APLICACIN DE LOS MTODOS FSICOS DE ANLISIS PRIMERA PARTE: PUNTO DE FUSIN, POLARIMETRA Y PRDIDA POR SECADO

OBJETIVOS General: Adquirir conocimiento sobre los fundamentos de los mtodos fsicos, los instrumentos y equipos utilizados en estos y caractersticas de las materias primas a analizar Especficos: Determinar el punto de fusin de una muestra de Maltosa y realizar la correccin mediante la elaboracin de una curva de calibracin Cuantificar el porcentaje de humedad y componentes voltiles del Acido glutmico a travs del mtodo de perdida por secado. Medir la rotacin especifica de una solucin de mentol y otra de lactosa, utilizando un polarmetro de Lippich DIAGRAMA DE FLUJO Punto de fusin

Fijar lista de patrones para la realizacin de la curva de calibracin.

Interpolar el valor de la muestra.

Organizar la muestra y los patrones del de menor punto de fusin al de mayor.

Realizar las siguientes tomas y con los datos elaborar la curva de calibracin.

Tomar la sustancia a determinar el punto de fusin en un capilar debidamente sellado

Anotar la temperatura que muestra el termmetro cuando empieza a fundir la sustancia.

Polarimetra

Preparar las respectivas soluciones de Lactosa y Fructosa segn la USP

Comparar con el dato teorico el valor obtenido experimentalmente

Colocar la muestra de Mentol en el polarimetro.

Realizar los clculos correspondientes para determinar la rotacin especfica.

Determinar el angulo de rotacin.

Repertir el procedimiento con la solucin de Lactosa.

Perdida por secado

En un desecador preparar el recipiente en cual se va a adicionar la muestra.

Colocar en el estufa 1/2 hora, repetir el procedimiento y por diferencia de masa determinar la perdida

Pesar 1 gramos aprox. de Acido glutmico

A la media hora determinar la masa del material seco

Colocarla en la estufa para el secado durante 1 horas

Al pasar este tiempo dejar enfriar en el desecador para evitar que tome de nuevo agua.

DESCRIPCIN DE LAS MUESTRAS Punto de fusin Caracteristicas Maltosa Estado fsico: slido Color: blanco Olor: inodoro Punto de fusin:160-165

Estructura

Polarimetra Mentol Estado fsico: cristales hexagonales Color: incoloro Intervalo de fusin del l-mentol: 41 -44 Rotacin especfica entre -45 y -51 para l-mentol; entre -2 y +2 para dl-mentol Solucin de prueba: 100 mg por mL, en alcohol.

Lactosa Rotacin especfica: disolver 10 g calentando en 80 mL de agua a 50. Dejar que se enfre y agregar 0,2 mL de hidrxido de amonio 6N. dejar en reposo durante 30 minutos y diluir con agua a 100 mL: la rotacin especifica, calculada con respecto a la sustancia anhidra, determinada a 20, esta entre +54,4 y 55,9. Perdida por secado Acido Glutmico Solubilidad en agua 11.1 g/l (25 C) Punto de fusin 160 C Masa molar 147.13 g/mol Densidad 1.54 g/cm3 (20 C) Bulk density 460 kg/m3 Valor de pH 3.0 - 3.5 (8.6 g/l, H2O, 25 C)

RESULTADOS Punto de fusin COMPUESTO Metilparabeno Eritromicina cido saliclico Acetaminofn Sulfadimetoxina Maltosa Pto fusin teorico(c) 125-129 135-140 158-161 169-170 201-203 160-165 Pto de fusin experimental (c) 110-112 No fundi 157-160 146-150 193-194 158-160

P1 P2 P3 P4 P5 Muestra:

Tabla n1 datos experimentales y tericos de los puntos de fusin Polarimetra Longitud de Celda: 1 decmetro Compuesto /solvente Lactosa Mentol Peso (g) 2.4856 2.5020 Dilucin 25 ml 25 ml Temperatura inicial(C) 21,5 20.0 Temperatura final(C) 25,0 25.0 Angulo rotacin +5.20 +5.33 -3.60 -3.92 de

Tabla n2 datos experimentales del ngulo de rotacin. Mentol # obsevacin Mauricio Daniela John 1 2 3 4 5 Promedio Lactosa # obsevacin Kelly 1 2 3 4 5 Promedio 5,15 5,30 5,50 5,40 5,30 5,33 Lucas 4,50 4,50 4,60 4,20 4,20 4,40 Mauricio Daniela John 5,50 5,50 5,10 5,60 5,40 5,42 5,10 5,35 5,15 5,25 5,35 524 5,1 4,95 5,5 5,25 5,4 5,24 David 5,25 5,50 5,35 4,65 5,30 5,17 Angie 5,00 5,10 5,00 5,00 5,00 5,02 Natalia Fabian 5,40 5,45 5,30 5,50 5,30 5,39 5,40 5,40 5,30 5,40 5,25 5,35 -3,80 -3,20 -4,60 -3,60 -4,20 -3,88 -4,10 -4,25 -4,05 -3,95 -4,10 -4.09 8,00 -6,35 -6,50 -6,95 -6,50 -6,86 David - 3,85 -3,20 -3,65 -3,85 -2,30 -3,37 Angie Natalia Fabian Kelly -4,00 -3,50 -4,00 -4,00 -2,50 -3,60 -3,85 -3,90 -3,85 -3,95 -3,90 -3,89 -4,30 -4,00 -3,95 -4,10 -4,00 -4,07 -4,15 -3,90 -4,10 -3,85 -3,60 -3,92 Lucas -3,95 -4,00 -4,00 -3,85 -3,85 -3,93

Tabla n3 datos experimentales del ngulo de rotacin del grupo con el orden de observacin Perdida por secado Muestra: Acido Glutmico Peso capsula seca y vaca Peso capsula + muestra (tiempo cero) Peso capsula + muestra (1 hora y 106C) Peso capsula + muestra (1,5 horas y 106c) Tabla n4 pesos a diferentes tiempos del cido Glutmico 0.6946 g 1.7541 g 1.7497 g 1.7496 g

CLCULOS: Punto de fusin Grafica: Curva de calibracin (mirar anexos) Correccin del punto de fusin: Ecuacin de la recta Y = 0,264X + 94,02 R2= 0,1563 Correccin (Maltosa) Y = 0,264 (159) + 94,02 Y = 136C Polarimetra Longitud de Celda: 1 decmetro Temperatura (C): 23 Clculo de la rotacin especifica de las muestras: Ecuacin para rotacin especifica. Donde: a= ngulo de rotacin observado c= concentracin en g/100mL l= longitud de la celda en decmetros Para Mentol Peso: 2.5020g = 10.008 g/100ml Para Lactosa Peso: 2.4856g = 9.9424 g/100ml

Compuesto Rotacin especifica Rotacin especifica /solvente terica []589nm23c experimental []589nm20c Mentol -41 -51 -38.76 Lactosa +54.4 +55.9 +53.60 Tabla n5 Comparacin rotacin especfica experimental con la terica. Perdida por secado Peso capsula seca y vaca Peso capsula + muestra (tiempo cero) Peso capsula + muestra (2 hora y 108C) Peso capsula + muestra (2,5 horas y 108c) Masa inicial (mi)=1.7541- 0.6946 =1.0595 Masa final (mf) 1 hora= 1.7497-0.6946 =1.0551 Masa final (mf) 1 hora y media=1.7496-0.6946 = 1.0550 Porcentaje de prdida tras 2 horas de secado 0.6946 g 1.7541 g 1.7497 g 1.7496 g

Rotacin especifica experimental []589nm25c -39.26 +53.80

Porcentaje de prdida tras 2 horas y media de secado

Determinacin Peso Constante Farmacopea: 0.5 mg * 1 g de muestra 1g 1.0595 g 0.5mg X

X=0.5297 0.53 mg

Masa final a 1 hora = 1.0551 g Masa final a 30 minutos despus = 1.0550 g 1.0551-1.0550 = 1x10^-4 g = 0.1 g

ANLISIS DE RESULTADOS Punto de fusin Para determinar el punto de fusin de la muestra se utiliz el fusimetro y como cualquier equipo para anlisis debe ser calibrado, esto garantiza que se tiene en cuenta las diferentes condiciones del lugar donde se esta trabajando, un ejemplo es la presin atmosfrica, pues la mayora de los datos tericos se reportan a nivel del mar (760 mm Hg) y en Bogot se trabaja a 560 mm Hg. Para que la correccin sea

confiable la curva de calibracin debe cumplir unos criterios: entre los mas destacados se encuentran: buscar sustancias que tengan puntos de fusin por encima y por debajo de nuestra muestra (2C), entre mas puntos tenga la curva de calibracin se obtendr ms exactitud en la correccin, preferiblemente que tengan rangos de fusin reportados no mayores a 1C y lo mas importante que los compuesto elegidos sean patrones, es decir, que tenga un alto grado de pureza y se certifique su estabilidad. En la prctica no fue posible realizar una curva de calibracin que cumplieran estos parmetros, por lo tanto la correccin no arroja un dato confiable y es imposible determinar si la diferencia del punto de fusin de la sustancia problema se debe a la des calibracin del equipo o a la presencia de impurezas. El dato reportado en la literatura de punto de fusin de para la Maltosa es de 169-165 C y el valor experimental obtenido a partir de la interpolacin fue de 136 C. Esta diferencia entre los puntos de fusin experimental y terico, es consecuencia de no utilizar los patrones adecuados para la elaboracin de la curva de calibracin Polarimetra Un compuesto puede presentar 2 tipos de isomera espacial (estereoisomera): uno por ruptura de enlace que a la vez se divide en ptica (Enantimeros y diastereoismeros) y geomtrica ( cis-trans Z-E) y una en que no hay ruptura de enlace: conformacional. Por medio del polarmetro nosotros solo podemos determinar los ismeros pticos que son los nicos que tienen la capacidad de rotar la luz polarizada (o que va en una sola direccin), en ambos casos tanto del metol como la lactosa obtuvimos un ngulo de rotacin diferente de 0, lo que significa que no se encuentran como mezcla racmica. En el caso particular del mentol los resultados fueron negativos lo que indica que predomina la forma levo (-) y en el caso de la lactosa predomina la forma dextro (+). La lactosa al tener un hidroxilo libre en su carbono anomrico posee propiedades reductoras y puede presentar el fenmeno de mutarrotacin, es decir, que cuando ocurre la apertura del anillo puede ciclarse de nuevo pasando por la forma y al disolverse en agua, el proceso generalmente es lento a pH neutro, por lo tanto es necesario introducir un catalizador como el hidrxido de amonio 6N, por lo tanto, a los 30 minutos se alcanzar el equilibrio entre las dos formas y se tiene un valor constante de rotacin especfica. Los resultados obtenidos fueron variados, debido a que el equipo no se encontraba en perfectas condiciones, pues la fuente de luz no era la lmpara de sodio, que le brinda al polarmetro una fuente monocromtica (lnea D del sodio), en vez de eso se trabaj con una fuente de luz policromtica que adicionaba calor a la muestra cambiando la temperatura de la medicin, esperbamos encontrar una tendencia con el aumento de la temperatura, pero como lo muestra la tabla N3 los datos fueron oscilantes, esto se explica por la subjetividad de la observacin y es por dicha subjetividad que los protocolos analticos recomiendan 5 mediciones para una misma muestra. Perdida por secado En los compuestos slidos podemos encontrar dos formas de agua: agua esencial y no esencial, la primera se encuentra formando parte integral de la estructura qumica del compuesto (como hidratos o agua de constitucin), sta es muy difcil de eliminar mediante el mtodo indirecto de prdida por secado, por lo tanto, podemos decir que en la muestra de cido glutmico se elimin principalmente el agua no esencial y ms especficamente el agua adsorbida en la superficie del slido, que al efectuar el calentamiento a 106C se evapor (desorcin). En nuestro caso la muestra perdi un 0,43% del peso inicial cuando se alcanz un peso constante, lo que coincide con los datos de la literatura, ya que segn la farmacopea europea el cido glutmico no debe perder ms del 0,5%, al determinarlo en 1g de sustancia y a una temperatura de 105C. El mtodo empleado tiene como ventaja la facilidad y los pocos requerimientos, sin embargo para sustancias con puntos de fusin y descomposicin inferiores a la temperatura de evaporacin del agua, o que contienen sustancias voltiles diferentes al agua (como aceites esenciales) no se recomienda utilizarlo ya que pueden haber prdidas de peso debidas a la descomposicin del compuesto, adicional a las impurezas; existen otros mtodos para determinar la cantidad de compuesto (mtodos gravimtricos) como el mtodo de precipitacin, pero requiere unas

caractersticas especiales de los precipitados (fcil de filtrar y lavar, solubilidad suficientemente baja para que no haya prdidas durante la filtracin y el lavado, no reaccione con compuestos atmosfricos y tenga composicin conocida despus de secarlo), igualmente, hay muy pocos reactivos que generen precipitados con dichas caractersticas; otro mtodo es el de volatilizacin por mtodo directo, en el que la sustancia voltil se recoge en desecantes slidos (sales higroscpicas), el peso de agua desprendida de la muestra es igual al aumento de peso del absorbente, es recomendable ste mtodo ya que es ms especfico y no est sujeto a la incertidumbre. En cuanto a la muestra de Acido Glutmico por las propiedades fisicoqumicas del compuesto esta tcnica para determinar humedad es adecuada para la muestra. CONCLUSIONES: Una curva de calibracin debe cumplir con unos criterios para que sea confiable la correccin de los datos, esto aplica para cualquier equipo. El manejo de la muestra (cantidad, velocidad de calentamiento) para la determinacin de punto de fusin es importante para obtener un valor experimental correcto Los equipos para anlisis deben cumplir con protocolos de mantenimiento, debido a que son las herramientas para la caracterizacin de una sustancia. La polarimetra es una tcnica que diferencia entre conformeros pticos cobrando importancia en la industria farmacutica donde la estereoisomera es uno de los grandes problemas. Existen varios mtodos para la determinacin de humedad de un compuesto, la seleccin de alguno de ellos depende netamente de la naturaleza de la muestra. El mtodo de prdida por secado no solo cuantifica perdida de agua sino tambin sustancias voltiles de la muestra. Ninguno de los mtodos fsicos es determinante por si solo, es necesario comprobar los resultados obtenidos con otras tcnicas.

BIBLIOGRAFA:

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