ANLISIS MICROBIOLGICO DE MUESTRAS NATURALES (ROS, LAGUNAS, ESTANQUES, ESTUARIOS Y MAR) Universidad Popular del Cesar Programa Microbiologa

Laboratorio de Microbiologa Ambiental 1 Docente: Sandra Rodrguez Los ecosistemas acuticos se utilizan como reas de recreacin, as como fuentes de agua para el abastecimiento de agua potable. Los estudios sobre el metabolismo de los ecosistemas acuticos constituyen una de las herramientas ms importantes para su recuperacin. De esa forma, la reconstitucin de los ambientes, as como la de la fauna y flora original, es una de las tareas ms importantes de la limnologa moderna, la cual est aglutinando a especialistas de diferentes reas de estudio. Por medio de los proyectos multidiciplinares es posible la recuperacin de los ambientes acuticos degradados. Hay muchos hbitats donde, debido a las extremas condiciones fsicas o qumicas, no se encuentran organismos superiores, sin embargo, en ellos pueden existir microorganismos que en algunos casos, incluso crecen mejor all; todos estos organismos presentan diversas caractersticas (morfologa, tamao real, color, movimiento, etc.), que se estudian en el examen en fresco de una suspensin microbiana encontrando Bacterias, Hongos, Algas y Protozoos (Anexos). OBJETIVOS Observar microorganismos vivos y poder estudiar su estructura morfolgica, en las condiciones ms cercanas a su realidad. Demostrar la presencia de diversos tipos de microorganismos en ambientes acuticos. MATERIALES -Mechero de bunsen o alcohol -Asa de siembra -Portaobjetos -Cubreobjetos -Muestra (agua de charco, lagunas, ros, estanques, mar etc.) -Microscopio -Aceite de inmersin -Gotero o Pipetas Pasteur -Servilletas PROCEDIMIENTO 1. Tomar una gota de la muestra con el asa de siembra previamente flameada y depositarla en el portaobjetos.

2. Colocar el cubreobjeto para evitar burbujas, depositar el cubreobjetos sobre la gota: primero una arista y luego todo l. 3. Observar al microscopio el color desprendido por el foco, la muestra se ir secando progresivamente. Como consecuencia, los microorganismos se irn paralizando y, adems, pueden aparecer corrientes de lquido que dificultarn la observacin de la muestra. Cuando sucedan estos efectos, levantar el cubreobjetos y aadir ms lquido. Como alternativa, se puede aplicar parafina en los bordes del cubreobjetos. RESULTADOS Dibujar detalladamente los diferentes tipos morfolgicos, describir sus movimientos y clasificarlos taxonmicamente. Nota: Si se desea observar microorganismos eucariotas, no ser necesario utilizar el objetivo de inmersin. Por ello, el examen se puede hacer sobre un portaexcavado directamente (sin cubreobjetos) y el volumen de la muestra ser considerablemente mayor. PREGUNTAS a. Seale las ventajas y desventajas del examen en fresco. b. Por qu se cubre la muestra con un cubreobjetos? c. Cules son las diferencias morfolgicas y estructurales ms importantes que se pueden obtener entre los microorganismos procariotas y los eucariotas? d. Ud. decide investigar la muestra de las aguas del Ro guatapur y el Lago de Maracaibo y los canales de riego alimentados por estos, en las inmediaciones de la ciudad de Valledupar y Maracaibo; realizando los siguientes estudios: Aislamiento de los microorganismos que se encuentran en la muestra de agua en mayor concentracin (suponga que son microorganismos anaerobios facultativos, hetertrofos y nutricionalmente poco exigentes). b. Desea descartar la presencia de Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus en 500mL de una muestra que Ud. mismo tom. Para ello cuenta con los siguientes medio de cultivo: Agar TCBS (agar-tiosulfato-citrato-sales biliares-sacarosa): las elevadas concentraciones de tiosulfato, citrato y el medio fuertemente alcalino inhiben a las Enterobacterias. La bilis de buey inhibe a los Enterococos. Solamente algunas cepas de Proteus sacarosa-positivas pueden formar colonias amarillas semejantes a las que forman los vibrios. El indicador mixto Azul de Timol- Azul de Bromotimol presenta un viraje al amarillo por la formacin de cido, incluso en medio fuertemente alcalino. Explique claramente como procedera para descartar la presencia de Vibrio. Recuerde la morfologa tpica que presentan las bacterias pertenecientes al gnero Vibrio. d. Ud. Desea aislar y cultivar las microalgas especialmente las Cyanophytas y Bacillaryophyta con sus bacterias asociadas (Aparte); que tcnicas y medios utilizara para cumplir su objetivo para con estos microorganismos; teniendo en cuenta las condiciones optimas de cada grupo. e. En qu forma pueden transferirse los microorganismos de un lugar a otro? f. Qu importancia tiene la distribucin de los microorganismos en microbiologa?

ANEXOS MORFOLOGA CELULAR REPRESENTATIVA DE PROCARIOTAS

Thiocapsa roseopersicina

Desulforomonas acetoxidans

Rhodospirillum rubrum

Spirochaeta stenostrepa

Rhodomicrobium vannielii

Chloroflexus aurantiacus

MORFOLOGA DE ALGUNOS HONGOS: LEVADURAS Y MOHOS

ALGAS DEL PLANCTON Y OTRAS ALGAS DE AGUAS