RECUENTO DE LEUCOCITOS

RESUMEN
En la prctica se llev a cabo el conteo de leucocitos mediante el uso de la tcnica recuento diferencial de leucocitos, este anlisis tiene gran importancia en el campo mdico en la determinacin de algunas enfermedades como apendicitis.

INTRODUCCIN
Esta prueba est incluida en los exmenes generales de salud y ayudan a investigar una variedad de enfermedades. Un recuento elevado de leucocitos produce en infeccin, alergia, enfermedad sistmica, inflamacin, dao tisular, y la leucemia. Un bajo conteo de leucocitos puede ocurrir en algunas infecciones virales, inmunodeficiencia y fallo de mdula sea. El recuento de leucocitos ofrece pistas sobre ciertas enfermedades y ayuda a los mdicos a monitorear la recuperacin de un paciente. Conteos anormales que vuelven a la normalidad indican que la afeccin est mejorando, mientras que los valores que se vuelven ms anormales indican que la condicin est empeorando. El diferencial revelar qu tipo de leucocitos son los ms afectados. Por ejemplo, un recuento elevado con un aumento absoluto de linfocitos que tienen un aspecto atpico es ms a menudo causado por la mononucleosis infecciosa. El diferencial de leucocitos tambin identificar principios que pueden ser reactivos (por ejemplo, una respuesta a la infeccin aguda) o el resultado de una leucemia.

OBJETIVOS
Realizar el anlisis de recuento de leucocitos a una muestra de sangre de un estudiante del laboratorio. Conocer el mtodo de recuento mediante el uso de la cmara Neubauer.

MATERIALES
Pipeta para recuento de glbulos blancos Microscopio ptico

Cmara de recuento globular: Se emplea la cmara con cuadriculado perfeccionado de Neubauer. El rea del cuadriculado mide 9 mm2. El cuadro central se emplea para contar los hemates y las plaquetas, y los cuadros de los ngulos, que miden cada uno 1 mm2 para contar los leucocitos.

REACTIVOS
Se utiliza el diluyente de Turk que disuelve o lisa los eritrocitos para que no interfieran en el recuento de leucocitos. cido actico glacial (3%) Azul de metileno o violeta de genciana en solucin acuosa Agua destilada c.s.p. 2.0 mL 1.0 mL 100 mL

PROCEDIMIENTO
El procedimiento para la preparacin de la muestra se lleva a cabo como lo descrito en la gua de laboratorio realizado por el profesor. La cmara se le coloca el cubre objetos y por capilaridad se agrega una pequea gota que cubra ambas cmaras. Para el conteo de leucocitos se realiz con un microscopio en 10X y se llev a cabo en la cmara Neubauer en los 8 cuadrantes, al momento de la observacin se hizo la consideracin de contar los leucocitos que estn sobre una raya de manera a no contar el mismo dos veces en cuadrados diferentes, los localizados en las rayas superior e izquierda se consideran.

ANALISIS Y RESULTADOS
El reactivo de Turk es una mezcla de cido actico y azul de metileno que tiene como fin la hemlisis de los eritrocitos, dejando a los leucocitos intactos y coloreados con lo cual se puede realizar la observacin. Los resultados obtenidos de ambas cmaras se muestran en la figura 1 Para realizar la conversin se tiene en cuenta la formula Nmero de leucocitos/mm3 =

Nmero de clulas contadas x dilucin x 10 Nmero de cuadros grandes contados

Figura 1: Resultados obtenidos al realizar el recuento en la cmara Neubauer. Como se realiza el conteo en los 2 cuadrantes es decir, en 8 cuadros grandes se podra resumir la formula en multiplicar por 25 el resultado de la suma de los leucocitos encontrados en ambos cuadrantes, as encontramos la cantidad de leucocitos por mm3. El resultado obtenido de la suma de ambos cuadrantes es de 289 por tanto:

289 X 25 = 7225 leucocitos por mm3 de sangre.

Si observamos la tabla 1 su valor se encuentra en los valores correspondientes para una edad de 21 aos que es la edad en la que oscila el estudiante al que se le ha realizado el anlisis. CIFRA NORMAL l Al momento de nacimiento 12 horas 24 horas 1 mes 1 ao 12 aos 21 aos 18000 x mm3 promedio 22800 x mm3 promedio 18900 x mm3 promedio 10800 x mm3 promedio 11400 x mm3 promedio 8000 x mm3 promedio 7500 x mm3 promedio

Tabla 1: Cifras normales de la cantidad de leucocitos por mm3 segn la edad

COMPLEMENTARIO

Los leucocitos son una familia de clulas sanguneas protectoras del sistema inmune, ejerciendo funciones muy diferentes. Morfolgicamente se pueden dividir de la siguiente manera: 1 GRANULOCITOS Los granulocitos constituyen una gran proporcin de leucocitos y desempean un papel fundamental en la primera lnea de defensa inmune, especialmente en la lucha contra bacterias y hongos. Recientemente se han desarrollado tcnicas que permiten obtener los concentrados de granulocitos, que demostraron ser tiles en determinadas circunstancias clnicas. Los granulocitos se obtienen generalmente a partir de sangre de un solo donante por citaferesis, que es un mtodo mecnico esencialmente que requiere el uso de un aparato de alta tecnologa y cateterizacin de la vena de tamao grande o mediano. Cada unidad contiene ms de 10.000 millones de granulocitos y cantidades variables de otras clulas sanguneas, incluyendo linfocitos, plaquetas y glbulos rojos. El volumen de cada unidad vara entre 200-400 ml. Los concentrados de granulocitos se debe n almacenar a una temperatura de 20-24 C y se administra dentro de las 24 horas despus de la cosecha. 1,1 Los neutrfilos Los neutrfilos son un tipo de leucocitos, circulan en el torrente sanguneo por los en menos de un da y luego salen hacia el espacio intersticial, donde permanecen durante 2-3 das. Son capaces de defender el cuerpo humano contra las bacterias, ya sea por fagocitosis o por exocitosis. Se dividen en: 1.1.1 Granulocitos juveniles 1.1.2 Granulocitos polimorfonucleares. 1.1.3 Granulocitos segmentados 1.3 Basfilos Los basfilos son un tipo de leucocito, el menos abundante. Tiene ncleo irregular, difcil de ver por la granulacin basfila que lo cubre casi siempre. Tamao semejante al de los segmentados. Se denomina basfilo a cualquier clula que se tie fcilmente con colorantes bsicos (hematoxilina principalmente). Sin embargo, cuando se emplea este

trmino sin ninguna aclaracin adicional, suele referirse a uno de los tipos de leucocitos (glbulos blancos de la sangre) de la familia de los granulocitos. 1.4 Eosinfilos Un eosinfilo es un leucocito de tipo granulocito pequeo derivado de la mdula sea, que tiene una vida media en la circulacin sangunea de 3 a 4 das antes de migrar a los tejidos en donde permanecen durante varios das. Su desarrollo en la mdula sea es estimulado por diversas interleucinas, como la IL-5, la IL-3 y el factor estimulante de colonias granulocito-macrfago. Es caracterstico su ncleo bilobulado, al igual que sus distintivos grnulos citoplsmicos. Estas protenas granulares son responsables de muchas funciones proinflamatorias, principalmente en la patognesis de las enfermedades alrgicas, como clula efectora de hipersensibilidad inmediata, as como en la muerte de parsitos. Una de las enzimas ms importantes que contienen sus grnulos es la histaminasa, que se encarga de hidrolizar la histamina, regulando as la respuesta alrgica.

2. LOS LINFOCITOS Los linfocitos son un subconjunto de los leucocitos .Su tarea principal es la defensa especfica contra sustancias extraas, sobre todo de agentes infecciosos. Su actividad tambin est dirigida hacia el cambio de las clulas propias del cuerpo como las clulas tumorales. 2,1 Los linfocitos B (clulas B) Los linfocitos B son los leucocitos de los cuales depende la inmunidad mediada por anticuerpos con actividad especfica de fijacin de antgenos. Las clulas B, que constituyen un 5 a 15% del total de linfocitos, dan origen a las clulas plasmticas que producen anticuerpos. Los linfocitos son de dos tipos principales, atendiendo a su origen y funcin: clulas T, que se diferencian inicialmente en el timo, y las clulas B, que se diferencian en el hgado y bazo fetal, y en la mdula sea del adulto (la 'B' proviene del latn Bursa fabricii, el rgano en el cual se desarrollan los linfocitos B en las aves). Durante su desarrollo, los linfocitos T y B adquieren receptores especficos para antgenos, el de las clulas B se le conoce como Receptor de linfocito B (BCR). 2,2 Los linfocitos T (clulas T) Los linfocitos T o clulas T pertenecen al grupo de leucocitos que son conocidos como linfocitos. Estas clulas tienen ncleos de forma ovoide que ocupan la mayora del espacio intracelular.

Los linfocitos T son los responsables de coordinar la respuesta inmune celular constituyendo el 70% del total de los linfocitos que segregan protenas o citoquinas. Tambin se ocupan de realizar la cooperacin para desarrollar todas las formas de respuestas inmunes, como la produccin de anticuerpos por los linfocitos B. Se diferencian de los linfocitos B y de las clulas asesinas (natural killer o NK) por poseer un receptor especial en la superficie de la membrana, el Receptor de linfocitos T (denominado TCR por T cell receptor). Sin embargo, en un frotis microscpico de sangre no es posible distinguir uno de otro a simple vista. La denominacin de estos linfocitos como "T" se debe a que su maduracin tiene lugar en el timo (rgano linfoide que constituye uno de los controles centrales del sistema inmunitario del organismo). El nmero de leucocitos en sangre perifrica en un humano promedio es de 4 a 11 x 10 9 por litro, del cual, normalmente, un 20% son linfocitos. Las clulas asesinas naturales (clulas NK).

3. LOS MONOCITOS Los monocitos son un tipo de glbulos blancos agranulocitos. Es el leucocito de mayor tamao, su tamao es de 18 m, y representa del 4 al 8% de los leucocitos en la sangre. Como caractersticas destacables, presenta un ncleo en general arrionado, lobulado o cerebriforme, que se tie irregularmente en forma de "rejilla" o reticular de color violetaazulado. Usualmente el ncleo guarda una proporcin de 2:1 en rea con respecto al citoplasma que lo rodea, y muy frecuentemente presenta una depresin profunda. El citoplasma es abundante y de color gris azulado pudiendo estar acompaado de vacuolas blanquecinas. Los monocitos se generan en la mdula sea y despus viajan por la sangre, para luego emigrar a diferentes tejidos como hgado, bazo, pulmones, ganglios linfticos, huesos, cavidades serosas, etc. Despus de alrededor de 24 horas de permanecer en el torrente sanguneo, los monocitos lo abandonan y atraviesan el endotelio de los capilares o las vnulas poscapilares hacia el tejido conectivo, donde se diferencian rpidamente a macrfagos.
Su principal funcin es la de fagocitar, es decir, comerse a diferentes microorganismos o restos celulares. Para fagocitar se tienen en cuenta diversos factores como la presencia de antgenos. No obstante, el procedimiento es sencillo, y consiste en rodear con los pseudpodos la molcula, accin que es inhibida en los casos en que el macrfago reconoce a la clula como integrante de un tejido propio del organismo, por medio de las protenas del CMH (complejo mayor de histocompatibilidad) presentes sobre las membranas celulares.

CONCLUSIONES
Para la prctica realizada se encontr que la estudiante a la cual se le realiz el anlisis se encuentra en condiciones normales en cuanto al contenido de leucocitos en sangre ya que los resultados obtenidos al compararse con la tabla 1 de valores normales se encuentra muy cercano a lo correspondiente a la edad de 21 aos que es la edad en la que oscila la persona. El azul de metileno presente en el reactivo de Turk es necesario para poder teir los leucocitos y su posterior observacin, su principio es el de teir los cidos presentes en el ncleo, por esto los eritrocitos no se tien ya que no poseen ncleo, adems, debido al cido actico que es el otro componente del reactivo de Turk, produce la hemolisis de los eritrocitos ms no la de los leucocitos. La aplicacin del recuento en cmara de Neubauer tambin puede aplicarse a otros campos ms del tipo biolgico como en el caso del seguimiento del incremento de una poblacin de clulas y/o diferentes microorganismos.

BIBLIOGRAFA

USO DEL HEMOGRAMA LINEAL PARA EL RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS EN EL HOSPITAL REGIONAL HONORIO DELGADO, Carlos Bonifacio Suclly Barriga Arequipa, diciembre 1993 - junio 1994 ATLAS DE HEMATOLOGA CLNICA 3O ED Jacqueline H. Carr,Bernadette F. Rodak Editorial Panamericana 2009 pgs 7_10 MANUAL DE PRCTICAS PARA BIOLOGIA CELULAR Gerardo Andres Torres Rodrguez Prctica 3 RECUENTO DE LEUCOCITOS, Popayn, Noviembre de 2002 pgs 17-22 La fuente http://es.wikipedia.org se utiliz para los trminos basfilo, eosinfilo, linfocito B, linfocito T, monocito. http://leucocitosaltos.blogspot.com/2013/01/definicion-y-tipos-de-leucocitos.html