INSTRUCCIONES PARA COLECTAR MUESTRAS DE PLANTAS ENFERMAS CON FINES DE DIAGNSTICO Blgo. Juan Flores T.

Dado que generalmente el personal de la Clnica de Diagnosis no conoce el lugar ni las condiciones en que se desarrolla la enfermedades de los cultivos, el diagnstico y las medidas de control que se entreguen a los agricultores est basado a la muestra que traigan al laboratorio por lo que se hace necesario dar ciertas pautas para un buen muestreo y su traslado al laboratorio. Los especimenes o muestras de plantas enfermas con fines de diagnstico debern ser muestreadas de preferencia el mismo da en que se envan al laboratorio y asegurarse de que lleguen en condiciones adecuadas de tal forma que puedan ser bien utilizados en los anlisis respectivos. Los especimenes demasiado secos o en estado avanzado de pudricin no son apropiados porque contienen organismos secundarios lo cual dificulta el aislamiento del agente causal durante los anlisis respectivos y hasta a veces hace intil el esfuerzo realizado. Las siguientes recomendaciones lo ayudarn a colectar muestras que sean tiles tanto para el laboratorista como para el agricultor en su deseo de obtener una consulta provechosa. Las muestras a ser enviadas pueden ser muy variadas desde rboles y arbustos ornamentales o frutales, hortalizas, gramneas, csped, plantines, plantones, semillas, championes, etc. pudiendo ser de fundos, viveros, invernaderos, parques, jardines, huertos, etc. La forma de seleccionar y enviar la muestra depender del tipo de sntoma primario: para casos de marchitez es la planta completa; cuando se trata de sntomas localizados (mancha foliar, manchas en frutos, cancros en tallos , pudricin de flores etc.) se enva la parte afectada; de igual forma para sntomas ocasionadas por virus (deformaciones de los brotes con presencia de diferentes tonos de color verde). Si sus platines estn aparentemente sanos y desea cerciorarse de todas maneras de su buen estado sanitario antes del transplante a campo definitivo se enviar las plantitas completas o en su defecto hacer una consulta previa a nuestro laboratorio. Las siguientes recomendaciones le servirn de gua para su muestreo y envo. I. ELECCION DE LA MUESTRA

La poca de coleccin de las muestras ser cuando el cultivo se encuentre en crecimiento activo ya que el microorganismo tambin lo estar. Elija

especimenes de plantas que muestren diferentes estados de desarrollo de la enfermedad: sntomas iniciales, medianos, y avanzados todo lo cual constituir una sola muestra. No colectar plantas muertas o partes vegetales en descomposicin ni tampoco plantas que en las ltimas dos semanas hayan recibido aplicaciones de fungicidas ya que esto dificulta grandemente el aislamiento del patgeno Los especimenes debern mostrar los sntomas con la mayor claridad posible. Adjuntar muestra sana como testigo de comparacin. II. COLECCIN a) Plantas que muestran marchitez, amarillamiento, chupadera, enanismo, etc. Extraiga las plantas completas sin arrancar las races las cuales vendrn necesariamente con su rizsfera; no es aconsejable enviar plantas a raz desnuda ya que se irn deshidratando en el camino; en el mismo lugar de extraccin envolver la rizsfera con papel toalla o peridico ligeramente humedecido en agua (Fig. 1) y colocar la planta dentro de una bolsa plstica grande de polietileno (Fig. 2) y anudar con una cuerda por encima de la bola radicular, a nivel del cuello de la planta, quedando la parte superior de la planta libre para volver anudar por encima de la planta con la misma bolsa (en esta parte hacer agujeros en la bolsa para que transpiren las hojas). En esta forma de enviar la muestra asegura que el follaje y la ramas queden libres de contaminacin con el suelo de las rizsfera. Mantenerlas en un lugar fresco evitando que reciban la luz directa del sol. En caso de plantas muy grandes como arbustos o rboles haga de cada planta una muestra compuesta de dos kilogramos de 3 partes equidistantes conteniendo suelo con sus races. Tambin haga una mezcla compuesta del follaje con sntomas (ej. ramas con muerte regresiva); ambas muestras se colocaran en bolsas plsticas por separado. Las muestras de races con suelo se colectan en la lnea proyectada verticalmente del borde de la copa del rbol hacia el suelo. b) Manchas foliares Estos tipos de sntomas se refieren a lesiones necrticas que se sitan generalmente al centro de la lmina foliar. Las muestras slo consistirn de hojas y se colectarn en buena cantidad (20 aproximadamente)y sern envueltas en papel toalla ligeramente humedecido en agua colocndose en bolsas de plstico sin cerrar para no facilitar su pudricin.

c) Mosaico, clorosis y encrespamiento de hojas Estos sntomas se manifiestan en las hojas nuevas o brotes como alternancia de diferentes tonalidades de color verde hasta amarillamiento y puede incluir deformaciones los cuales pueden ser causados por virus. La muestra consiste
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de hojas o brotes foliares tiernos los ms frescos posibles y es necesario que lleguen ese mismo da al laboratorio para su anlisis virolgico. Debern tambin estar envueltas en papel toalla humedecido y traerse en bolsas de plstico sin cerrar. d) rganos carnosos Las pudriciones en frutos carnosos y hortalizas (tomates, fresas, melocotones, chirimoyas, etc.) Necesitan una atencin especial. Los especimenes deben mostrar slo sntomas iniciales. Envulvalas individualmente en papel toalla o peridico sin humedecer, y acondicinelos en una caja de tecnopor con aserrn o algn otro material que impida que las muestras se aplasten entre s. Nunca los introduzca en bolsas plsticas. Gurdelos en refrigeracin o en un lugar fresco hasta su envo, el cual deber demorar poco tiempo. e) Cancros y tumores Seleccionar cancros y tumores (agallas) en su estados jvenes y que no estn secos y extrigalos con una navaja de tal manera que contenga tejido sano tambin. Envolverlo en papel toalla humedecido y colocarlos dentro de una bolsa plstica sin cerrar. . f) Muestras de suelo Dividir el campo en Lotes en funcin de la uniformidad del terreno, edad del cultivo, tipo de suelo, pendiente, etc. y codifique cada lote. Cada uno no debera exceder las 3 hectreas En cada lote colecte una muestra compuesta de suelo de uno a dos kilos en una bolsa plstica extrayendo al azar 27 submuestras de hasta una profundidad de 30 cm y descartando los primeros 10 cm donde la presencia de microorganismos suele ser baja, mzclelas bien y redzcala a una muestra de 1 2 Kg. si fuera necesario (por cada lote ), la cual ser enviada en bolsa hermticamente cerrada. Para la coleccin del suelo puede seguir el patrn de la Fig. 3. Cada muestra estar colocada en doble bolsa de plstico y entre las dos bolsas se colocar una etiqueta con el cdigo del lote, el cultivo a sembrar y el cultivo anterior todo escrito con lpiz.

En trminos generales se puede afirmar que para muestreo con fines de anlisis fitopatolgicos de ser posible se enviar la planta completa y acondicionada para su envo en una bolsa plstica lo suficientemente grande para que quepa totalmente cuidando de que el suelo no est en contacto con la parte area. Otra forma es poner las races envuelta en una bolsa plstica y la parte area en otra bolsa (con agujeros) de tal manera que el suelo de las races no est en contacto con la parte area
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III.

EMPAQUE

Acondicionar la muestra embolsada dentro de una caja de tecnopor, madera o de cartn gruesa con gel refrigerante . En el interior deber contener adems un sobre manila con los siguientes datos: nombre del agricultor o ingeniero de campo, nmero de telfono, la procedencia y el historial del cultivo (ver seccin V). El sobre manila ser protegido con una envoltura plstica para evitar su deterioro por la humedad. La muestra de esta manera se mantendr refrigerada durante su transporte. Finalmente se debe sellar con cinta de embalaje y ser enviada a la siguiente direccin: Clnica de Diagnosis de Fitopatologa y Nematologa Universidad Nacional Agraria La Molina Av. La Molina S/N Aptdo 12- 056 Lima 12, Lima No olvidar que las muestras deber ser enviadas de tal manera que lleguen en das laborables, (lunes a viernes), para lo cual es conveniente enviarlas los primeros das de la semana. IV. TRANSPORTE

Es aconsejable que el mismo agricultor o ingeniero traiga la muestra. De no ser esto posible utilizar el servicio de mensajeras (couriers) o similares y luego comunicarse con el laboratorio para cerciorarse de que haya llegado adecuadamente la muestra. Tambin tomar precauciones para prevenir que durante el trnsito el embalaje conteniendo la muestra no vaya apiada con otros paquetes y se produzcan daos a las muestras, tampoco que en ningn momento le llegue la radiacin solar directa o est cerca al calor que se origina en el motor del vehculo V. HISTORIAL DEL CULTIVO

Esta informacin ser entregada por el responsable del cultivo. Lo siguiente es necesario tanto para un diagnstico eficiente como para recomendar medidas de control eficaces: Datos de aplicaciones de agroqumicos realizados (ingrediente activo, dosis, fechas de aplicacin), fertilizaciones, condiciones climticas, clase de material propagativo usado, intensidad de la enfermedad (incidencia, severidad) sntomas en campo, distribucin de las plantas enfermas, etc. Para cumplir con tal necesaria informacin pueden solicitar un formulario a nuestro email (clinica@lamolina.edu.pe).
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Fig. 1. Plantn de olivo enviada a Laboratorio para anlisis fitopatolgico. A la izquierda (A) se observa el sistema radicular completo con suelo (rizsfera) dentro de un saco de rafia y cerrado en la parte inferior del tallo con cinta de embalaje. A la derecha (B) se observa que al ser retirado el saco de rafia dicha planta muestra en su interior la rizsfera envuelta en papel peridico humedecido con agua.

B A

Fig. 2. Forma de acondicionar una planta con sntomas de marchitez. Al centro la planta extrada con su rizsfera. A la derecha la planta dentro de una bolsa plstica a la cual se anud con una cuerda a la altura del cuello de planta y tambin con otro nudo en el extremo superior. A la izquierda contenedor donde se empalar la planta conteniendo soporte y alambres para mantener inmvil la muestra.

Fin

Inicio
Fig.3. Patrn para muestreo de suelo. El tamao del lote ser de 3 Ha y se toma una muestra compuesta de un total de 27 puntos colectando el suelo hasta una profundidad de 30 cm (se elimina los primeros 10 cm)