven, mientras que una clula hija que falla al integrar el plsmido muere o sufre una reducida tasa de crecimiento debido al veneno que obtuvo de la clula padre. Este es un ejemplo de plsmidos como el ADN replicante. [editar]Aplicaciones Los plsmidos sirven como una importante herramienta en laboratorios de gentica e ingeniera bioqumica, donde son comnmente usados para multiplicar (hacer muchas copias de) o como genes particulares expresos. Muchos plsmidos estn disponibles comercialmente para dichos usos. El gen a ser replicado se inserta en copias de un plsmido el cual contiene genes que hacen clulas resistentes a un antibitico en particular. En el paso siguiente el plsmido es insertado en la bacteria por medio de un proceso llamado transformacin. Luego, la bacteria es expuesta a un antibitico particular. Solo la bacteria que toma copias del plsmido sobrevive al antibitico debido a que el plsmido lo hace resistente. En particular, los genes protectores son expresados (usados para hacer protena) y la protena expresada evita la accin del antibitico. De esta forma, los antibiticos actan como un filtro que seleccionan nicamente la bacteria modificada. Ahora, estas bacterias pueden ser cultivadas en largas cantidades, cosechadas y el plsmido de inters puede ser aislado. Otro uso importante de los plsmidos es fabricar grandes cantidades de protenas.. En este se deja crecer la bacteria que contiene el plsmido que encierra al gen de inters. Solo como la bacteria produce la protena que le confiere si resistencia a los antibiticos, este tambin puede ser usado para producir protenas en grandes cantidades desde el gen insertado. Esta es una forma barata y fcil de producir genes o protenas que este codifica de forma masiva, como por ejemplo insulina, o inclusive antibiticos. [editar]Extraccin del ADN plasmdico En el maxiprep, se cultivan volmenes mucho ms grandes de bacterias en suspensin. Esencialmente este es un escalado de la preparacin mini-prep, el cual es seguido por una purificacin adicional. Esto resulta en una cantidad relativamente grande (0,5 -1 mg) de ADN plsmido muy puro.

En los ltimos tiempos muchos kits comerciales han sido creados para realizar la extraccin plasmdica a varias escalas, pureza y niveles de automatizacin.